基因分型在疑难血型中的诊断意义

梁义安，蒋利星，秦次贵

（1.南宁中心血站 采血科，广西 南宁530003；2.桂林市中心血站 检验科；3.桂林银海医院 检验科）

ABO血型抗原在某些疾病状况下会出现减弱或消失等情况，血型鉴定困难，用血清学方法有时不能完全准确定型，造成不能及时准确配型延误救治。采用PCR－SSP方法对疑难血型准确定型有效解决疑难血型鉴定困难问题，是对血型学方法的有益补充。我们收集2010年10月－2011年9月共10例疑难血型，进行基因分型并正确定型，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般材料

10例患者是南宁市医院入院经临床申请输血，正反定型检测不符的病例。其中白血病7例，肝病1例，多发性骨髓瘤2例，年龄在55岁－71岁。收集10例患者EDTA抗凝剂静脉全血300μl用于基因检测。

1.2 试剂

正反定型试剂采用上海血液生物医药有限责任公司生产抗－A、抗－B抗－H（单克隆抗体）；标准 A、B、O红细胞南宁中心实验室自制。ABO血型基因分型试剂由美国G＆T公司提供。

1.3 方法

1.3.1 ABO正反定型 参照《全国临床检验操作规程》［1］操作。

1.3.2 PCR扩增 10例患者的300μl EDTA抗凝全血，采用Promega System试剂盒按操作说明书制备DNA，用TB溶液20μl溶解待用。采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR－SSP）检测ABO血型基因型，内对照基因是人类生长激素（HGH），每个ABO基因分型反应孔内各加入9μl混合液。按循环参数94℃，3min预变性；94℃变性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s；30个循环后72℃延伸5min；降温4℃。扩增结束PCR产物在2%的琼脂糖内电泳30min，结束电泳，凝胶成像记录结果。

2 结果

10例正反定型不符的疑难血型标本中有2例白血病病例正定型结果为A型血，且抗A凝集较弱，与抗B不凝集，基因分型结果为AB型。2例白血病病例、1例多发性骨髓瘤病例正定型为B血型，反定型检测为AB型血，基因分型结果为AB型血。2例白血病病例正定型为O型血，反定型为B型血，基因检测结果为B／O型血。1例白血病和1例肝病正、反定型均为O型血，基因分型为B／O型血。1例多发性骨髓瘤正定型为O型血，反定型为A型血，基因检测结果为A／O型血。详见表1。图1所示即基因分型检测结果，以上病例选择相合血液输注后未见输血反应。

表1 10例疑难血型定型结果

图1 ABO血型基因扩增电泳图

3 讨论

根据最后血型定型结果，收集的10例疑难血型病例有8例血型抗原减弱导致正定型漏检血型抗原，2例血型抗原和抗体均减弱导致正反定型血型鉴定有误。采用血清学方法检测血型有时受到抗原活性、抗体特异性等因素的影响，基因分型方法操作简便不受抗原抗体因素影响、结果可靠可用于疑难血型的鉴定中［2，3］。分子生物技术的迅速发展推广完全可作为血型定型的常规手段，该方法定型具有准确、快速、操作简便和所需标本少等优点。PCRSSP方法可对于正反定型不相符判断血型困难无法配血，一段时间反复输血患者造成血清学干扰结果，由于疾病本身造成血型抗原的变化等具有明显优势。以上因素，对于一些亚型和弱血型抗原的鉴定均能显现出优势［4，5］，尤其对于一些临床表现严重的老年患者，血型抗原易出现改变，基因检测方法可有效避免血清学假阴性结果误判血型等情况［6］。应用血清学检测基础上，科学合理结合ABO血型基因分型方法可更有效及时解决疑难血型鉴定问题，促进临床输血医学发展。

［1］叶毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程／中华人民共和国卫生部医政司［M］.第3版.南京；东南大学出版社，2006：246－257.

［2］石 宁，兰炯采.ABO血型系统的基因分型［J］.国外医学·输血及血液学分册，1997，20（5）：286.

［3］赵桐茂.人类血型分型的新纪元［J］.中国输血杂志，2007，20（1）：1.

［4］刘立坤.血型检测中ABO血型正反定型不符影响因素分析［J］.河北医药，2009，31（27）：3235.

［5］毛 伟，王 芳，程 磊，等.ABO血型定型中正反定型不一致原因分析［J］.重庆医学，2007，36（21）：2148.

［6］贾业红，邢红妍.骨髓增生异常综合征致A、B抗原减弱1例［J］.中国冶金工业医学杂志，2007，24（2）：248.