藏药八味獐牙菜丸中芒果苷的含量测定

逯雯洁，王慧春，刘亚蓉，魏玉海，刘学良，刘海青 （青海省食品药品检验所，青海 西宁810003）

八味獐牙菜丸为藏医传统名方，藏文名“蒂达杰巴日布”，收载于1995年《卫生部药品标准》藏药标准（标准号为：WS3－BC－0241－95）［1］。临床上用于胆囊炎和初期黄疸型肝炎等症的治疗。主要成分由獐牙菜、兔耳草、波棱瓜子、角茴香、榜嘎、小檗皮、岩参、木香八味藏药材组成。本品君药獐牙菜为龙胆科植物，是被广泛用于治疗肝胆疾病的药物［2］，其主要化学成分为獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷、当药醇苷、异荭草苷等，芒果苷是獐牙菜属植物中的有效成分，具有抗炎、抑菌、抗病毒、利胆和抗氧化等功能［3］。原卫生部颁藏药标准中仅对木香、小檗皮进行鉴别，并无定量测定内容，为有效的定量控制药品质量，本实验建立高效液相色谱方法对八味獐牙菜丸中芒果苷的含量进行了测定研究，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters1525型高效液相色谱仪，Waters2489紫外检测器；电子天平（METTLER AB204－S，瑞士METTLER公司）；电子天平（METTLER TOLEDO，瑞士METTLER 公司）；Milli－QA 超纯水器。

1.2 试药 芒果苷对照品（批号111607－200301）供含量测定用，购自中国食品药品检定研究院。甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。八味獐牙菜丸样品由两家不同药厂提供，分别是青海金诃藏药药业股份有限公司（批号20090722、20100420），宁夏多维药业有限公司（批号060601、

080304、080911、090310、090311、091212、091209、090312）。

阴性样品分别按照按原标准制备工艺去除獐牙菜后制得。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 Waters SunFire C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；甲醇－0.1%冰醋酸（21∶79）为流动相；流速1 mL·min－1；柱温：25 ℃；检测波长260 nm；进样量10μL。理论板数按芒果苷峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芒果苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.054 0 mg的芒果苷对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 提取方法的考察

（1）超声提取法：精密称取本品（批号20090722）1.001 2 g置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定，超声提取（功率250 W，频率50 kHz）30 min，放冷后补足减失质量，摇匀，滤过后取续滤液，即得。

（2）加热回流提取法：精密称取本品（批号20090722）1.000 4 g置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定，加热回流提取30 min，放冷后补足减失的质量，摇匀，滤过后取续滤液，即得。

对上述2种提取方法所得供试品溶液按照“2.1”项方法测定，测定结果相近，故确定选择提取相对简便的超声提取法做为供试品的制备方法。

2.3.2 提取时间的考察 将本品（批号20090722）研细，精密称取1.001 8 g于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，称定，超声提取（功率250 W，频率50 kHz）20，30，40 min，放冷，再称定，补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按照“2.1”项方法测定芒果苷含量。结果表明30，40 min所测得的芒果苷含量接近，故提取时间选择30 min。

2.4 阴性对照溶液的制备 按照处方组成，取除獐牙菜外的其余药味，按供试品溶液制备项下的方法制备阴性对照溶液。进行测定，阴性溶液在对照品溶液出峰位置上无峰出现，表明无干扰，见图1。

图1 芒果苷高效液相色谱图A.样品；B.对照品；C.阴性；1－芒果苷Fig 1 HPLC chromatogram of mangiferinA.sample；B.standard；C.negative sample；1－mangiferin

2.5 线性关系考察 精密称取芒果苷对照品10.8 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制成质量浓度为0.108 0 mg·mL－1的对照品储备溶液。取上述对照品储备溶 液 分 别 制 成 质 量 浓 度 为0.003 24，0.006 48，0.012 96，0.043 20，0.064 80，0.108 00 mg·mL－1的溶液，分别精密吸取5μL按上述条件注入色谱仪测定，以进样量（μg）为横坐标和峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y ＝4 279 440.4 X－17 761.9，r＝0.999 7，表明进样量在0.016 2～0.540 0μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度考察 精密吸取质量浓度为0.054 mg·mL－1的对照品溶液10μL，重复进样5次，按色谱条件操作进行，测峰面积，以峰面积计算，结果RSD＝0.94%。

2.7 稳定性试验 取上述供试品溶液（批号20090722）分别在0，2，4，8 h进行，进样量10μL，测定芒果苷峰面积，以峰面积计算，结果RSD＝0.29%。

2.8 重复性试验 按照上述含量测定方法对相同批号样品（批号20090722）制备5份供试液，分别进样10μL，测得峰面积，计算RSD＝1.89%。

2.9 加样回收率试验 精密称取芒果苷对照品适量，加甲醇溶解配制成0.054 0 mg·mL－1的溶液，摇匀；称取已知含量的八味獐牙菜丸样品（批号20090722，含量为0.43 mg·g－1）0.7 g，精密称定，称取6份，置具塞锥形瓶中；每份中均同时加入芒果苷对照品溶液（0.054 0 mg·mL－1）7 mL，并精密加入甲醇13 mL，按供试品溶液制备项下的方法制成供试品溶液，并按上述色谱条件测定芒果苷的含量，计算回收率。芒果苷加样回收率结果见表1。结果表明方法可行。

表1 芒果苷回收率测定结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery of mangiferin（n＝6）

3 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，按上述色谱条件对10批样品进行含量测定，以外标一点法计算样品中芒果苷的含量，10批样品（批号20090722，20100420，20110313，20090404，20090111，080911，090310，090312，060601，091212）含 量 分 别 为0.43，0.79，0.16，0.10，0.09，0.09，0.06，0.05，0.16，0.07 mg·g－1。

4 讨论

由于原标准对成药中獐牙菜未进行定量控制，因此增订了用高效液相法测定獐牙菜中芒果苷的含量测定项。含量测定方法优化时，尝试用甲醇－水，甲醇－冰醋酸溶液，甲醇－磷酸溶液等多种流动相，最后选择甲醇－0.1%冰醋酸为流动相，被测组分达到良好地分离度并且有较好的峰形。

10 批 样 品 含 量 分 别 为0.43，0.79，0.16，0.10，0.09，0.09，0.06，0.05，0.16，0.07 mg·g－1，差 异 较 大，查 阅 文献［4－6］，獐牙菜属植物种类较多，药材含量成分差异也较大，还可能受到地域、生长期、储藏时间等因素的影响。而由于此品种为本所藏药标准提高课题，曾赴药厂实地考察，发现两厂家投料所用原料药材为獐牙菜属不同种植物，青海金诃藏药药业股份有限公司用印度獐牙菜投料，而宁夏多维药业用川西獐牙菜作为原料药材投料，分别各取两厂家3批原药材按正文样品含量测定方法进行比较，发现印度獐牙菜原药材芒果苷含量分别为2.35、4.20、0.78 mg·g－1，明显优于川西獐牙菜芒果苷含量（0.50、0.41、0.33 mg·g－1）。由此可见，提高本品藏药标准，还需进一步将处方组成细化并制定合理的原药材含量测定指标。

［1］ 卫生部药品标准委员会.卫生部药品标准（藏药第一册）［S］.1995：244.

［2］ 杨永昌，何廷农，卢生莲，等.藏药志［M］.西宁：青海人民出版社，1991：112－113.

［3］ 丁凤娟，朱雯，于莹，等.HPLC 分析四种獐牙菜中芒果苷的质量分数［J］.大连工业大学学报，2009，28（6）：401－403.

［4］ 孙磊，田金改，金宏宇，等.HPLC 法测定印度獐牙菜中5种有效成分含量［J］.中国药事，2010，24（7）：687－689.

［5］ 保仪，吉文鹤，马玉花，等.HPLC 测定四川及青海地区獐牙菜植物中6种主要成分的含量［J］.中国中药杂志，2006，31（24）：2036－2038.

［6］ 夏从龙，张浩，刘光明，等.獐牙菜属及近缘植物中4种有效成分HPLC 定 量 分 析［J］.药 物 分 析 杂 志，2007，27（8）：1161－1164.