禽沙门氏菌分离鉴定和药敏实验
2013-12-03
（辽宁省朝阳市动物疫病预防控制中心，辽宁朝阳 122000）
朝阳市某鸡场饲养210日龄2 000只蛋鸡，于4月下旬发现部分鸡出现精神萎顿、头翅下垂、产蛋下降或停产并伴有腹泻症状，连续几日共10余只鸡，经临床检查、实验室检测确诊为禽沙门氏菌感染。
剖检变化为卵子变形、变色、质地改变以及卵子呈囊状，受害的卵子呈油脂或干酪样，卵黄膜增厚，变性的卵子或仍附在卵巢上，有长短粗细不一的卵蒂（柄状物）与卵巢相连，脱落的卵子深藏在腹腔的脂肪性组织内。有些卵则自输卵管逆行而坠入腹腔，有些则阻塞在输卵管内，引起广泛的腹膜炎及腹腔脏器粘连。可以发现腹水；心脏变化稍轻者见心包膜透明度较差，含有微混的心包液，重者心包膜变厚而不透明，逐渐粘连，心包液显著增多，在腹腔脂肪中或肌胃及肠壁上发现琥珀色干酪样小囊包。
笔者等采取细菌分离鉴定和药敏试验，即以沙门氏菌的培养为基础对病死鸡中的病原进行分离鉴定，并且对分离的病原进行药敏实验。
1 材料和方法
1.1 病料
疑似病例病死鸡的肝脏。
1.2 培养基
麦康凯琼脂，伊红美蓝琼脂，普通琼脂。
1.3 器械
ZDX-35B型座式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂），JC303-4电热恒温培养箱（上海嘉程仪器设备厂），J0107托盘天平（浙江省岱山县教学仪器厂），光学显微镜 JNOEC XS-212-201 004126，普通平板，三角瓶，电炉子，载玻片，松柏油，革蓝氏染色套具，瑞氏染色液，手术刀，眼科剪子，镊子，方盘，胶头滴管，牛皮纸，纱布，滤纸，酒精灯，接种环（针），小矬子，封口绳，记号笔，1ml注射器，5ml注射器，剪毛剪，无菌试管，试管架，游标卡尺，计算器，移液管，小烧杯，吸耳球等。
1.4 药敏纸片
上海伊华医学科技有限公司生产。
1.5 病原分离
将上述病料直接涂片，进行革兰氏染色，低倍镜下观察菌体的形状、颜色。将病料划线接种于麦康凯琼脂，37℃培养18～24 h，观察菌落的形状、颜色及大小，然后挑取单个可疑菌落涂片，进行革兰氏染色，镜下观察。将上述病料划线接种于伊红美蓝琼脂，37℃下培养18～24h，观察菌落的形态颜色，然后挑取疑似菌落涂片、革兰氏染色及镜下观察。
1.6 药敏试验
药物：丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、胺苄青霉素、链霉素、新霉素、土霉素、四环素、红霉素、强力霉素、氟派酸。
方法：将琼脂斜面的培养物挑取少许溶于生理盐水，摇匀后浇到琼脂平板上，微微摇晃，待均匀后将水倒掉，贴上上述药物的药敏片，37℃培养18～24h，记录药敏圈直径，对照药敏试验判断标准，得出结果。
2 结果
2.1 病原分离的结果
2.1.1 病料的直接涂片、染色结果 镜下菌体呈现红色，两端钝圆，长度约为1.5～3.0μm的短杆菌，多数单个存在，偶见有2～3个菌体连在一起。
2.1.2 麦康凯琼脂 经过37℃培养24h，琼脂表面形成红色的，圆形隆起，光滑，边缘整齐的小菌落。镜检结果：镜下菌体呈现红色，两端钝圆，长度约为1.5～3.0μm的短杆菌，多数单个存在，偶见有2～3个菌体连在一起。
2.1.3 伊红美蓝琼脂 表面形成黑色带金属闪光的菌落。
镜检结果：镜下菌体呈现红色，两端钝圆，长度约为1.5～3.0μm的短杆菌，多数单个存在，偶见有2～3个菌体连在一起。
2.2 药敏试验的结果
药物敏感程度由《兽医微生物学》判定。
表1 药敏试验判断标准表
表2 药敏试验抑菌直径统计表
表3 药敏试验结果
上述两表可以看出：沙门氏菌对丁胺卡那霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、强力霉素中度敏感，而对红霉素、链霉素等均已产生了耐药性。
根据药敏试验结果采用5%丁胺卡那霉素100g/200kg饮水，每日2次，3日后鸡群恢复正常。
