黄芪多糖对猪瘟弱毒疫苗的免疫增强作用

王超锋，王远微

（1.河南省商丘市动物卫生监督所，河南 商丘 476000；2.西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041）

多糖是黄芪的重要活性成分之一，具有免疫调节、 抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗辐射、抗衰老、抗应激等多种生物学活性。其中，黄芪多糖（APS）能全面提高机体的免疫力，已为大量研究所证实。本研究旨在探讨黄芪多糖对猪瘟弱毒疫苗的免疫增强作用。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 黄芪多糖粉（批号：1101091；规格：100g/袋），由北京某生物科技有限公司生产；猪瘟活疫苗（脾淋源，批号：1105032），由山东某生物科技有限公司生产；鼠抗猪 CD3（批号：E2509）、CD4（批号：F4711）、CD8荧光标记单克隆抗体（批号：D6809），均购自美国Southern Biotech公司；猪瘟正向间接血凝抗体检测试剂盒（批号：20110922），购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.2 试验动物分组及用药 由某商品猪场购回22日龄三元杂交猪 40 头，体重（7.2±1.01）kg，隔离饲养观察7d，未见异常。随机等分为4组，1组仔猪的饲料中不添加任何药物，作为对照组；2～4组饲料中分别按2×10-4、3×10-4、4×10-4剂量加入黄芪多糖，作为试验组。连续给药7d。

1.3 免疫接种 给药结束当天，所有仔猪颈部肌肉注射猪瘟疫苗1头份/只。

1.4 免疫效果评价

1.4.1 猪瘟抗体水平的测定 分别于免疫接种当天及第1、3、5周采集各组仔猪的前腔静脉血，分离血清，按试剂盒说明书检测血清中的猪瘟抗体水平。

1.4.2 T淋巴细胞亚群检测 分别于免疫接种当天及1、3、5周采集各组仔猪的前腔静脉血，用肝素抗凝，取抗凝血100μL，分别加入2 μL鼠抗猪荧光标记CD3、CD4、CD8单克隆抗体，避光孵育30min，然后加入10μL红细胞裂解液，轻轻混匀，避光孵育15min，1800r/min离心5min，弃上清；再加2mL PBS液清洗2次，1200r/min离心5min，弃上清；然后加500μL PBS液重悬，采用流式细胞仪检测，每个标本检测10000个细胞，记录荧光标记阳性细胞数。试验数据用SPSS16.0软件进行统计处理，结果用均值（）±标准差（SD）表示。

2 结果

2.1 猪瘟疫苗和口蹄疫疫苗的抗体水平 抗体检测结果发现，该受试仔猪的猪瘟母源抗体水平较低，均在2以下，且组间抗体水平差异显著。免疫后从第1周起，饲喂不同剂量黄芪多糖后，抗体水平均显著高于对照组1个滴度以上，见表1。说明黄芪多糖能明显提高猪瘟弱毒疫苗的免疫抗体水平。

表1 免疫接种后不同时间的猪瘟抗体（2n，SD）

表1 免疫接种后不同时间的猪瘟抗体（2n，SD）

注：表中*表示与对照组相比差异显著（P＜0.05）。

组别 免疫接种时间（周）0 1 3 5 1 1.40±0.35 2.25±0.67 3.49±0.48 5.67±1.10 2 1.70±0.82 3.97±0.77* 5.10±0.22* 6.95±1.05*3 1.80±0.75 3.76±0.69* 5.38±0.67* 7.29±0.98*4 1.65±0.64 3.95±0.97* 5.23±0.86* 7.32±1.01*

2.2 T细胞亚群的动态变化 流式细胞仪检测发现，不同剂量的黄芪多糖具有提高猪CD3+和CD4+T淋巴细胞亚群百分含量的趋势，但给药组与对照组差异不显著（P＞0.05），见表 2。

表2 免疫后不同时间各组T细胞亚群的测定结果（SD）%

表2 免疫后不同时间各组T细胞亚群的测定结果（SD）%

项目 免疫时间（周）0 1 3 5 CD3+ 对照组 48.90±8.14 49.04±5.64 48.81±5.35 50.04±16.00 2×10-4 47.64±12.30 53.15±3.41 50.62±4.10 51.74±17.63 3×10-4 48.24±5.45 52.61±4.46 51.10±8.15 52.48±11.30 4×10-4 46.62±5.36 52.38±8.31 49.88±6.77 52.43±13.52 CD4+ 对照组 28.63±9.63 26.16±4.34 27.98±5.53 26.52±6.04 2×10-4 27.86±8.51 28.65±8.13 30.24±4.84 28.50±4.45 3×10-4 29.93±6.13 29.10±6.47 31.87±6.84 29.87±4.90 4×10-4 30.51±8.64 28.51±5.14 31.48±6.70 28.21±5.89 CD8+ 对照组 20.83±8.15 22.64±7.03 23.21±6.25 25.36±8.33 2×10-4 18.10±9.29 21.36±5.75 22.70±8.76 23.47±6.24 3×10-4 19.31±4.54 21.88±8.16 23.76±9.35 24.40±6.27 4×10-4 20.79±6.30 20.03±6.52 23.64±9.46 23.93±8.41

3 结论及分析

我国商品猪群猪瘟弱毒疫苗的接种普遍在20～28d，但抗体效价和抗体阳转率一直不尽人意，提高猪瘟疫苗的免疫效果一直是临床实践中亟待解决的问题。有研究发现，黄芪多糖注射液能显著提高猪瘟弱毒疫苗免疫仔猪血清中的猪瘟抗体阻断率，显著提高仔猪血清中的IgG含量。本研究结果也证实黄芪多糖能显著增强猪瘟弱毒疫苗诱导的抗体水平，可以作为免疫增强剂提高疫苗的体液免疫水平。

CD3存在于全部T细胞上，基于CD抗原的差异，T淋巴细胞又分为CD4+和CD8+两大亚群，CD4+和CD8+及CD4+T/CD8+是评价机体免疫功能的重要指标。本研究结果显示，黄芪多糖能提高免疫仔猪CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分数，进而有了提高CD4+T/CD8+值的趋势，但与不用药的对照组相比无显著差异。有研究显示，给21日龄仔猪注射黄芪多糖，不仅可以提高其CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分数，而且受试仔猪的腹泻率也显著低于不用药的空白对照组，这进一步说明黄芪多糖能提高机体的抵抗力。大量研究证实，黄芪多糖不仅是良好的疫苗增效剂，而且是良好的仔猪保健添加剂，值得推广。

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