强精胶囊对精索静脉曲张大鼠附睾显微结构的影响

尹 静，王 超，张蜀武，曲晓伟

精索静脉曲张(varicocele,VC)是引起男性不育常见的原因之一，成年男性中有2%～22%的人有此疾患。在精液常规检查异常的病人中, 患病率可高达25%～40%[1]。手术是治疗VC的常用方法之一，但很多学者对手术在改善精液质量和增强生育能力方面的作用提出了质疑[2]。我们通过观察强精胶囊对VC大鼠附睾形态结构以及精子质量的影响，探讨该复方中药对附睾显微结构可能的调控机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 青春期雄性SD 大鼠100 只，2 月龄，体质量（200±20）g，常规饲养（成都中医药大学动物实验中心提供）。整个实验过程中动物自由摄食饮水，室温控制在20～25℃，相对湿度40%～60%。

1.2 主要设备 北京伟力彩色精子质量检测系统、MA110 电子天平、德国莱卡石蜡切片机、奥林巴斯显微镜BX41 型、MIAS-2000 型图形图象分析系统等。

1.3 动物模型制备 大鼠驯化饲养1 周，观察无异常后造模。随机抽取10只为假手术组，其余90只以缩窄左肾静脉建立大鼠VC模型。模型建立参照文献方法[3]，用5%水合氯醛(6 mL/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠仰卧固定于夹板。常规消毒，腹部正中切口，暴露出左肾、左肾上腺静脉、下腔静脉、左肾静脉及左精索静脉入左肾静脉处，分离左肾静脉。在左肾上腺静脉和精索静脉内侧、下腔静脉外侧的左肾静脉下分离出一通道，在通道内穿出一根3/0 丝线。置一根直径约为0.55 mm 的金属杆，与左肾静脉一起结扎，抽出金属杆，使左肾静脉复通，造成左肾静脉的部分狭窄，使左肾静脉直径缩小约一半。假手术组大鼠显露左肾静脉过程相同，但不结扎。

1.4 动物模型分组 于造模后4 周麻醉大鼠，剖腹观察。用带测微器的目镜测量精索静脉直径，观察其曲张程度。假手术组大鼠左侧精索静脉未见扩张，模型大鼠则明显扩张，直径约是假手术组3 倍，呈膨胀弯曲状，且两个肾脏大小无明显差别。共计72 只模型大鼠达到此效果。另18 只大鼠由于麻醉过量、手术失败、术后感染死亡等因素退出实验。将成功模型大鼠（n=72）随机分为模型组、强精胶囊高中低剂量组、五子衍宗胶囊组、少腹逐瘀胶囊组，每组12只。

1.5 药物制备 强精胶囊方由仙灵脾、仙茅、菟丝子、枸杞子、熟地、当归、川芎、红花、丹参、鸡血藤、生黄芪、川牛膝组成（四川省中西医结合医院中药房提供）。按照人与大鼠体表面积比换算等效剂量，高、中、低剂量组大鼠给药剂量为2.16 g/kg、1.08 g/kg、0.54 g/kg，分别相当于成人日用量的20、10、5倍。使用前用生理盐水分别配制成0.216 g/mL、0.108 g/mL、0.054 g/mL。五子衍宗胶囊（河北紫薇山制药有限责任公司）组给药剂量为1.30 g/kg，相当于成人日用量的20 倍，用前用生理盐水配制成0.130 g/mL 的混悬液。少腹逐瘀胶囊（东阿澳东药业有限公司）组给药剂量为1.46 g/kg，相当于成人日用量的20 倍，用前用生理盐水配制成0.146 g/mL的混悬液。

1.6 药物用法 各组大鼠灌胃均1次/d，连续给药4周。假手术组与模型组给予生理盐水10 mL/kg；强精胶囊高、中、低剂量组、五子衍宗胶囊组、少腹逐瘀胶囊组分别给予上述混悬液10 mL/kg。

1.7 精液标本制备与检测 于末次给药后24 h，称大鼠体质量，断颈处死，无菌条件下摘下左侧附睾组织，用眼科剪在附睾尾部剪一个小口，收集精液。用伟力彩色精子质量检测系统检查精液常规。

1.8 附睾光镜标本制备与检测 称重后，迅速置于10%中性福尔马林液中,固定48 h，逐级酒精脱水,二甲苯透明、石蜡包埋, 常规切片5 μm，60 ℃烤箱烤8 h，玻片用APES 处理。光学显微镜观察并摄像图像保存。

1.9 统计学分析 数据采用SPSS 16.0 统计软件处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析，其中方差齐者用LSD法，方差不齐者用Dunnett T3 法检验，以P ＜0.05 为显著性差异标准。

2 结果

2.1 一般情况 造模后各组大鼠出现不同程度的摄食减少，精神萎靡，毛发枯黄，缺乏光泽，逐渐出现恶寒倦卧，反应迟钝，少动，体毛干枯脱落，消瘦等症状，在灌胃药物1 周后逐渐开始改善。治疗过程中模型组大鼠死亡3只，强精胶囊低、中剂量组各1只，高剂量组2只，五子衍宗胶囊组1只，少腹逐瘀胶囊组2只，共10只。死亡原因为术后感染、灌胃操作不当及大鼠相互斗咬等。

2.2 附睾精子活力与密度 模型组大鼠附睾精子活力与密度低下；强精胶囊高剂量组、中剂量组以及五子衍宗胶囊组精子活力与密度较模型组明显增高(P ＜0.01)；强精胶囊高剂量组精子活力与密度较中、低剂量组、五子衍宗胶囊组、少腹逐瘀胶囊组明显增高(P ＜0.01)；强精胶囊中剂量组、五子衍宗胶囊组精子活力与密度较低剂量组、少腹逐瘀胶囊组明显增高(P ＜0.01)，但强精胶囊中剂量组与五子衍宗胶囊组相比差别不明显(P ＞0.05)；强精胶囊低剂量组精子活力与密度与少腹逐瘀胶囊组相比差别不明显(P＞0.05)。见表1。

表1 各组大鼠精子活力、密度的比较（x±s）

2.3 附睾的形态结构 光镜下，假手术组附睾上皮是由主细胞、基细胞、晕细胞和亮细胞等构成的假复层柱状上皮，附睾管各段所含的各种细胞比例各不相同，具有细胞分布的区域性特征，但均以主细胞数量最多（图1-a）。附睾管腔面可见刷状缘（图1-b），管腔内含大量正常精子，附睾间质内可见正常纤维、成纤维细胞、小血管等。

模型组表现为间质水肿，小血管淤血扩张（图2-a）；大量淋巴细胞和巨噬细胞浸润；间质中出现精子肉芽肿（图2-b），其中心是大量溢出的精子，周围出现大量圆形和上皮样的精子吞噬细胞。附睾管萎缩，上皮退化变性，细胞排列紊乱，甚至出现空泡化变性（图2-c），上皮内晕细胞和亮细胞数量明显增加。管腔内出现大量未成熟生精细胞、精子残余体、巨噬细胞、畸形精子等（图2-d）。

强精胶囊高剂量组附睾上皮以主细胞为主（图3-a），细胞排列较为整齐，有少量淋巴细胞和巨噬细胞浸润（图3-b），附睾间质水肿不明显，可见正常纤维、成纤维细胞，附睾管腔面可见刷状缘（图3-c），管腔内含大量正常精子和少量精子残余体、畸形精子。

强精胶囊中剂量组附睾上皮仍以主细胞为主（图4-a），但上皮内晕细胞和亮细胞数量增加，细胞排列不太整齐，可见上皮退化变性，有淋巴细胞和巨噬细胞浸润、积聚（图4-b），附睾间质可见轻度水肿和小血管扩张（图4-c），管腔内可见正常精子、未成熟生精细胞、精子残余体、畸形精子（图4-d）。五子衍宗胶囊组除附睾间质水肿和小血管扩张较明显外，其余改变与强精胶囊中剂量组相似（图5-a）。

强精胶囊低剂量组大鼠附睾的主要病理表现在模型组的基础上有轻微改善，但不明显（图6）。少腹逐瘀胶囊组与强精胶囊低剂量组相似（图7）。

3 讨论

中医学认为，精索静脉曲张性不育多属“筋瘤”、“筋疝”、“无子”等范畴，其病因病机复杂，概括起来不外乎本虚标实，以肾虚为本，血瘀为标，肾虚导致血瘀，血瘀加重肾虚，互为因果，相互影响，造成生殖之精化生障碍，从而导致不育[4]。强精胶囊是我们根据古今医家对VC性不育肾虚血瘀基本病机的认识，结合多年临床实践经验而创立的补肾活血方。本方可补肾以生精，活血以化淤，标本兼顾，使肾气得以充，瘀血得以去，外肾的生精功能得以恢复，生殖之精不断产生。经多年临床应用及临床观察，取得了较好疗效。本研究中对照组采用具有补肾作用的五子衍宗胶囊和具有活血作用的少腹逐瘀胶囊治疗，分别对精索静脉曲张肾虚病机和血瘀病机进行探讨。

现代医学关于精索静脉曲张性不育发生机制的研究尚未完全明确。VC 时，附睾静脉血液淤积，造成回流障碍，动脉灌注阻力增加使动静脉灌注失衡，造成局部缺血、代谢产物堆积，甚至引起血管内皮受损，血管活性物质异常释放，白细胞聚集或血小板黏附，血液循环功能持续性障碍，最终引起附睾管上皮细胞代谢紊乱，导致结构发生改变。附睾上皮结构改变必然导致其分泌功能异常，从而改变管腔内液体的成分而使微环境发生改变，使精子在附睾内的成熟过程受到影响。其原因可能与精索静脉曲张改变了附睾的血流动力学，影响了附睾组织的正常代谢有关。因此，VC 引起附睾结构改变、细胞凋亡及其微环境发生改变可能是引起不育的原因之一。

图1 假手术组HE（×400）

图2 模型组HE（×400）

图3 强精胶囊高剂量组HE（×400）

图4 强精胶囊中剂量组HE（×400）

图5 五子衍宗胶囊组HE（×400）

图6 强精胶囊低剂量组HE（×400）

图7 少腹逐淤胶囊组HE（×400）

本实验以附睾结构与精子成熟的相关性为切入点，观察强精胶囊对模型大鼠附睾精子活力、密度及附睾形态结构的影响。结果显示，强精胶囊可提高精子密度、活力，改善VC 对附睾形态结构的损伤；仅有补肾作用的五子衍宗胶囊和仅有活血作用的少腹逐瘀胶囊对VC造成附睾形态结构损伤改善不明显。因此，推测强精胶囊提高生育力的可能作用机制为：强精胶囊可以改善睾丸、附睾与精索内局部微循环，促进局部血液的流动，抑制血管活性物质异常释放，抑制间质水肿、上皮细胞变性，抑制细胞过度凋亡，从而改善其合成、分泌以及转运功能，改善附睾腔液微环境，进而促进附睾精子成熟。本实验为强精胶囊的临床运用提供了理论依据，并有望为精索静脉曲张性不育的临床治疗开拓新的途径。

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