葛根素对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌酶的影响

李 军，黄可欣，王元春，石 博＊

（1.吉林大学中日联谊医院 血液肿瘤科，吉林 长春130033；2.吉林大学白求恩医学院 形态学中心；3.吉林大学中日联谊医院 放射线科）

葛根（Puerariae Radix）为豆科植物野葛的干燥根。葛根素（Puerarin）是葛根的主要活性成分［1］，它是具有抗心律失常、抗心肌缺血、抗缺血再灌注损伤等作用［2，3］。在临床上葛根素注射液被广泛用于治疗心血管疾病，且具有较好的疗效［4，5］。虽然很多学者对其治疗心血管疾病的机制进行了探讨［2，3］，但是葛根素对心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia－reperfusion injury，MIRI）是否具有减少心肌梗死面积、减轻心肌酶学改变的作用尚未见相关报道。本文通过研究葛根素对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌梗死面积及心肌酶学的变化，进一步探讨葛根素的应用对心肌缺血再灌注损伤大鼠心脏的保护作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物和主要试剂 210±10g健康雄性Wistar大鼠50只，由吉林大学白求恩医学部动物实验中心提供（动物许可证号：SCXK2007－吉大－0003）；葛根素由南京正大天晴制药公司提供（纯度为99.8%）；实验用葛根素用生理盐水稀释；CK、LDH、NO、XO、SOD、MDA、GSH、GSH－Px试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 造模方法 动物适应性喂养1周后，随机分为5组：假手术组（S组），仅穿线，不结扎LAD；缺血再灌注组（I／R组），于结扎LAD前30min右颈静脉注射等容量生理盐水，结扎30min后松扎，再灌注120min；葛根素各剂量组于结扎LAD前30min于右颈静脉注射葛根素2、5、10mg／kg（为 A、B、C组），结扎30min后松扎，再灌注120min。采用利多卡因腹腔麻醉后，将大鼠固定于解剖台，颈部消毒，行颈前正中切口暴露气管，经口腔用8号灌胃针头进行气管插管并接动物呼吸机（呼吸频率60－80次／min，潮气量7－9ml）。于左侧第三或第四肋间打开胸腔，轻压将心脏挤出胸腔，剪开心包，以冠状动脉主干为标志，左心耳根部下方2mm处，在LAD面放置一小硅胶管连同冠脉用无创伤缝合线一起结扎，造成左心室室壁缺血。迅速将心脏送回胸腔，医用缝合线的两端留置体外备用。用长嘴止血钳将胸部皮肤和肌肉以及心脏挂线夹紧，防止发生气胸。30min后，放松挂线，抽出硅胶管，形成再灌注模型。造模结束时，逐层缝合肌肉、皮肤，切口处注入少许青霉素注射液，碘伏消毒，预防感染。

1.3 检测指标

1.3.1 心肌梗死面积检测 大鼠心肌缺血再灌注24h后，摘取心脏，做TTC染色明确未梗死与梗死心肌。未梗死区红染、梗死区染为白色，采用Motic Images Advanced 3.2图像分析软件测量。心肌梗死面积（%）＝（梗死区心肌面积／整个心肌面积）×100%。

1.3.2 心肌酶学指标检测 大鼠缺血再灌注3h后，断头取血分离血清；心脏灌流结束取左心室游离壁全层心肌，制10%心肌组织匀浆，离心取上清液待测XO含量；按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书进行CK、LDH、NO、XO、SOD、MDA、GSH、GSH－Px含量的检测。

1.4 统计学处理 采用SPSS13.0软件进行统计分析，CK、LDH、NO、XO、SOD、MDA、GSH 及GSH－Px数据均以±s表示，采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠心肌梗死面积的检测 与假手术组比较，I／R组大鼠的心肌梗死面积（78.35±3.12，%）明显增大，差异有统计学意义（P＜0.01）；与I／P组比较，高、中剂量葛根素组，心肌梗死面积（18.27±1.03，21.63±2.51，%）明显减小，差异有统计学意义（P＜0.01）；低剂量葛根素组，心肌梗死面积（51.26±2.18，%）也减小，差异有统计学意义（P＜0.05），并存在剂量反应关系。

2.2 各组大鼠心肌酶学的检测 与假手术组比较，I／R组大鼠的心肌酶学各指标均发生显著变化，差异均有统计学意义（P＜0.01）；与I／R组比较，葛根素高、中剂量组均减少了心肌细胞磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）释放、心肌组织黄嘌呤氧化酶（XO）活性及血清丙二醛（MDA）含量，提高了血清一氧化氮（NO）水平、血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活性及谷胱甘肽（GSH）含量，差异有统计学意义（P＜0.01），葛根素低剂量组各指标与模型组无显著差异（P＞0.05），见表1，2。

表1 各组大鼠血清CK、LDH、NO活性及心肌组织XO含量的比较（n＝10，±s）

表1 各组大鼠血清CK、LDH、NO活性及心肌组织XO含量的比较（n＝10，±s）

＊P＜0.01，compared with Sham group；▼ P＜0.01，compared with Model group；◆P＜0.01，compared with Model group

Group CK（×103 U／L） LDH（×103 U／L） NO（mmol／l） XO（U／g）Sham group 0.48±0.09 0.23±0.07 48.72±3.25 35.16±2.94 Model group 9.12±1.03＊ 2.98±0.52＊ 29.15±2.21＊ 52.13±3.18＊A 组 8.73±1.24 2.59±0.41 24.25±2.63 48.21±2.57 B组 3.29±1.12◆ 1.35±0.37◆ 39.48±1.95◆ 40.77±2.46◆C组 1.72±0.61▼ 0.46±0.11▼ 44.27±3.01▼ 36.67±2.83▼

表2 各组大鼠血清SOD、MDA、GSH及GSH－Px活性的比较（n＝10，±s）

表2 各组大鼠血清SOD、MDA、GSH及GSH－Px活性的比较（n＝10，±s）

＊P＜0.01，compared with Sham group；▼ P＜0.01，compared with Model group；◆P＜0.01，compared with Model group

Group SOD（U／ml） MDA（U／ml） GSH－Px（U／ml） GSH（mg／L）Sham group 271.23±14.62 3.57±0.93 418.26±10.13 250.21±16.27 Model group 183.23±9.74＊ 6.94±0.37＊ 341.52±8.76＊ 195.31±9.15＊A 组 200.11±10.14 5.68±0.77 372.16±11.38 203.15±10.34 B组 241.25±11.04◆ 4.53±0.72◆ 382.16±10.82◆ 219.31±7.83 C组 257.81±8.73▼ 3.99±0.91▼ 400.31±12.62▼ 238.16±9.17▼

3 讨论

近年来，氧化应激在心血管疾病中作用日益受到重视，其中大量活性氧自由基（ROS）产生是形成氧化应激的基本机制［6］。大量研究显示：心肌缺血再灌注损伤会进一步加大心肌缺血，心功能障碍程度比急性心肌梗死严重，病死率更高［7，8］。心肌缺血再灌注不可避免的导致心肌损伤，发生心肌缺血和梗死。本实验采用TTC染色区别梗死区和非梗死区，检测心肌梗死的面积发现：与假手术组比较，I／R组大鼠的心肌梗死面积明显增大，差异有统计学意义（P＜0.01），与I／R组比较，高、中剂量葛根素组，心肌梗死面积明显减小，差异有统计学意义（P＜0.01）；低剂量葛根素组，心肌梗死面积也减小，差异有统计学意义（P＜0.05），说明葛根素能缩小心肌梗死范围，保存了更多的存活心肌，研究发现，其缩小心肌梗死范围机理与抗氧化应激作用相关。本研究检测心肌酶结果提示：与假手术组比较，I／R组大鼠的心肌酶学各指标均发生显著变化，差异均有统计学意义（P＜0.01）；与I／R组比较，葛根素高、中剂量组均减少了心肌细胞磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）释放、心肌组织黄嘌呤氧化酶（XO）活性及血清丙二醛（MDA）含量，提高了血清一氧化氮（NO）水平、血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活性及谷胱甘肽（GSH）含量，差异有统计学意义（P＜0.01），葛根素低剂量组各指标与I／R组无显著差异（P＞0.05）；并存在剂量反应关系，其心肌酶学指标检测与心梗面积检测结果相符，表明葛根素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有显著的保护作用。

［1］Qin F，Huang X，Zhang H M，et al.Pharmacokinetic comparison of puerarin after oral adminis－teration of Jiawei－Xiaoyao－San in healthy volunteers and functional dyspepsia patients：influence of disease state［J］.J Pharm Pharmacol，2009，61（1）：125.

［2］沈炳权，蔡兆斌，徐群红，等.葛根素对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国中西医结合急救杂志，2004，11（6）：361.

［3］刘启功，王 琳，陆再英，等.葛根素抗心肌缺血及其机理的实验研究［J］.临床心血管病杂志，1998，14（5）：292.

［4］祝 星，鱼运寿，李仁君，等.葛根素对冠心病患者心肌缺血的疗效［J］.第二军医大学学报，2003，24（3）：343.

［5］杨春茂，李德正，袁锐三.葛根素治疗冠心病100例疗效观察［J］.山东医药，2008，48（15）75.

［6］Xu X，Cao Z，Cao B，et al.Carbamylated erythropoietin protects the myocardium from acute ischemia／reperfusion injury through a P13K／Akt－dependent mechanism［J］.Surgery，2009，146（3）：506.

［7］Zalewski J，Nessler J.The endogenous cardioprotection during reperfusion in acute myocardial infarction［J］.Kardiol Pol，2011，69（Suppl 3）：67.

［8］吴锦波，吴平生，张宏斌，等.促红细胞生成素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护性作用［J］.第四军医大学学报，2009，30（19）：1894.