GPC3对原发性肝癌的诊断价值

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(1.大连医科大学 附属第二医院 检验科，辽宁 大连 116027；2.温州医学院 研究生院，浙江 温州 325035)

医学检验

GPC3对原发性肝癌的诊断价值

许方1，李晓兰1，王玉梅1，吴小利2

(1.大连医科大学 附属第二医院 检验科，辽宁 大连 116027；2.温州医学院 研究生院，浙江 温州 325035)

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)对原发性肝癌的诊断意义,尤其是对AFP阴性及肿块较小的肝癌患者的诊断价值。方法收集120例肝癌、32例肝硬化病人，通过ELISA法检测标本GPC3值，电化学发光法检测标本AFP值，肝癌组根据肿块大小分为4组(<3 cm、3～5 cm、5～10 cm和>10 cm)进行结果分析。结果(1)肝癌组GPC3值为(22.014±36.930)ng/mL，肝硬化组GPC3值为(8.590±8.171)ng/mL，两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。(2)肝癌肿块<3 cm组GPC3和AFP的阳性率分别为86.67%和71.43%，二者之间差异无显著性意义(P>0.05)；肝癌肿块3～5 cm、5～10 cm、>10 cm组的GPC3的阳性率低于AFP，二者间差异也无显著性意义(P>0.05)。(3)AFP阴性的肝癌患者中GPC3的阳性率为75%。结论GPC3作为新兴的肿瘤标志物，可能对AFP阴性和小肿块肝癌患者的诊断价值较大，GPC3与AFP联合检测更有利于肝癌的早期诊断。

GPC3；AFP；原发性肝癌

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是中国最常见的恶性肿瘤之一，且其一旦出现典型症状和体征，多数为中晚期，缺乏有效治疗，预后差，因此早期诊断非常重要。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (glypican-3,GPC3)作为新兴的肿瘤标志物，与传统的AFP相比，具有各自的诊断局限性，Llovet等[1]在2008年HCC管理新进展中推荐3个高准确率HCC诊断基因组，GPC3是其中之一，但仍需要更多的研究以证明其优越性。

之前本研究组曾做过GPC3与AFP两项指标对原发性肝癌诊断意义的比较，发现GPC3与AFP相比，诊断敏感性更高，但特异性相对较低，二者间没有相关性[2]。为了进一步明确GPC3对早期肝癌及AFP阴性肝癌诊断的价值，本组对其中46例有肿块的肝癌病例根据肿块大小重新进行了分组，分别测定其GPC3及AFP值，并进行进一步分析。

1 资料与方法

1.1 材 料

选择2010年2月1日 —2012年11月25日到大连医科大学附属第二医院就诊的肝癌患者(符合2001年中国抗癌协会肝癌专业委员会指定的诊断标准)120例，其中男77例，年龄25～93岁，女43例，年龄23～81岁；肝硬化患者(符合2000年病毒性肝炎防治方案肝硬化的临床诊断标准)32例，其中男19例，年龄33～79岁，女13例，年龄28～81岁。

肝癌组中46例根据肿块大小进一步分组，分为<3 cm、3～5 cm、5～10 cm和>10 cm共4组。

1.2 方 法

采集静脉血标本，分离血清，-20℃冷冻保存。采用电化学发光法检测标本AFP值，仪器为Elecsys2010电化学发光分析仪，试剂购自罗氏公司。

ELISA方法测定标本GPC3值，试剂购自Uscn公司，严格按照试剂盒说明书操作，酶标检测仪型号为美国ElX800NB。

1.3 统计学方法

2 结 果

2.1 两组血清GPC3水平比较

肝癌患者血清中GPC3值(22.014±36.930)ng/mL高于肝硬化患者(8.590±8.171)ng/mL，两组比较差异有显著性意义(P<0.01)。

2.2 不同肿块大小的肝癌GPC3与AFP比较

肿块直径较小组(<3 cm)GPC3阳性率(86.67%)高于GPC3(71.43%)，其他组GPC3的阳性率均不高于AFP，所有组GPC3与GPC3的阳性率比较差异均不存在显著性意义(P>0.05)。见表1。

表1 不同肿块大小的GPC3与AFP的阳性率

2.3 GPC3在AFP阳性与阴性中的检测结果

GPC3在AFP阴性的肝癌患者中阳性率为75%，提高了检测的敏感度。见表2。

表2 HCC组中GPC3在AFP阳性与阴性中的检测结果

3 讨 论

GPC3是一类分布在细胞膜表面的蛋白聚糖，属于糖基磷脂酰肌醇锚定细胞表面磷酸乙酰肝素蛋白多糖家族，GPC3蛋白作为一种膜性间质蛋白，其表达方式与生长因子(如成纤维细胞生长因子等)及其受体表达方式一致，能通过一系列细胞表面受体传导的信号来调节细胞形态和各种细胞行为如粘附、增殖、迁移、存活和分化[3]。GPC3在肝癌组织中高表达，而在正常肝组织不表达，是一种新的肝细胞癌的癌胚抗原，许多学者对GPC3在肝细胞癌的发生和发展中的作用提出了许多假说，并通过实验证明假说，但关于GPC3在肝细胞癌中的作用具体机制并未达成一致意见[4]。

关于GPC3在肝癌诊断中的作用，尤其是国外学者做过不少相关探讨。Hippo和Capurro等[5]在肝癌病人血清中特异性地检测到可溶 GPC3 (sGPC3) ，其表达量明显高于肝硬化病人及健康对照组，且方法的敏感性优于AFP。Nakatsura和Capurro等[6-7]应用酶联免疫吸附方法发现40 %(16/40) ～53 %(18/34) 肝癌患者血清GPC3阳性，而在20 例肝炎肝硬化患者血清中仅1 例阳性，正常人血清中未检测到。本实验用ELISA方法分析了32例肝硬化病人和120例原发性肝癌病人血清中的GPC3含量。结果表明：HCC组的GPC3明显高于肝硬化组及正常对照组，二者间存在明显差异，说明GPC3对肝癌的诊断有一定意义。这一结果与许多国外学者的报道相吻合。

同时，本实验对于肝癌患者根据肿块的大小进行了分组，发现肿块<3 cm组，GPC3的阳性率(86.67%)高于AFP的阳性率(71.43%)；其他肿块(>3 cm)组，GPC3的阳性率均不高于AFP，组间差异均没有显著性意义。其他类似的研究分组情况略有不同，结论也有所区别。汪得胜等[8]发现肿瘤最大直径<5 cm及5～10 cm的HCC患者GPC3阳性率高于AFP，而最大直径>10 cm的HCC患者中GPC3阳性率低于AFP，但差异无统计学意义。Zhou等[9]研究发现，在肿瘤直径<5 cm 的HCC患者中，GPC3 mRNA表达的阳性率(83.3%，6 例中的5 例) 要明显高于血清AFP的诊断率(33.3%，6 例中的2 例，诊断标准AFP>400 μg/mL) ，说明早期肝癌的诊断中GPC3mRNA较血清AFP敏感度高。Libbrecht 等[10]应用免疫组织化学方法研究发现，GPC3 在小肝癌(<3 cm)的表达水平显著高于肝硬化及其他小局灶性病变，对于小HCC的诊断GPC3的敏感度和特异度分别为77%和96%，提示GPC3 在小局灶性病变的组织病理学诊断方面具有较大的临床辅助价值。本研究可能由于选材及例数的原因，在肿块<3 cm组，GPC3的阳性率虽然高于AFP的阳性率，但并没有明显差异，但提示对于未发现肿块及肿块较小者进行GPC3的测定可能对肝癌的早期诊断更有意义。

本次实验结果中，肝癌组AFP阴性患者中GPC3的阳性率为75.00%，相关报道如Ding等[11]利用Northern blot技术在AFP阴性的41例肝癌组织中，检测到了30例GPC3表达，比例高达73.17%。还有研究用Northern blot检测AFP阴性肝癌组织，有73.00%的标本 GPC3 mRNA阳性，以血清 AFP≤20 μg/L为诊断标准，其表达率为 40.0%，提示血清AFP阴性的样本中也可检测出GPC3。此外Zhou等[9]发现，GPC3在AFP阴性的HCC中表达可以达到90%以上。因此认为，GPC3对AFP阴性的肝癌患者意义更大，有效地提高了检测的灵敏度，在肝癌患者的筛查中具有很大的价值。

近年来的大量研究表明，GPC3是一种很有前景的肝癌早期诊断标志物，尤其对于AFP阴性及肿块较小的HCC患者，建议将其与AFP进行联合检测，可以有效提高检测率，有助于早期发现，早期治疗。

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[2] 许方，李晓兰，吴小利.血清GPC3与AFP的检测对原发性肝癌诊断意义比较[J].中国实验诊断学，2013，17(6)：71-73.

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[8] 汪得胜，丁惠国，李卓，等.血清GPC3联合AFP对原发性肝癌的诊断价值探讨[J].中华检验医学杂志，2007，30(10)：1169-1171.

[9] Zhou XP,Wang HY,Yang GS,et al.Cloning and expression of MXR7 gene in human HCC tissue[J]．World J Gastroenteml, 2000,6:57-60.

[10] Libbrecht L,Severi T,Cassiman D, et al. Glypican-3 expression distinguishes small hepatocellular carcinomas from cirrhosis, dysplastic nodules, and focal nodular hyperplasia- like nodules[J]. Am J Surg Pathol, 2006, 30 (11):1405-1411.

[11] Ding GH, Wang HY, Chen H, et al. Expression of the glypican-3gene in α-fetoprotein-negative human hepatocellularcarcinoma[J].Chn-Ger J Clin Oncol, 2005, 4(5):262-266.

StudyondiagnosticsignificanceofGPC3inthepatientswithprimaryhepatocellularcarcinoma

XUFang1,LIXiao-lan1,WANGYu-mei1,WUXiao-li2

(1.ClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China; 2.AcademyofWenzhouMedicallCollege,Wenzhou325035,China)

ObjectiveTo evaluate the diagnostic value of GPC3 for patients with primary hepatocellular carcinoma, especially when AFP was negative or swelling was smaller.MethodsSerum GPC3 and AFP were measured by ELISA and the electrochemical luminescence method in 120 patients with primary hepatocellular carcinoma, 32 patients with hepatic cirrhosis. The results were divided into groups according to the size of swelling(<3 cm，3～5 cm，5～10 cm和>10 cm ).Results(1)The value of GPC3 in hepatocellular carcinoma group was (22.014±36.930)ng/mL,and the value of GPC3 in hepatic cirrhosis was (8.590±8.171)ng/mL.The difference was significant between two groups(P<0.01).(2)The positive rates of GPC3 and AFP were 86.67% and 71.43% in swelling size <3 cm group, and the difference was not significant(P>0.05). The positive rates of GPC3 in the other groups(swelling size 3～5 cm,5～10 cm,>10 cm) were lower than AFP,and the difference was not significant(P>0.05).(3) The positive rate of GPC3 in case of negative AFP was 75%.ConclusionAs a new tumor marker in primary hepatocellular carcinoma,GPC3 perhaps has higher diagnosis value in case of negative AFP and smaller swelling size. GPC3 in combination with AFP can improve the early stage detection of HCC.

GPC3；AFP； primary hepatocellular carcinoma

10.11724/jdmu.2013.04.18

R392.9；R735.7

A

1671-7295(2013)04-0381-03

许方，李晓兰，王玉梅，等. GPC3对原发性肝癌的诊断价值[J].大连医科大学学报，2013,35(4)：381-383.

大连医科大学附属第二医院青年科研基金(2009)

许 方(1972-)，女，辽宁大连人，主任技师。E-mail:xu27002@126.com

2013-05-08；

2013-06-25)