不同产地虎杖中虎杖苷和总黄酮含量比较

方文清，董昌平

(1. 福建生物工程职业技术学院，福建 福州 350002; 2. 福建省南平市药品检验所，福建 南平 353000)

虎杖为廖科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc. 的干燥根茎和根，具有祛风除湿、清热解毒等功效，用于治疗风湿痹痛、痰多咳嗽、跌打损伤等症。据调查，市场出售的虎杖药材来源地较多。本研究参考相关规定[1-6]测定了不同产地虎杖中虎杖苷和总黄酮的含量，为评价虎杖质量提供依据。

1 仪器与试药

Agilent1100 型高效液相色谱仪;UV2401 型紫外分光光度计(日本岛津公司);KQ3200E 型超声仪;XS205DU 型电子天平;Millipore 超纯水器(梅特勒公司)。样品经福建省药品检验所胡敏老师鉴定为廖科植物虎杖。虎杖苷对照品(批号为111575 -200502)和芦丁对照品(批号为100080-200707，含量为92.5%)，均购自中国药品生物制品检定所;乙腈为色谱纯，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、磷酸、乙醇为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 虎杖苷含量测定(高效液相色谱法)

2.1.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-1%磷酸(50 ∶50);检测波长:306 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;进样量:10 μL。在此条件下，虎杖苷与样品中其他成分达到基线分离，见图1。

2.1.2 溶液制备

称取虎杖苷对照品16.98 mg，精密称定，置10 mL 容量瓶中，用60%乙醇溶解并定容，制得对照品贮备液(1.698 0 g/L 虎杖苷)。精密吸取对照品贮备液1 mL，置10 mL 容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(含0.169 8 g/L 虎杖苷)。取样品细粉约0.8 g，置100 mL 锥形瓶中，精密加入60%乙醇50 mL，称定质量，回流30 min，取出，冷却，用60%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.1.3 方法学考察

线性关系考察:取对照品溶液，分别依法进样1，2，5，10，20 μL，记录色谱图。以峰面积(Y)为纵坐标、进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=3 153.541 X-18.423，r=0.996 6(n=5)。结果表明，虎杖苷进样量在0.169 8 ～3.396 0 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样5 次，每次10 μL。结果虎杖苷峰面积的RSD 为0.13%(n =5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液及对照品溶液，分别于0，1，2，4，8，12 h 时进样测定。结果供试品溶液中虎杖苷峰面积的RSD为0.85%(n=6)，对照品溶液中虎杖苷峰面积的RSD 为0.67%(n=6)，表明供试品溶液与对照品溶液在12 h 内稳定。

重复性试验:取同一批样品，按拟订方法平行制备供试品溶液6 份，进样测定。结果虎杖苷峰面积的RSD 为1.19%(n=6)，表明该方法重复性良好。

回收率试验:取已知含量的样品约0.4 g，加入对照品贮备液2 mL，按拟订方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 虎杖苷加样回收试验结果( n=5)

2.1.4 样品含量测定

取各样品粉末约0.8 g，按拟订方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定。结果见表2。

表2 不同产地虎杖药材含量测定结果( n=3)

2.2 总黄酮含量测定(紫外分光光度法)

2.2.1 溶液制备

称取芦丁对照品50.52 mg，精密称定，置10 mL 容量瓶中，加70%乙醇溶解并定容，即得对照品贮备液(含4.673 1 g/L 芦丁)。精密吸取对照品贮备液1 mL，置25 mL 容量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(含0.186 9 g/L)。取细粉约0.2 g，精密称定，置100 mL 锥形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，称定质量，回流30 min，放冷，用70%乙醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.2 方法学考察

标准曲线制备:精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分别置25 mL 容量瓶中，加水至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6 min，加5%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液4 mL，再加70%乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以70%乙醇为空白，在500 nm 波长下测定吸光度值，以吸光度值(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=20.642 X+0.013 5，R2=0.999 7(n=6)，见图2。

图2 芦丁对照品标准曲线

精密度试验:精密吸取对照品溶液3.0 mL，置25 mL 容量瓶中，依法测定吸光度值，重复进样测定6 次。结果吸光度值的RSD为0.12%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液1 mL，按拟订方法置25 mL 容量瓶中，依法测定，间隔时间5 min。结果吸光度值的RSD 为1.96%(n=6)，表明供试品溶液在30 min 内稳定。

重复性试验:取同一样品5 份，按拟订方法制备供试品溶液，精密吸取1.0 mL，置25 mL 容量瓶中，依法测定吸光度值。结果平均含量为10.96%，RSD 为1.90%(n=5)，表明方法重复性良好。

回收率试验:取已知含量的样品5 份，每份0.1 g，精密称定，分别精密加入对照品贮备液2.3 mL，按拟订方法制备供试品溶液，精密吸取1 mL，置25 mL 容量瓶中，依法测定吸光度值。结果见表3。

表3 总黄酮加样回收试验结果( n=5)

2.2.3 样品含量测定

取各样品粉末约0.2 g，按拟订方法制备供试品溶液，精密吸取1 mL，置25 mL 容量瓶中，依法测定吸光度值。结果见表2。

3 讨论

虎杖苷的含量测定中，考察了索氏提取、回流提取、超声提取方法[2-3，6]，结果前两者的虎杖苷含量高且较接近，超声提取的含量低，为了节约时间且操作简便，选择回流法作为提取方法;考察了不同的乙醇比例对提取含量的影响，结果显示，60%乙醇提取的虎杖苷含量高;考察了回流时间，结果30 min 时虎杖苷含量提取已达最高。

总黄酮的含量测定中，考察了回流提取、超声提取方法，结果回流提取的含量明显高于超声提取;考察了不同提取溶剂，60%，70%，80%，90%甲醇与50%，60%，70%，80%乙醇，结果70%甲醇与60%乙醇的提取效果最好，乙醇低毒低价，故选择60%乙醇作为提取溶剂;考察了回流时间，结果30 min 时总黄酮含量提取已达最高，故选择提取时间为30 min。

不同产地虎杖的虎杖苷和总黄酮含量差异较大，其中四川绵阳产的最高，浙江舟山和福建福州产的最低。

本研究中的测定方法操作简便、准确、可靠、重复性好，为虎杖质量评价提供了可靠依据。

[1] 程茜菲，常 青，刘 琦，等. 高效液相色谱法同时测定维血宁中虎杖苷、大黄素-8 -O-β-D-葡萄糖苷、大黄素、大黄素甲醚的含量[J]. 中南药学，2013，11(9)：686 -689.

[2] 李玉娇，李 清，马 晶，等. 虎杖中虎杖苷HPLC 含量测定的方法学验证研究[J]. 药学学报，2013，48(4)：536 -540.

[3] 王 君，方 芳. 虎杖苷在心脑血管系统的药理研究进展[J]. 医学综述，2012，18(13)：2 105 -2 107.

[4] 汪天明，王晓梅. 虎杖苷药理作用研究的新进展[J]. 宿州学院学报，2007，22(2)：114 -116.

[5] 刘淑聪，张宝喜，杨世颖，等. 虎杖中虎杖苷和白藜芦醇含量标准值与不确定度评估分析方法研究[J]. 中国药业，2013，22(18)：33 -36.

[6] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010：194 -195.