附子理中汤对脾阳虚证模型大鼠心肌电生理的影响*

卢 兰 陈 桦 唐汉庆

（1.广东省惠州市第四人民医院，广东 惠州 516055；2.惠州卫生职业技术学院，广东 惠州 516025；3.右江民族医学院，广西 百色 533000）

脾为后天之本，脾阳虚会累及心阳、肾阳出现心脏的病理改变，本实验尝试建立脾阳虚动物模型，采用“方-证”对应药物附子理中汤为干预药物，讨论其对心律失常的动作电位时程、动作电位0相幅值、动作电位50%复极化时程和90%复极化时程的影响。

1 材料与方法

1.1 动物 清洁级Wistar大鼠50只，雌雄各半，体质量（320±20）g，北京维通利华公司提供，动物合格证号为 SCXX（京）2012-0004 。

1.2 药物与仪器 水合氯醛（批号20090025，北京化学试剂公司）；附子理中汤由炮附子、党参、白术、干姜、炙甘草按照原方 3∶5∶4∶3∶2 的比例组成， 诸药均先经蒸馏水浸泡30 min，炮附子先煎1 h，后纳入其余药物，煎煮两次 （每次40 min），期间将两次药液纱布过滤，合并，水浴加热浓缩至含生药量为2 g/mL质量浓度的药液，杀菌，贮存于4℃冰箱内备用。实验所用单味药由本校药理教研室提供，经本院药理教研室鉴定。电子天平（AE160型，瑞士Mettler公司）；生物机能实验系统（BL-420 E+，泰盟，成都）；MedLab-U生物信号采集系统（上海欣曼公司）。

1.3 分组与造模 大鼠适应性喂养1周后，分为对照组、模型组、附子理汤低、中、高剂量组，每组10只，对照组予普通饲料，自由饮水，常态环境喂养。其余大鼠以10%水合氯醛按3 mL/kg腹腔注射麻醉，俯卧位，背部肩胛骨间备皮，碘伏、酒精消毒皮肤，铺消毒孔巾，在肩胛骨中间切开皮肤，往背部切约4 cm切口，钝性分离皮肤、皮肤下组织和肌肉，找到BAT（其组织细胞内含有大量血红蛋白和高水平的血红素卟啉，细胞呈棕色）并分离，7号线缝合，碘伏、酒精消毒皮肤切口。无菌纱布覆盖切口并包扎牢固，送回动物房喂养。术后饲以高脂饲料 （83%基本饲料，15%甘油三酯，2%胆固醇），隔日将大鼠置于19℃恒温实验室，模拟寒冷刺激，连续3周。

1.4 给药方法 高剂量组3周后第1日起在模型组基础上，附子理中汤按20 g/kg体质量灌胃。中剂量组：附子理中汤按10 g/kg体质量灌胃。低剂量组：附子理中汤按5 g/kg体质量灌胃。对照组和模型组按0.9%氯化钠注射液5 g/kg体质量灌胃。每日1次，连续灌胃4周。灌胃4周后第1日检测指标。全部大鼠纳入统计分析，没有死亡脱失

1.5 标本采集与检测 大鼠用10%水合氯醛按3mL/kg腹腔麻醉后，仰位固定。开胸暴露心脏，小心剪开心包膜，采用乏极化电极接触心外膜记录单相动作电位（MAP），记录标准肢体Ⅱ导联心电图，MAP和Ⅱ导联心电图由MedLab-U生物信号采集系统同步描记。每隔6min记录MAP，连续测量10个频率稳定波形的单相动作电位数值，取其平均值为记录结果。记录心率（HR），动作电位时程（APD），动作电位 0相幅值（APA），动作电位 50%复极化时程 （APD50），90%复极化时程（APD90）。

1.6 统计学处理 应用SPSS 11.0统计软件。计量资料以（）表示，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 术后动物行为学观察 施行肩胛骨BAT切除术后1周，大鼠出现畏冷寒战、喜扎堆、拱背少动、体毛不荣等症状或体征。高脂饲料3周后，大鼠出现食欲不振、倦怠、消瘦、肛周污秽等症状或体征。

2.2 各组大鼠心肌细胞动作电位的比较 见表1。与对照组比较，模型组 HR、APD50均降低（P<0.05）；APD、APD90、APA 均显著降低（P<0.01）。与模型组比较，中剂量组 HR、APD、APD50均升高（P<0.05）；与模型组比较，高剂量组 HR 升高（P<0.05）而 APD、APD50、APD90、APA均显著升高（P<0.01）。

表1 各组大鼠心肌细胞动作电位比较（）

表1 各组大鼠心肌细胞动作电位比较（）

与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

3 讨 论

动物模型的构建是进行实验研究的重要环节，以复合因素建立病证结合、适合中医科研特点的动物模型值得探讨，在本实验工作中，笔者尝试建立脾阳虚大鼠模型。脾阳虚证中脾虚症状表现为纳少、消瘦、乏力、脘腹胀痛、便溏及腹泻等；阳虚症状为畏寒喜温、形寒肢冷等。又考虑到BAT为大鼠最主要的产热物质［1-2］，施行肩胛骨BAT切除术减少其产热物质来源，大幅度衰减其阳气，使阳虚症状群突出，因此采用“BAT切除术+高脂饲料喂养+隔日寒冷环境刺激”的复合因素方法并结合大鼠行为学观察评价建立脾阳虚证动物模型。本实验中，笔者观察到模型大鼠大便稀，肛门周围有污物，畏冷寒战、喜扎堆、拱背少动、体毛不荣等，参考脾阳虚证两大症状群的文献评价［3-4］，建立脾阳虚大鼠模型，这一方法有待同仁指正。

在本实验工作中，笔者观察到，和对照组比较，模型组 HR、APD50、APD、APD90、APA 均降低 （P<0.05 或0.01），提示脾阳虚模型动物发生心脏电生理病理改变。《素问·生气通天论》指出“阳气者，若天与日，失其所则折寿而不彰”，阳气衰弱，无力鼓动心脉而出现病变，尽管心脏病变与心阳关系最密切，但以临床为例，单纯的心阳虚少见，以心脾或心肾阳虚等多见。从本实验结果推断，脾阳虚也可能累及心阳，从侧面再次提示临床以整体观念进行辨证的重要性。

附子理中汤具有温阳健脾功效，主治脾阳虚重证或心脾阳虚证。本实验观察到，与模型组比较，附子理中汤中剂量组、高剂量组HR提高（P<0.05），提示附子理中汤在一定程度上恢复脾阳虚动物心脏的正常自律性或传导性。同时，附子理中汤能延长APD和升高APA，使之趋向于对照组，和模型组比较差异明显（P<0.01），附子理中汤的干预作用和浓度有关，表现为随浓度增高，APD和APD50明显延长，推测是通过改变心肌细胞膜钾、钙和钠离子通道特性，一定程度上提高心肌应激性所致［5］。改善心脏电生理病理变化可能是附子理中汤温阳健脾功效的体现之一。

［1］Smith RE， Horwitz BA.Brown fat tissue and thermogenesis［J］.Physiol Rev，1969，49（2）：330-332，425.

［2］Nicholls DG，Locke RM.Thermogenic mechanisms in brown fat［J］.Physiol Rev，1984，64（1）：1-3.

［3］杨雪，杨文思，王勇，等.脾阳虚证中阳虚症状群的实验评价［J］.中华中医药杂志，2008，23（3）：244-246.

［4］杨雪，杨文思，王勇，等.脾阳虚消化不良症状群客观评价的实验研究［J］.中国中医基础医学杂志，2008，14（4）：271-272.

［5］马越，田瑶，姚小芹，等.石韦抗大鼠缓慢性心律失常作用的实验研究［J］.吉林中医药，2011，31（9）：915-916.