六种茶叶碎末对草鱼生长及脂类的影响

■桑八一 张尧北平 宛晓春 周裔彬 杨严鸥 张建立

（1.安徽农业大学教育部农业部茶叶生物化学与生物技术重点实验室，安徽合肥230036；2.安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230036）

草鱼是我国重要淡水经济鱼类，在目前草鱼集约化养殖过程中，激素、生长促进剂、抗病抗菌药物大量使用，不仅导致鱼肉中药残安全问题，而且鱼肉中脂类含量出现过高现象，严重影响了草鱼在国内的消费和出口[1]。茶叶中次生代谢成分，特别是茶多酚，在人[2]、鸡[3-5]、羊[6]中的研究表明，具有抗菌、防癌抗癌、减肥、抗心血管疾病、降脂、改善脂肪酸组成等功效；在鱼中也做了许多研究：将绿茶的鲜叶、干绿茶叶、绿茶副产品和绿茶提取物分别添加到饲料中对橄榄比目鱼进行饲喂，结果显示，绿茶提取物对改善橄榄比目鱼的生长和饲料利用方面的效果最好，且能降低橄榄比目鱼血清中低密度脂蛋白的含量[7]；也有将绿茶添加到饲料中对罗非鱼进行饲喂，结果显示：当添加量为0.5 g/kg时对罗非鱼生长及饲料利用率最有益，而当添加量低于0.5 g/kg时能降低罗非鱼体内油脂的含量[8]；一定量的绿茶和无花果提取物可提高橄榄比目鱼的增重率和饲料利用率，并起到一定的降低脂肪含量的功能[9]，但鲜有对鱼肉中脂类及脂肪酸研究的报道，众所周知，多不饱和脂肪酸的摄入对人体是有益的。而我国是产茶大国，但茶叶深加工、综合利用率不足5%[10]，同时在加工过程中产生了大量的碎茶末及下脚料，利用率低下。因此本试验按地理分布及种类，选取四种绿茶、一种红茶和一种黑茶碎茶末作为草鱼饲料添加剂，对草鱼进行饲喂，研究对草鱼肉中的脂类和脂肪酸的影响，从而为茶叶作为鱼类饲料添加剂提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

祁门红茶（Keemun购于黄山市黄山区正魁源茶业有限公司）；黄山毛峰（MaoFeng购于黄山市歙县徽苑商贸有限公司）；屏山炒青（Pan-fired购于四川省叙府茶业有限公司）；普洱（Pu'er购于云南万红扬茶业有限公司）；霍山黄芽（Huang Ya购于六安金鸡山开源茶厂）；龙井（Dragon Well购于杭州萧山所前茶厂）等下脚料或碎茶购回粉碎后，于-20℃保存。草鱼由安徽巢湖富煌三珍股份有限公司提供，购回后盐水消毒，并进行2周的适应性养殖。

1.2 试验设计和分组

每种茶设0、7、14、28 g/kg 等4个添加梯度（分别用S0、S7、S14、S28表示），每个梯度设3个平行。选择体重为(5.5±0.5)g，生长状况良好的草鱼，随机放入57个水箱中，每箱30尾。分组前饥饿1 d。

1.3 日粮与饲养管理

等氮日粮中分别添加7、14、28 g/kg的上述6种茶粉末，对照组添加纤维素（表1）。制成粒径1.5 mm颗粒饲料，65℃烘干后于-20℃保存备用。每组饲料中蛋白质含量约为33%，脂肪含量约为5.6%。

养殖系统中每个水箱（长×宽×高=60 cm×60 cm×65 cm）体积为200 L，有效水体积为180 L。采用循环水供水，水流量为1.5 L/min。试验期间，水温维持在(27±2)℃，溶氧量≥6 mg/l，光照周期为12D∶12L，7：00～19：00光照。每天9：00和15：00两次饱食投喂，投喂2 h后收集残饵和粪便。试验时间持续8周。

表1 日粮配方和营养成分（%）

1.4 取样

饲喂期间无死鱼，试验结束后，使鱼饥饿1 d以排空消化道内食物。称取每缸草鱼总重。称重后，每箱随机取8条鱼，分别称其体重，测量体长，结束后解剖。取鱼肉后，液氮速冻，-40℃保存。

1.5 指标分析和方法

1.5.1 肌肉脂肪含量的测定

采用Folch等[11]方法略作修改。称取1.5 g鱼肉于离心管，加入20 ml氯仿/甲醇溶液（v∶v=2∶1），32 000 r/min匀浆1 min，再用10 ml氯仿/甲醇溶液清洗匀浆机转头30 s，二者合并，震荡混匀浸提1 h，抽滤后取滤液，加入5%NaCl溶液7.5 ml，使氯仿∶甲醇∶水=8∶4∶3（v∶v∶v）。4 000 r/min离心5 min，取下层氯仿溶液，旋蒸后称重，并用氯仿定容至4 ml，-40℃保存待测。

1.5.2 肌肉中胆固醇含量测定

取1.5.1节氯仿溶液200 μl于50 ml离心管中，N2吹干后加入4 ml无水乙醇和0.5 ml 50%KOH溶液，65℃皂化1.5 h。皂化完成后加入10 ml无水乙醚，涡旋后加入20 ml 3%NaCl溶液，轻微振荡后4 000 r/min离心5 min。取上层乙醚溶液500 μl于2 ml离心管中，N2吹干后加入10 μl乙醚和600 μl胆固醇工作液(浙江东瓯公司)，涡旋振荡于37℃孵育20 min后用酶标仪（Spectra Max 190，Molecular Devices，USA）测定。

1.5.3 肌肉中脂肪酸组成的测定

脂肪酸的甲酯化是采用Morrison等[12]方法略作修改。取1.5.1氯仿溶液0.5 ml于螺口50 ml离心管中，加200 μl内标（十九烷酸甲酯），氮气吹干后加14%三氟化硼-甲醇溶液10 ml充分混匀后置于沸水中加热10 min至变色，冷却后再准确加入20 ml的正己烷和10 ml的水，涡旋后离心（4 000 r/min、5 min），上清液经无水硫酸钠除水后供GC-MS检测。色谱条件如下，色谱柱：Agilent DB-5MS（30 m×0.25 μm×0.25 mm）；载气：高纯氦气，流速1.0 ml/min；柱温：初始温度140℃，保持5 min，以4℃/min上升到250℃，保持2 min，再以3℃/min上升至280℃，保持2 min；进样口温度：250℃；进样方式：分流进样，分流比为7∶1，进样量1 μl。EI离子源；离子能量70 eV；离子源温度：200℃；全扫描测定方式的扫描的范围m/z 30～600。GC-FID色谱条件同GC-MS，FID280度，H230 ml/min,空气300 ml/min。使用峰面积比表示脂肪酸组成。

1.6 统计分析

所得数据以“平均值±标准误”表示，采用IBM SPSS STATISTIC v20进行单因素ANOVA分析，并进行LSD多重比较，显著水平P＜0.05。增重率(%)=(末重-初重)/初重×100；饲料系数(FCR)=(投喂量-残饵重)/(末重-初重)。

2 结果与分析

2.1 添加茶叶碎末对草鱼生长的影响（见表2）

表2 茶叶碎末的添加对草鱼增重率和饲料系数的影响

由表2可知，随着茶末粉添加量的增加，草鱼的增重率均值逐渐降低。S14(P＜0.05)、S28(P＜0.01)组草鱼的增重率均值显著低于对照组，且饲料系数逐渐增大。S7组饲料系数均值较对照组无显著差异，S14、S28组的饲料系数均值极显著高于对照组(P＜0.01)。结果表明低添加量的茶粉对草鱼的增重率及饲料利用率无影响，但当添加量较高时能显著降低草鱼的增重率和饲料利用率。

在6种茶末中，普洱S7组的增重率高于对照组，但不显著；普洱S14组，草鱼的增重率显著低于对照组(P＜0.05)。就饲料系数而言，普洱S7组和霍山黄芽S7组的饲料系数低于对照组，但不显著，S28组的霍山黄芽、龙井及祁红的饲料系数显著高于对照组(P＜0.05)。

2.2 茶叶碎末的添加对草鱼肉中总脂肪含量的影响（见表3）

表3 茶叶碎末的添加对草鱼肉中脂肪含量的影响

由表3可知，添加S7、S14霍山黄芽组较对照组降脂效果显著(P＜0.05)，分别降低为29.2%和24.2%。S7屏山炒青组，草鱼肉中总脂含量显著高于对照组(P＜0.05)。综合结果，当茶叶末的添加量为S7时具有降脂趋势，但当添加量较高时降脂效果不明显，甚至增加了鱼肉中脂肪含量。

2.3 茶叶碎末的添加对草鱼肉中胆固醇含量的影响（见表4）

由表4可知，茶末的添加量为S14时，鱼肉中胆固醇含量显著低于对照组(P＜0.05)，其中S7的黄山毛峰及S14的普洱、祁红、霍山黄芽、屏山炒青降胆固醇的效果较显著（P＜0.05），较对照组的降低率分别约为12.69%、11.19%、14.18%、8.21%、11.94%。

2.4 茶叶碎末的添加对草鱼肉中脂肪酸种类及含量的影响（见表5）

表4 茶叶碎末的添加对鱼肉中胆固醇含量的影响

表5 茶叶碎末添加对草鱼肉中脂肪酸含量的影响

表5 (续二)茶叶碎末添加对草鱼肉中脂肪酸含量的影响

表5 (续三)茶叶碎末添加对草鱼肉中脂肪酸含量的影响

由表5可知，随着茶叶添加量的增加，草鱼肉中饱和脂肪酸（SFA）和单不饱和脂肪酸（MUFA）的含量有降低趋势，多不饱脂肪酸（PUFA）的含量有增加趋势。添加量为S28时，饱和脂肪酸（SFA）含量极显著低于对照组（P＜0.01）；且十六烷酸（C16∶0）和十八烷酸（C18∶0）的含量显著和极显著低于对照组（P＜0.05，P＜0.01）；多不饱和脂肪酸亚油酸（C18∶2）的含量显著高于对照组（P＜0.05）。S14的普洱及S28的龙井、屏山炒青可显著降低草鱼肉中硬脂酸（C18∶0）的含量（P＜0.05）；S14的龙井显著降低 C16∶1的含量（P＜0.05）；S28的普洱组中，二十碳四烯酸（C20∶4）显著高于对照组（P＜0.05）；S14的霍山黄芽可显著提高二十碳四烯酸（C20∶4）和二十碳五烯酸（C20∶5）的含量（P＜0.05）。

3 讨论

3.1 鱼肉中脂肪

Abdel等[13-14]研究表明,1%和2%的绿茶可提高罗非鱼全鱼脂肪含量；此现象与本试验S28组并没有表现出降脂作用的结果切合，对此Abdel认为全鱼脂肪含量的提高是由于茶叶对罗非鱼沉积速率和(或)合成速率的影响。与此相反，Cho等[15-16]认为，5%的茶叶及副产物不能显著降低比目鱼鱼肉中脂肪含量，但试验组鱼肉脂肪含量均较对照组低，同时茶叶提取物可降低肝脏脂肪含量；Imada等[17]认为，高添加量的黑茶能够抑制小鼠体内脂肪代谢，促使脂肪在小鼠腹腔内积累，从而使肌肉中脂肪含量降低，上述报道与本试验中S14组能降低鱼肉中脂肪含量的结果一致。

3.2 胆固醇

本试验中S14组鱼肉中胆固醇含量降低可能是因为茶多酚可减少甘油三酯和胆固醇的吸收，并增加其排泄。试验中普洱茶降胆固醇效果显著的原因，可能与Miyata等[18]研究的结果表明的普洱茶中EC和丰富的茶黄素降胆固醇作用一致。

3.3 脂肪酸组成

Kinsella等[19]认为，多不饱和脂肪酸的摄入可降低人患冠心病的几率；Ward等[20]认为，DHA的摄入有益于人体脑和眼的发育。本试验用添加了茶叶碎末的饲料对草鱼进行饲喂，提高了草鱼肉中多不饱和脂肪酸的含量，对于草鱼的养殖，提高草鱼肉的品质以及提高茶叶的综合利用率具有积极的影响。Thawon⁃suwan 等[21]、Sant'Ana等[22]、Hrelia等[23]、Trattner等[24]的研究结果均表明，茶多酚较强的抗氧化作用阻止了脂肪酸的氧化，降低了饱和脂肪酸，同时增加了多不饱和脂肪酸的含量。

4 结论

①当茶叶碎末的添加量较低时对草鱼的增重率及饲料利用率无影响，但当添加量较高时能显著降低草鱼的增重率和饲料利用率。其中添加S7的普洱或霍山黄芽对草鱼的生长作用较好。

② 霍山黄芽S7、S14组较对照组的降脂效果显著（P＜0.05），分别降低29.2%和24.2%，因此霍山黄芽作为草鱼饲料添加剂，可降低草鱼肉中脂肪的含量。

③ S14组降胆固醇效果较显著（P＜0.05）。不同种茶叶降胆固醇效果不同，其中S7黄山毛峰，S14普洱、祁门红茶、霍山黄芽和屏山炒青降胆固醇的效果显著(P＜0.05)，较对照组的降低率分别约为12.69%、11.19%、14.18%、8.21%和11.94%。

④茶叶的添加可降低鱼肉中饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸的含量，同时提高多不饱和脂肪酸含量。其中普洱S14、龙井S28、屏山炒青S28可显著降低草鱼肉中C18∶0的含量（P＜0.05），龙井S14显著（P＜0.05）降低C16∶1的含量，普洱S28、霍山黄芽S14可分别显著提高C20∶4和C20∶5的含量（P＜0.05）。