AR和HGF在大肠癌组织中的表达及其与肝转移的关系

李美琴，黄玲莎，朱 波，黄文成，赵慧柳，李佩章

（广西医科大学附属肿瘤医院 检验科，广西 南宁530021）

大肠癌（colorectal cancer，CRC）是临床最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率呈上升趋势，术后5年生存率在50%－55%。治疗失败的原因是术后的局部复发和转移。肝脏是大肠癌最常见、15%－25% 患者初诊时已存在肝转移［1］，有30%－40%的患者出现晚期肝转移。大肠癌术后约有50%在五年内出现肝转移。而大肠癌肝转移不经任何治疗的自然生存期，平均为6－10个月。早期诊断肝转移灶具有重要的临床意义。双向调节因子（Amphiregulin，AR）属EGF家族成员，有促进细胞侵袭和迁移的作用［2］。研究表明［3］，肝细胞生长因子（hepato－eyte growth factor，HGF）及其受体（C－met）在相当一部分人类肿瘤中存在高表达。并与恶性肿瘤发生、发展及转移密切相关。本研究旨在探讨AR和HGF的表达与大肠癌的发生、发展和肝转移的关系及AR和HGF之间有无相关性。

1 材料与方法

1.1 标本来源 广西医科大学附属肿瘤医院胃肠外科2009－01至2011－12大肠癌标本207例，男120例，女87例，年龄19－82岁，中位年龄50.5岁。直肠癌120例，结肠癌87例。根据2009年UICC TNM分期：Ⅰ期18例，Ⅱ期81例，Ⅲ期51例，Ⅳ期57例；其中淋巴结转移75例，肝转移60例，同时有淋巴结和肝转移21例。肝转移以病理诊断为标准。

1.2 试剂与方法 兔抗人AR多克隆抗体及DAB显色剂购自长沙赢润生物技术有限公司，兔抗人HGF单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。采用免疫组织化学技术，按试剂盒说明书操作。

1.3 结果判定标准 AR在细胞核或胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性，HGF在细胞膜或细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性。结果判断采用常用的半定量计分法：①选染色均匀的阳性表达区域，以着色细胞占视野细胞总数的多少计分：0分：≤5%；1分：6%－25% ；2 分：26%－50% ；3 分：51%－75%；4 分：＞75%。②显色度计分：高倍镜（×400）下取表达最强的部位，按显色程度计分，显色与背景相似者为0分；显色浅，略高于背景为1分；中度显色，明显高于背景为2分；强染，显色深棕色为3分。③总积分：将上述两种积分乘积为0表示阴性（一），＞1分为阳性，其中1－2分表示弱阳性（＋），3－4分表示阳性（＋＋），≥5分表示强阳性（＋＋＋）。

1.4 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件对实验数据进行分析，计数资料用χ2检验和秩和检验，等级资料用Spearman等级相关分析，以P≤0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 大肠癌中AR和HGF表达水平与临床病理因素的关系 AR和HGF的表达均与大肠癌瘤体大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及肝转移有关（P＜0.05），而与患者性别、年龄、部位无关（P＞0.05）。见表1。

表1 AR、HGF表达与大肠癌临床病理参数的关系

2.2 AR和HGF在大肠癌表达的相关性（表2）AR的表达和HGF的表达显著相关（P＜0.01）。

表2 AR和HGF在207例大肠癌患者表达的相关性（例）

3 讨论

AR又名双向调节因子，是人乳腺癌细胞株MCF－7识别的肝素结合糖基化蛋白，通过与表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor，EGFR）结合发挥生物学作用，主要作用是调控细胞扩增。在研究AR与肿瘤的恶性表型关系时，发现AR导致EGFR下调紊乱的现象，EGFR下调紊乱导致了EGFR蛋白的过度表达，这种过度表达对肿瘤细胞的扩增有明显的促进作用。因此，AR自分泌的出现，促进了癌的进展。在恶性肿瘤侵袭方面，涉及细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）的降解，蛋白酶是必需的，AR显示导致了 MMP－2，MMP－9等基质金属蛋白酶的表达［4］，由于 AR还有改变E－cadherin、cytokines的作用，故AR可能在细胞迁移和侵袭中发挥作用。本研究表明AR与大肠癌瘤体大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及肝转移有关（P＜0.05），而与患者性别、年龄、部位无关（P＞0.05）。这与 Michiyo Yamada等［5］报道一致。说明大肠癌肿瘤越大，分期越晚，AR表达程度越高；AR还可促进结肠癌肝转移。提示AR在降解破坏大肠癌肿瘤细胞外基质成分、促进肿瘤血管生成及浸润转移等方面具有促进作用。

HGF又名离散因子（SF），是酪氨酸激酶受体C－met的配体，在生理情况下HGF和C－met短暂结合发挥生理效应，而在肿瘤组织中可同时高表达HGF和C－met，形成正反馈，导致肿瘤的无限生长和侵袭行为，Toschi L等［6］表明HGF在肿瘤侵袭、转移及促进血管生成中发挥重要作用。本试验发现，HGF与大肠癌淋巴结转移呈明显正相关，说明其可能促进淋巴侵犯，可能是HGF表达上调、通过直接或间接途径促进淋巴管内皮增生、淋巴管数目增多，增大了肿瘤细胞与淋巴管接触的表面积；再加上新生淋巴管管壁薄、管腔大、通透性增加，有利于肿瘤细胞进入淋巴管，从而促进肿瘤的淋巴转移［7］。另外，TNM分期越晚，HGF表达越多，可能是中晚期高恶性大肠癌更需要新生的淋巴管生成以促进淋巴管播散、转移［8］。本研究还显示HGF表达与大肠癌肝转移有关，这与Fazekas K等［9］报道一致，说明HGF在人类大肠癌组织中的表达可以作为肝转移潜能的标志物。我们的研究结果表明，HGF的表达与大肠癌的发生、发展密切相关，是大肠癌侵袭转移的重要因素。

本研究还显示AR和HGF的表达显著相关，说明AR除了与其受体EGFR结合后促进淋巴管生成和血道转移外，与其他的生长因子如HGF等也有协同刺激作用，共同促进肿瘤转移。由于TNM分期、淋巴管转移和肝转移是大肠癌预后的重要参数，因此，AR和HGF可能是大肠癌预后不良的重要标志之一。

防治大肠癌淋巴结与肝转移已为临床医师高度重视，在大肠癌的发病过程中，AR与HGF的共同高表达具有协同效应，联合检测能在大肠癌手术治疗前，对大肠癌淋巴结及肝转移的可能性有所了解，有利于采取有效的、综合的和个体化的治疗方案。Normanno N等［10］在研究双调蛋白（AR）反义RNA表达对乳腺癌血管生成的抑制作用时，发现AR反义RNA表达可有效抑制乳腺癌的血管生成，在乳腺癌模型上，进一步发现AR反义重组腺病毒可有效地抑制肿瘤细胞的体外增殖及体内肿瘤生长。另外一些动物实验也证实，HGF的特异性拮抗剂NK4可以抑制肿瘤血管和淋巴管生成［11］。因此，可以通过同时抑制AR和HGF来抑制肿瘤淋巴管、血管生成，达到控制肿瘤淋巴管转移以及远处转移的目的，为肿瘤的治疗提供一个新思路。

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［3］Lesko E，Majka M.The biological role of HGF－MET axis in tumor growth and development of metastasis［J］.Front Bios－ci，2008，13：1271.

［4］Silvy M，Giusti C，Martin PM，et al.Differential regulation of cell proliferation and protease secretion by epidermal growth factor and amphiregulin in tumoral versus normal breast epithelial cells［J］.Br J Cancer，2001，84（7）：936.

［5］Michiyo Yamada，Yasushi Ichikawa，Shigeru Yamagishi，et al.Amphiregulin Is a Promising Prognostic Marker for Liver Metastases of Colorectal Cancer［J］.Clin Cancer Res，2008，14：2351.

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［7］Saharinen P，Tamm ela，T Karkkain enM J，et al.Lym phatic vasculature：developm ent molecular regulation and role in tumor metastasis and in flammation［J］.Trends Immunol，2004，25（7）：387.

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［9］Fazekas K，Csuka O，Koves I，et al.Experimental and clinico－pathologic studies on the function Of the HGF receptor in human colon cancer metastasis［J］.Clin Exp metastasis，2000，18：639.

［10］Normanno N，Bianco C，De Luca A，et al.Target－based agents against ErbB receptors and their ligands：a novel approach to cancer treatment［J］.Cancer，2003，10：1.

［11］Jiang WG，Davies G，Mart in T A，et al.The potential lymph angiogenic effects of hepatocyte growth f actor／scatter factor in vitro and in vivo［J］.Int J Mol Med，2005，16（4）：723.