前列腺癌患者血清miR－21、PSA水平及意义

赵 宏，王玉华，马志俊

（丹阳市人民医院，江苏 丹阳212300）

前列腺癌（prostatic carcinoma，PCa）是老年男性常见的的肿瘤，其已成为危害男性健康的第一位肿瘤［1］。据统计，2008年美国有186320例新增患者，其中28660例患者死于PCa，在我国，随着生活水平、生活方式的改变，PCa的发病率及死亡率近年来有上升的趋势［2］。PCa确诊时往往已发展到中晚期，所以早期诊断及早期治疗是降低该病死亡率的关键。血清前列腺特异性抗原（prostate－specigen，PSA）被公认为最具有临床价值的前列腺癌标志物，但用PSA诊断前列腺癌仍缺乏足够的敏感性和特异性。最近，研究发现肿瘤患者血清中含有大量稳定的miRNAs，血清中异常表达的miRNAs预示着它有可能成为一类新型的肿瘤标记物［3］。本研究旨在观察前列腺癌患者血清miR－21和PSA水平，并且探讨两者的关系，以期为PCa的早期诊断提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2008年8月－2011年12月在本院接受治疗的PCa患者48例，年龄51－77岁（≤65岁25例、＞65岁23例）。均经病理检查证实诊断。均为初诊患者，按TNM临床分期标准，分为低分期组（T1－T2期）23例、高分期组（T3－T4期）25 例。患者血液标本离心取血清迅速置于－70℃超低温冰箱。对照组标本采用50例正常人血清。标本采集征得病人及健康志愿者同意。

1.2 方法

1.2.1 血清 TPSA、FPSA 检测采用 Roche Elecsys2010电化学发光免疫检测仪以及配套试剂，参数按试剂说明书设置，得到TPSA、FPSA的浓度值，再计算FPSA／TPSA比值。

1.2.2 血清 miR－21检测采用荧光定量 RT－PCR方法检测miR－21水平，U6作为内参照，具体实验步骤参照聂宇等［4］的文献，引物如表1所示。结果采用相对定量法进行分析，采以2－△△ct表示前列腺癌患者血清中miR－21表达量相对于对照组血清的变化倍数。其中△△ct＝（Ct－CtU6）癌－（Ct－CtU6）正常。

表1 本研究所用引物

1.2.3 统计学方法 数据分析采用SPSS 12.0统计软件。计量资料以±s表示，采用t检验；相关性采用直线相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清PSA含量 前列腺癌组患者血清TPSA含量高于健康对照组（P＜0.05）；前列腺癌组患者血清FPSA含量均高于健康对照组（P＜0.05）；而前列腺癌组FPSA／TPSA比值却明显低于健康对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。本研究发现高分期组前列腺癌组患者TPSA含量和FPSA含量均高于低分期组（P＜0.05），高分期组FPSA／TPSA比值与低分期组差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表2。

表2 血清中TPSA、FPSA含量与比值（±s，ng／ml）

表2 血清中TPSA、FPSA含量与比值（±s，ng／ml）

50 1.38±0.87 0.49±0.21 0.36±0.08 PCa患者 48 19.21±12.04 1.97±1.75 0.10±0.06高分期PCa患者 25 25.21±17.23 2.43±1.81 0.10±0.07低分期PCa患者TPSA健康对照组组别 n TPSA（ng／ml）FPSA（ng／ml）FPSA／23 13.78±10.12 1.47±0.97 0.11±0.05

2.2 血清miR－21水平 荧光定量PCR结果显示，前列腺癌患者外周血miR－21水平明显高于健康对照组（P＜0.05），其中高分期组前列腺癌组患者外周血miR－21水平明显高于低分期组（P＜0.05），结果见图1.

图1 各组外周血miR－21水平

2.3 相关性分析 前列腺癌患者外周血miR－21水平与 PSA 含量显著正相关 （r＝0.340，P＝0.0022）；其中高分期组r＝0.450，P＝0.0001；低分期组r＝0.470，P＝0.000。

3 讨论

MicroRNAs（miRNAs）是一类长度为21－25个核糖核苷酸的非编码内源性小单链RNAs分子。其通过与靶基因mRNA的3′非编码序列互补配对来影响mRNA的稳定性或抑制其翻译，实现对蛋白表达的调控［5］。最近研究发现，血清／血浆中存在着大量循环的miRNA，不同肿瘤中miRNA的表达谱也不同，而在正常人群中血清miRNA则很稳定。Lawrie等［6］首次对血清miRNA进行研究，他们发现miR－21在血清中表达，且其表达水平与弥散性B细胞淋巴瘤患者的存活率密切相关。Masami等［7］对7例正常血清样本用miRNAs芯片技术进行了检测，发现了148种miRNA的存在。

有研究对血清miRNAs与前列腺癌的关系进行了研究。Mitchell等［8］在小鼠建立了人类前列腺癌细胞荷瘤模型，小鼠血液中发现了人m iR－141。他们还发现转移的前列腺癌病人血清中miR－141的表达水平非常高，以血清miR－141的表达水平作为前列腺癌的诊断标志物具有较高的特异性及敏感性。关于国人血清miRNAs与前列腺癌的关系尚少见于报道。

本研究采用电化学发光方法检测了前列腺癌患者外周血中TPSA和FPSA含量，发现患者两者的含量明显高于健康对照组，并且高分期组TPSA和FPSA含量均高于低分期组。此外，本研究还采用RT－PCR方法检测了前列腺癌患者外周血中miR－21的水平，发现患者外周血中miR－21表达明显高于健康对照组，并且高分期组miR－21水平高于低分期组。通过统计学分析，我们发现前列腺癌患者外周血miR－21水平与PSA含量显著正相关。

综上所述，外周血miR－21表达与前列腺癌的发生具有密切的联系，miR－21水平与PSA含量存在一定的关联，联合应用两者的检测，对于前列腺癌的诊断具有重要意义。

［1］Jemal A，et al.Cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2008，58（2）：71.

［2］上海市疾病预防控制中心，2005年上海市恶性肿瘤发病率［J］.上海预防医学杂志，2008，20（8）：421.

［3］Zhu，W，et al.Circulating microRNAs in breast cancer and healthy subjects［J］.BMC Res Notes，2009，2：89.

［4］聂 宇，张.，韩变梅，王恺隽.常规TRIzol法提取血清microRNA的改良［J］.中华实用诊断与治疗杂志，2011，25（5）：427.

［5］Dirks，P.B.，MicroRNAs and parallel stem cell lives［J］.Cell，2009.138（3）：423.

［6］Lawrie CH，et al.Detection of elevated levels of tumour－associated microRNAs in serum of patients with diffuse large B－cell lymphoma［J］.Br J Haematol，2008，141（5）：672.

［7］Tanaka M，et al.Down－regulation of miR－92in human plasma is a novel marker for acute leukemia patients［J］.PLoS One，2009，4（5）：e5532.

［8］Mitchell PS，et al.Circulating microRNAs as stable blood－based markers for cancer detection［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2008，105（30）：10513.