149株肺炎克雷伯杆菌产ESBL酶的检测及其耐药性分析

倪灵凡

随着抗生素的广泛应用, 一方面有效地治疗了临床上的各种感染性疾病；另一方面,随着抗生素的大量使用，细菌本身容易发生耐药。目前，耐药问题已成为全世界共同面临的重大挑战。肺炎克雷伯菌是临床上常见的革兰氏阴性杆菌,是多种感染疾病的致病菌。随着β内酰胺类抗生素,特别是头孢菌素的广泛应用,临床上产超广谱β-内酰胺酶( ESBL)肺炎克雷伯菌的分离率越来越多,而且这种耐药基因可以通过细菌质粒的重组在细菌间相互传播，容易引起耐药菌的爆发和流行[1-2]，给临床上感染疾病的控制带来严重的困难。因此，收集149株肺炎克雷伯杆菌，对其进行ESBL酶的检测及其耐药性分析，以期能为临床抗感染用药提供依据。

1 材料与方法

1.1实验菌株收集我院2010年9月～2011年12月的肺炎克雷伯菌共149株(去除同一病人相同部位分离的菌株),菌株的鉴定使用生物梅里埃公司的VITEK鉴定系统，阳性对照菌株为肺炎克雷伯菌700603，药物敏感试验质控菌为大肠埃希菌ATCC25922。

1.2抗菌药物纸片其中亚胺培南( IMP)、头孢噻肟(CFX)、头孢曲松(CRO)、头孢呲肟(FED)、氨曲南(ATM)、头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、氨苄西林/舒巴坦(AMS)、头孢哌酮/舒巴坦(CFS)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、阿米卡星(AMK)、环丙沙星(CIP)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP) 等抗菌药物纸片购自法国生物梅里埃公司。头孢他啶30 mg+克拉维酸10 mg/片(CAZ/CLAV)、头孢噻肟30 mg+ 克拉维酸10 mg/片(CTX/CLAV)购自中国生物制品检定所。

1.3实验方法药敏试验按美国临床实验室标准化委员会2010版(CLSI2010)操作规程进行操作及结果判断[3]。①ESBLs检测：按CLSI2010版推荐的方法初步筛选后, 再用头孢他啶30 mg、头孢他啶30 mg+克拉维酸10 mg/片及头孢噻肟30 mg、头孢噻肟30 mg+克拉维酸10 mg/片纸片进行双纸片法确认。将培养基置于35℃恒温培养箱中培养18～20 h，含克拉维酸与未含克拉维酸的抗菌药物纸片的抑菌环直径相差≥5 mm即为产ESBL菌株。②药敏试验：采用K-B纸片扩散法参照CLSI2010进行药敏试验3，药敏试验及ESBLs检测两项试验均使用同批试剂，分别在同一时间完成。

2 结果

本组试验鉴定出产ESBL肺炎克雷伯菌64株, 总阳性率为43.0%, 其对常用药物的耐药率结果见表1。

表1 64株肺炎克雷伯菌对常用药物的耐药率

3 讨论

肺炎克雷伯菌是引起呼吸道、ICU及泌尿生殖道感染的常见致病菌之一, 然而，随着第3代头孢菌素的广泛应用, 这类细菌感染的耐药问题越来越得到广泛的关注。近年来, 各地不断分离的ESBL是导致该细菌对对头孢菌素、青霉素类耐药的一个重要原因。多项研究结果显示:ESBL大多数由TEM-1、TEM-2 及SHV-1发生突变的衍生物, 由质粒介导, 能够使氧亚氨基β-内酰胺类抗生素失活[4]。主要由肠杆菌科细菌产生, 以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌最为常见, 产ESBL菌株不仅对第3代头孢菌素和氨曲南耐药, 而且对氨基苷类、喹诺酮类和磺胺类呈现交叉耐药, 但对碳青酶烯类和头霉素类敏感。另外，ESBL可以通过接合、转化和转导等形式使耐药基因在细菌中扩散，可导致该种耐药菌的爆发和流行。

本组试验临床分离本研究共收集分离的肺炎克雷伯菌149株，共分离出产ESBL菌株63株，占所有菌株的43.0%，与国内大多数结果相近。药敏结果显示：产ESBL的肺炎克雷伯均对头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松的耐药率分别为92.2%、64.6%、80.0%，具有较高的耐药率；对头孢吡肟、亚胺培南高度敏感，可能是由于其β-内酰胺环较小，极易进入细菌的微孔蛋白通道, 以及特异的反式结构, 使其对β-内酰胺酶具有高度的稳定作用[5]。从而显示出强大的抗菌活性, 头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林舒巴坦对产ESBLs株亦显示了较强的抗菌活性, 可能是由于与β-内酰胺酶抑制剂的联合协同作用，使其具有较强的杀菌作用。另外，本结果发现产ESBL的肺炎克雷伯菌对阿米卡星、环丙沙星分别具有29.7%、48.4%的耐药率，可能是该种细菌除产ESBL外，还可能产其他耐药酶。

肺炎克雷伯菌是导致院内感染的重要病原菌之一, 产ESBL的高分离率及其对药物的不同程度耐药使得在抗感染用药中可选择的抗菌药物较为有限。因此, 临床用药应依据体外药物敏感试验结果进行选药, 从而有效控制产ESBL菌株的产生。

参考文献：

[1]杨滨, 孔祥圣.产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌qnrB基因的检测[J].实用医学杂志,2007,23(24):3945-3946.

[2]叶惠芬, 刘平, 陈惠玲, 等.广州地区肺炎克雷伯菌分布和耐药性调查[J].实用医学杂志,2006,22(7):833-835.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing.M100-S20.

[4]许锦民,苏丹虹.大肠埃希菌和克雷伯菌属产超广谱β2内酰胺酶的检测[J].中华医学检验杂志,1998,21(6):373-374.

[5]孙景勇,倪语星.住院病人中分离的革兰阴性杆菌的分布与耐药特征[J].中国抗感染化疗杂志,2002,2(3):170-172.