饲料维生素E添加水平对团头鲂生长性能及血液和肌肉理化指标的影响

周 明 刘 波 戈贤平* 谢 骏 万金娟 崔素丽

(1.上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306;2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，无锡 214081;3.南京农业大学无锡渔业学院，无锡 214081)

维生素E又名生育酚，为一类化学结构相似的酚类化合物，在饲料中主要以DL－α－维生素E醋酸盐形式添加［1］。研究表明，水生动物不能自身合成维生素E，必须由外界供给，所以饲料中维生素E的缺乏或不足，就会导致水生动物机体出现缺乏症［2－3］。维生素E作为一种重要的营养成分，对维持动物机体正常代谢过程和生理功能具有重要的作用，可提高皱纹盘鲍(Paralichthys olivaceus)的 抗 氧 化 能 力［4］、虾 类 动 物 的 繁 殖力［5－6］等、中华鳖(Pelodiscus sinensis)幼鳖［7］和黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)的免疫力［8］以及尼罗罗非鱼(Nile tilapia)抗应激能力［9］等。

团头鲂(Megalobrama amblycephala)，隶属于硬骨鱼纲，鲤形目，鲤科，鳊亚科，其肉质鲜美、生长快、经济价值高，为我国目前主要养殖鱼类之一。团头鲂和其他动物一样，对维生素需求量受发育阶段、饲料组成和品质、环境因素以及营养素间的相互关系等影响［10］，迄今关于团头鲂对维生素E需求量的研究还鲜见报道，仅有2005年中华人民共和国水产行业标准列出了团头鲂对维生素E需求量的推荐值为50 mg/kg，同时关于维生素E对团头鲂血液和肌肉理化指标方面影响的研究也未见报道。鉴于此，本试验采用单因子梯度饲养试验法对团头鲂维生素E需求量进行研究，探讨其对团头鲂生长性能及血液和肌肉理化指标的影响，以期为研制适合团头鲂生长需求的安全环保的饲料添加剂提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验鱼

试验用团头鲂选自中国水产科学研究院淡水渔业研究中心苗种基地。试验选择健康、规格、体重［个体初均重(45.00±1.50)g］基本一致的团头鲂360尾，随机分成6组，每组4个重复，每个重复15尾鱼。试验鱼以重复为单位放养于可控温循环流水圆形养殖桶［规格为820 mm(直径)×700 mm(高)］内，采用循环流水控温系统进行养殖。

1.2 试验饲料

以酪蛋白和明胶为蛋白质源，糊精和淀粉为糖源，豆油为脂肪源配制基础饲料。在基础饲料中分别添加 0(对照组)、12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mg/kg维生素E，配制成等氮等能的6种试验饲料，采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定上述6种试验饲料中维生素E实际水平分 别 为 0.5、13.4、27.8、54.7、107.5 和197.5 mg/kg。维生素E购自国药集团化学有限公司，有效含量为50%。基础饲料组成及营养水平见表1。饲料原料经粉碎、0.3 mm孔径分筛，按表1配比混合均匀，少量的组分采用逐级扩大法混合。加20%的水揉匀，用SLP－45型制粒机(中国水产科学研究院渔业机械仪器研究所生产)制成粒径2.0 mm的沉性颗粒饲料，50℃烘干后于4℃冰柜中保存备用。

1.3 饲养管理

团头鲂在养殖桶驯化15 d后正式开始投喂试验饲料。每天投喂3次，分别在08:00—09:00、11:00—12:00、15:00—16:00各投喂1次。日投饵量为鱼体重的2% ～4%，并根据摄食和生长情况作适当调整，每天收集残饵并烘干称重。饲养期间水温 26～28 ℃，pH 7.2～7.8，溶解氧 ＞5 mg/L，氨氮 ＜0.01 mg/L。试验期间养殖场减少人为干扰，保持安静，以防止额外应激，每日观察鱼摄食及死亡情况，发现死鱼及时捞出称重、记数，并检查死亡原因。正式养殖90 d后结束试验，计数鱼尾数，计算成活率。

表1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(DM basis) %

1.4 指标测定

1.4.1 生长性能指标的测定

饲养试验第90天每桶随机抽取2尾鱼，每组取8尾鱼，采血后测定每条鱼的体重、体长、内脏重、肝脏重，以计算内脏比(VSI)、肝体比(HSI)及肥满度(CF);随后对每桶余下的鱼体称重后计算摄食率(FR)、增重率(WGR)、特定生长率(SGR)和饲料系数(FCR)。具体计算公式如下:

增重率(%)=100×(Wt－W0)/W0;

摄食率(%)=100×F/(Wt+W0)/2t;

特定生长率(%/d)=100×(ln Wt－ln W0)/t;

饲料系数=F/(Wt－W0);

成活率(%)=100×Nt/N0;

肝体比(%)=100×Wh/Wb;

脏体比(%)=100×Wv/Wb;

肥满度(%)=100×Wb/L3。

式中:W0为初体均重(g);Wt为末体均重(g);t为试验天数(d);F每尾鱼平均摄食饲料总量(风干基础)(g);Wh为每尾鱼末肝脏重(g);Wv为每尾鱼末内脏重(g);Wb为每尾鱼末体重(g);L为每尾鱼末体长(cm);Nt为收获尾数(尾);N0为放养尾数(尾)。

1.4.2 血液理化指标的测定

试验结束后每桶随机取2尾鱼，每组取8尾鱼，150 mg/L MS－222(化学名为间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐)麻醉，纱布擦干尾部，一次性注射器(用肝素钠润湿)尾静脉采血，每桶取20μL全血用于测定白细胞(WBC)、红细胞(RBC)数量及血红蛋白(HGB)含量。上述指标在迈瑞BC－5300VEt全自动五分类动物血液细胞分析仪上测定，试剂购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。

剩余血液在1 000 r/min、4℃下离心5 min取血浆，标号分装，于－70℃冰箱中保存备测。血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性采用国际临床化学联合会(IFCC)法测定，碱性磷酸酶(ALP)活性采用2－氨基 －2－甲基 －1－丙醇(AMP)缓冲液法测定，甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量采用氧化酶法测定，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量采用直接法测定。上述指标均在迈瑞BS－400全自动生化分析仪上测定，试剂盒均购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。

1.4.3 肌肉理化指标的测定

饲养结束后每桶随机抽取2尾鱼，每组取8尾鱼，取背部白肌，剪碎，混匀后用于测定鱼体肌肉的水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分含量等常规营养成分。水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量分别采用常压干燥法(GB/T 6435—2006)、凯氏定氮法(GB/T 6432—1994)、乙醚抽提法(GB/T 6432—1994)、550 ℃灼烧法(GB/T 6438—1992)测定。饲料中常规营养成分测定同肌肉中测定方法。

肌肉滴水损失率测定方法如下:取同侧新鲜背肌，用吸水纸吸干背肌上的水分和血渍，称重，记为W1;放于离心管中(离心管底部垫有适量吸水纸)，于4℃、4 000 r/min离心 20 min，取出肉样，用吸水纸吸干肌肉表面的水分，称重，记为W2。

滴水损失率(%)=100×(W1－W2)/W1。

肌肉熟肉率测定方法如下:切取试验鱼背部肌肉鲜样5 g左右，记为W3;然后放置于盛有沸水的铝锅笼屉上加盖蒸60 min，取出熟肉样，用铁丝钩挂于室内无风阴凉处静置(冷却)30 min，再准确称蒸熟肉重，记为W4。

熟肉率(%)=100×W4/W3。

1.5 数据处理

试验结果采用“平均值±标准差”表示，采用SPSS 11.5软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并进行LSD多重比较，P＜0.05为差异显著。

2 结果与分析

2.1 饲料维生素E添加水平对团头鲂生长性能的影响

由表2可知，随着维生素E添加水平的增加，增重率、特定生长率均呈先升高后降低的趋势，且均在维生素添加水平为100.0 mg/kg时达到最大值。与对照组相比，12.5、25.0、50.0、100.0 和200.0 mg/kg添加组团头鲂的增重率和特定生长率显著提高(P ＜ 0.05);25.0、50.0、100.0 和200.0 mg/kg添加组团头鲂的摄食率显著提高(P＜0.05);12.5 mg/kg添加组团头鲂的肥满度显著降低(P＜0.05)。各维生素E添加组的成活率、饲料系数、脏体比、肝体比与对照组相比没有差异显著(P ＞0.05)。

表2 饲料维生素E添加水平对团头鲂生长性能的影响Table 2 Effects of dietary vitamin E supplemental level on growth performance of Megalobrama amblycephala

由图1可知，通过曲线拟合分析发现团头鲂的增重率与饲料维生素E添加水平呈二次曲线关系，建立的回归方程如下:Y=－0.001 2X2+0.277 8X+96.316(R2=0.858 1)。由上述方程得出，当饲料中维生素E添加水平为138.5 mg/kg时，团头鲂的增重率最大。

图1 饲料维生素E添加水平对团头鲂增重率的影响Fig.1 Effects of dietary vitamin E supplemental level on WGR of Megalobrama amblycephala

2.2 饲料维生素E添加水平对团头鲂血液生理指标的影响

由表3可知，血液中白细胞、红细胞数量以及血红蛋白含量各组之间均无显著差异(P＞0.05)，但对照组的白细胞数量最高，血红蛋白含量最低。

2.3 饲料维生素E添加水平对团头鲂血液生化指标的影响

由表 4 可知，与对照组相比，12.5、25.0、50.0、100.0 和 200.0 mg/kg 添加组团头鲂血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性以及甘油三酯含量均显 著 降 低 (P ＜ 0.05);12.5、25.0、50.0、100.0 mg/kg添加组团头鲂血浆中总胆固醇含量显著降低(P ＜ 0.05);12.5、25.0、50.0 mg/kg 添加组团头鲂血浆中高密度脂蛋白胆固醇含量显著降低(P＜0.05);100.0 mg/kg添加组团头鲂血浆中碱性磷酸酶活性显著增加(P＜0.05)。团头鲂血浆中低密度脂蛋白胆固醇含量各组之间差异不显著(P ＞0.05)。

2.4 饲料维生素E添加水平对团头鲂肌肉理化指标的影响

由表 5 可知，饲料添加 12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mg/kg维生素E显著提高了团头鲂的肌肉熟肉率(P ＜0.05);同时，饲料添加25.0、50.0和100.0 mg/kg维生素E还显著降低了团头鲂的肌肉滴水损失率(P＜0.05)。与对照组相比，25.0、50.0、100.0 和 200.0 mg/kg 添加组团头鲂肌肉中粗蛋白质含量显著增加(P＜0.05)，其中以100.0 mg/kg添加组的含量最高，为22.60%。饲料添加维生素E对团头鲂肌肉中水分、粗灰分和粗脂肪含量没有显著影响(P＞0.05)。

表3 饲料维生素E添加水平对团头鲂血液生理指标的影响Table 3 Effects of dietary vitamin E supplemental level on blood physiological indexes of Megalobrama amblycephala

表4 饲料维生素E添加水平对团头鲂血液生化指标的影响Table 4 Effects of dietary vitamin E supplemental level on blood biochemical indexes of Megalobrama amblycephala

表5 饲料维生素E添加水平对团头鲂肌肉理化指标的影响(湿重基础)Table 5 Effects of dietary vitamin E supplemental level on muscle physiochemical indexes of Megalobrama amblycephala(wet weight basis) %

3 讨论

3.1 饲料维生素E添加水平对团头鲂生长性能的影响

研究表明，维生素E的缺乏会降低水产动物的生长性能，而适量的维生素E可有效降低水产动物体内过多的高不饱和脂肪酸，保持水产动物的正常代谢，提高水产动物机体的生长性能［11］。Shiau等［12］报道，饲料添加75 mg/kg维生素 E可显著提高罗非鱼的生长。周岐存等［13］研究表明，饲料中添加50～100 mg/kg维生素E可提高皱纹盘鲍幼鲍的增重率、特定生长率。何敏等［14］在斑点叉尾饲料中添加0、50、100 和 1 000 mg/kg维生素E，结果显示饲料中添加50～100 mg/kg维生素E能显著提高斑点叉尾的特定生长率、摄食率。本试验也表明，随着维生素E添加水平的增加，团头鲂的增重率、特定生长率呈现先增加后降低的趋势，当添加水平达到100.0 mg/kg时增重率和特定生长率最高;以鱼体增重率为评价指标，通过曲线拟合和回归方程分析，团头鲂饲料维生素E最适添加水平为138.5 mg/kg;而添加水平达到200.0 mg/kg时团头鲂的增重率反而有下降的趋势。相关报道也显示，添加高水平维生素E对黄颡鱼［8］和斑点叉尾［14］的生长无明显促进作用，这与本研究结果基本一致，而维生素E在体内的具体作用机制有待进一步研究。

不同鱼类的维生素E需求量存在差异，而同一种鱼在不同生理阶段对维生素E的需求量也不同，一般鱼苗对维生素E的需求量要高于成鱼。中华人民共和国水产行业标准中对团头鲂维生素E需求量的推荐值是50 mg/kg，而本试验得出团头鲂最佳生长状态时饲料中维生素E添加水平为138.5 mg/kg，这与中华人民共和国水产行业标准推荐值有较大差异，原因可能是团头鲂对维生素E的需求量与鱼体本身情况、其生长环境等都有关［15］。

3.2 饲料维生素E添加水平对团头鲂血液理化指标的影响

红细胞数量和血红蛋白含量与鱼体的生理特征有密切的联系，可作为对鱼体健康及环境适应能力评价的指标［16］。Sealey 等［17］研究发现，摄食缺乏维生素E饲料的斑纹鲈其血液中红细胞数量会降低。何敏［15］研究表明，饲料中缺乏维生素E降低了斑点叉尾血液中红细胞数量和血红蛋白含量。本试验中，未添加维生素E的对照组血液中红细胞数量和血红蛋白含量较50.0、100.0和200.0 mg/kg添加组有降低趋势，这与上述研究结果基本一致，说明维生素E缺乏可使鱼体血液中红细胞数量和血红蛋白含量降低，导致鱼体携氧能力降低，影响鱼体代谢能力。

当肝脏和心肌细胞受损或通透性增高时，谷丙转氨酶和谷草转氨酶会释放到血液中，导致血液转氨酶活性升高［18］，因此血浆谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性可以用来监测鱼体的健康状况［19－20］。本试验结果表明，饲料中添加 12.5、25.0、50.0、100.0 和 200.0 mg/kg 维生素 E 显著降低了团头鲂血浆中谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性，说明饲料中添加适量维生素E对肝脏组织有一定的保护作用［17］。

碱性磷酸酶是动物代谢过程中的重要调控酶，在鱼体对营养物质的吸收和利用过程中发挥着重要的作用［21］。碱性磷酸酶可通过水解作用将表面带有磷酸酯的异物破坏掉，并可修饰或改变外来异物的表面分子组成，加快吞噬细胞的吞噬作用和对异物的降解速度，从而阻止病菌在机体的生长和繁殖，是机体解毒体系中的重要成员［22］。相关研究认为碱性磷酸酶在机体的非特异性免疫反应中发挥重要作用，其活性的高低可反映动物的生长速度和生产性能［23－24］。艾春香等［25］试验表明饲料中添加100、200、400和600 mg/kg的维生素E均能增强河蟹体组织中碱性磷酸酶活性，且随维生素E添加水平的增加，碱性磷酸酶活性增强。何敏［15］研究表明，饲料中添加 50～100 mg/kg维生素E可显著提高斑点叉尾血液中碱性磷酸酶活性。本试验也表明，饲料中添加100.0 mg/kg维生素E 显著增加了团头鲂血浆中碱性磷酸酶活性，有助于提高团头鲂的非特异性免疫能力，间接的促进生长。

水产动物脂类的转运需要经过血液运输到其他组织，血液中胆固醇等脂类物质的水平能够反映水产动物脂类的代谢状态［26］。本试验中，饲料中添加 12.5、25.0、50.0、100.0 mg/kg 维生素 E显著降低了团头鲂血浆中总胆固醇、甘油三酯的含量，推测原因可能是维生素E促进了团头鲂血浆中胆固醇和甘油三酯的分解，降低了血浆胆固醇和甘油三酯的含量，调节血液脂类水平，这与何敏［15］的研究结果相一致，具体原因还待进一步研究。

3.3 饲料维生素E添加水平对团头鲂肌肉理化指标的影响

肌肉的滴水损失率可用来表示肌肉的系水力，即肌肉中水分的保持程度。高系水力可防止肌肉中水分的过多流失，防止肉变质［27］。熟肉率是肌肉烹调损失程度的标志，也是评价鱼体肌肉蛋白质持水性的指标。上述二者均是衡量肌肉蛋白质保持水分能力的重要指标［28－30］。研究表明，动物肌肉中脂肪易被氧化，可造成肉品质下降［31］。在畜禽动物方面，Guo等［32］研究发现，在饲料中添加40、200和400 mg/kg维生素E可提高猪肉中脂肪的稳定性，减少滴水损失;高秦燕等［33］在猪饲料中添加30、60和90 mg/kg维生素E降低了猪肉的滴水损失率，提高了保水力。杨丹［34］在鲤鱼饲料中添加不同水平(0、100、300和500 mg/kg)的维生素E，结果表明熟肉率随着维生素E添加水平的增加而升高。本试验结果表明，饲料中添加25.0、50.0、100.0 mg/kg 维生素 E 可降低团头鲂肌肉的滴水损失率，提高熟肉率。

鱼体的肌肉常规成分与其生理机能关系密切，其中蛋白质供鱼体生长和发育，其含量反映了鱼体的生长状况和肉品质量。任泽林等［35］指出，维生素E缺乏时，鲤鱼肌肉粗蛋白质含量降低，水分含量增加。文华等［36］研究指出，当饲料中维生素E不足(添加水平为0和20 mg/kg)时，会降低鲟鱼肌肉粗蛋白质含量。本试验结果表明，对照组和12.5 mg/kg添加组团头鲂肌肉中粗蛋白质含量显著低于 25.0、50.0、100.0 和200.0 mg/kg添加组。结合肌肉滴水损失率、熟肉率及粗蛋白质含量来看，饲料中添加25.0～200.0 mg/kg维生素E可能对团头鲂的肉质有一定的改善作用，具体作用机理还待进一步研究。

4 结论

① 在本试验条件下，饲料中添加25.0～200.0 mg/kg维生素E在一定程度上促进了团头鲂幼鱼的生长，并在维持机体正常新陈代谢和改善肉质上发挥了一定的作用。

②以增重率为评价指标，经回归方程预测团头鲂饲料中维生素E的最适添加水平为138.5 mg/kg。

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