蒽酮-硫酸法测定蒙药荨麻多糖的含量

蔡 芳 赵 阳 董珉翔 白音夫*

(1.内蒙古自治区中医医院，内蒙古 呼和浩特 010020;

2.内蒙古医科大学2010级研究生，内蒙古 呼和浩特 010110)

荨麻为被子植物门荨麻科(Urticaceae)荨麻属(Urtica Linn.)1年生或多年生草本植物。茎高60～200cm，叶对生，雌雄同株或异株。蒙名哈拉海(意为“有刺”)，是蒙古族习用的药食同源植物，味辛、苦、湿、涩，营养丰富［1］。茎叶上的蜇毛有毒性(过敏反应)，它的毒性使皮肤接触后立刻引起刺激性皮炎，如瘙痒、严重烧伤、红肿等。枯死经霜或经人工处理后为优质饲料。其含有黄酮类、有机酸类、蛋白质、挥发油、萜类、木脂素、多糖等化学成分［2］。目前该药材暂无质量标准。本文对荨麻有效成分多糖进行含量测定，该法可为荨麻药材提供质量标准测定方法。

1 试验材料

葡萄糖、蒽酮、硫酸均为AR(市售)。210型可见紫外分光光度计(日本岛津)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的配制、显色剂的配制及蒽酮-硫酸法最大吸收波长的选择:取葡萄糖约6mg，精密称定，置100mL量瓶中，用水溶解稀释至刻度，即为葡萄糖对照品溶液(60μg·mL-1)。蒽酮溶于硫酸中，配制成0.5%浓度。棕色瓶保存。精密吸取0.6mL对照品溶液，加蒸馏水至2.0mL，加入0.5%的蒽酮硫酸溶液4mL，混匀，同法制的阴性溶液，振摇10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷却30min，同法制得阴性对照溶液，在可见紫外分光光度计200～800nm范围内测定吸收度，结果最大吸收波长λmax=615nm。

2.2 线性化范围试验:精密吸取 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL葡萄糖对照品溶液，加蒸馏水至 2.0mL，加入 0.5%的蒽酮溶液4mL，混匀，振摇10min，置沸水浴中15min，然后置冷水中冷却30min，在可见紫外分光光度计615nm，处测定吸收度。经回归处理回归方程如下A=-0.1120+0.0005x ，r=0.999。在 12.0 ～72.0μg·mL-1范围内葡萄糖量与吸收度成一条不通过原点的直线，供试品溶液测定可采用外标两点法定量。

2.3 供试品溶液的制备:取荨麻粉末(80目，105℃干燥3h，)约2g，精密称定，加水 100 mL，回流提取 3 次，每次30min。合并提取液，浓缩至50mL，加95%乙醇至含量85%，搅拌30min，放置24h，过滤，残渣用85%的乙醇洗涤，然后用丙酮洗涤，自然干燥后用水溶解转移至100mL量瓶内，用水稀释至刻度，即得供试品溶液。精密吸取0.25mL供试品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法显色，测定吸收度。

2.4 精密度试验:精密吸取0.6mL葡萄糖对照品溶液，加蒸馏水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法显色，按上法测定吸收度5 次，吸收度分别为 0.272，0.274，0.277，0.275，0.277，RSD=0.77%。

2.6 重复性试验:取自然干燥的同批荨麻6份，每份2.5g，按2.3项下操作、测定。测定多糖平均结果6.6g%，RSD=2.9%.

2.7 稳定性试验:精密吸取0.6mL葡萄糖对照品溶液，加蒸馏水至2.0mL，照上述蒽酮-硫酸法显色，按上法测定吸收度，每隔20min测定1次。结果，RSD=1.53%，在2h内稳定。

2.8 加样回收率的测定:取荨麻粉末(80目，105℃干燥2h，)约1.0g，6份，精密称定，其中一份不加葡萄糖对照品，作为随行对照，其余5份分别加入精密称定的葡萄糖对照品50mg，余下操作按“2.3供试品溶液制备”方法处理，得到5份加样回收率供试品溶液。精密吸取0.25mL各加样回收率供试品溶液，按上述蒽酮-硫酸法显色，按上法测定吸收度。平均回收率=109.22，RSD=3.54%.

2.9 供试品溶液的制备及含量测定:取不同产地荨麻粉末(80 目，105℃干燥 3h，)约 2.5g，精密称定，加水100 mL，回流提取3次，每次30min。合并提取液，浓缩至50mL，加95%乙醇至含量85%，搅拌30min，放置24h，过滤，残渣用85%的乙醇洗涤，然后用丙酮洗涤，自然干燥后用水溶解转移至100mL量瓶内，用水稀释至刻度，即得供试品溶液。精密吸取0.25mL供试品溶液，加水至2 mL，照上述蒽酮-硫酸法显色，按上法测定吸收度，根据外标法计算不同产地荨麻中多糖含量，内蒙古大青山、蛮汗山、南天门、四子王旗多糖含量分别为6.21%、6.76%、4.34%、6.22%%，平均含量为5.9%。

3 讨论

硫酸-蒽酮法是测定多糖含量的较为常用的方法，其原理为多糖类在浓硫酸作用下先水解为单糖分子，并迅速脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物再与蒽酮结合成有色化合物以比色法在适当波长测定多糖含量。本文采用加水回流提取多糖，提取液加乙醇至85%沉淀，沉淀物用85%乙醇、丙酮洗涤，自然干燥，样品为白色粉末，用蒽酮-硫酸显色法测定多糖含量。测定结果，不同产地荨麻多糖平均含量为5.9%。

［1］内蒙古卫生厅.内蒙古中草药［M］.内蒙古人民出版社，1972;470-472

［2］李宁，张庆林.荨麻属植物的化学成分和药理作用研究进展［J］.中国新药杂志，2007，16(21):1746-1750