HPLC法测定复方青黛丸中欧前胡素的含量

高文平 冯泽海 刘 成 李 娟 陕西医药控股集团天宁制药有限责任公司（绥德718000）

复方青黛丸是由青黛、土茯苓、白芷、丹参、紫草等中药组成的复方制剂。收载于《中国药典》2010年版一部。具有清热凉血，解毒消斑的功效。临床上常用于治疗血热所致的白疕、血风疮；银屑病进行期、玫瑰糠疹等。笔者通过高效液相色谱法测定复方青黛丸中欧前胡素的含量，以进一步提高该药品质量标准。

1 仪器与试药 仪器：Waters515型HPLC系统；Waters2487型双通道此外检测器；KQ250型超声波清洗器（昆山市淀山湖检测仪器厂）；BP211D型电子天平（赛多利士）。

试药：欧前胡素对照品（中国药品生物制品检定所11826—200410）；甲醇（色谱纯）；乙晴（色谱纯）；纯化水；复方青黛丸（陕西医药控股集团天宁制药有限责任公司，批号：120618，111209，111106）

2 方法学考察 2.1 色谱条件 色谱柱：PromosiL C18 100Å分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙晴－水（47∶53）；流速：1.0mL／min；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长：300nm；理论塔板数17381。

2.2 溶液制备 2.2.1对照品溶液的制备：精密称取欧前胡素对照品2.47mg置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品贮备液（每1mL含欧前胡素49.4μg）。再精密量取对照品贮备液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得欧前胡素对照品溶液（每1mL含欧前胡素4.94μg）。

2.2.2 样品溶液的制备：取本品适量，研细，取约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理（功率250w，频率25kHz）60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 实验方法 2.3.1 专属性试验：取按标准处方量及制法制得不含白芷的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。精密吸取上述对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液各10μL，进样测定，结果阴性对照溶液在与对照品溶液和供试品溶液色谱峰相应位置上无色谱峰出现，表明阴性对照品溶液对测定结果无干扰，方法专属性良好，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.3.2 线性关系考察：分别精密量取欧前胡素对照品贮备液（49.4μg／mL ）0.1、0.5、1、2、3mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进样分析，以峰面积（A）为纵坐标，相应浓度（C）为横坐标进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程为 A＝22833.6692C－2313.4912（r＝0.9998），线性范围0.494～14.820μg／mL，结果表明峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验：精密吸取2.2.1项下对照品溶液10μL，重复进样5次，欧前胡素峰面积的RSD为0.44%，表明精密度良好。

2.3.4 重复性试验：取同一批样品（120618）5份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别进样依法测定欧前胡素含量。结果欧前胡素含量的RSD为1.24%，表明重复性良好。

2.3.5 稳定性试验：取供试品溶液（120618）与对照品溶液各10μL，分别于0、2、4、6、8、12h测定，结果峰面积积分值的RSD分别为1.64%与0.88%，表明供试品溶液与对照品溶液在12h基本内稳定。

2.3.6 回收率试验：取6份已知含量的样品（120618），分别精密加入欧前胡素对照品溶液（浓度4.94μg／mL）适量，挥干，按正文方法进行处理和测定，计算回收率，测得欧前胡素的平均回收率为99.05%（RSD ＝0.66%）。结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收率

2.3.7 样品测定：照2.2.2项的处理方法，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪。测定3批样品，结果3批样品中（批号120618，111209，111106）欧前胡素的含量分别为：0.0474、0.0446、0.0439mg／g。

3 讨论与结论 3.1 检测波长的选择 欧前胡素在202、218、248、300nm处均有吸收，《中国药典》（2010年版一部）“白芷”含量测定中检测波长选用了300nm，故也选用300nm作为欧前胡素的检测波长。

3.2 流动相的选择 本试验曾参考文献［1－4］先后试用甲醇－水体积比（55：45）、（60：40），乙腈－水体积比（52：48）、（47：53）等不同比例作为流动相测定，结果乙腈－水（47：53）能将欧前胡素与其它杂质峰较好的分离，故选用此流动相。

3.3 样品提取方法的选择 试验中曾采用甲醇和乙醚作为提取溶媒，对比了超声提取、回流提取、索氏提取等方法，结果甲醇超声提取法结果优于其他方法。

3.4 超声时间的选择 将供试品分别用50mL甲醇超声处理15min，30min，45min，60min。结果表明，选择超声提取60min欧前胡素含量最高。

试验表明，本测定方法简单，测定结果准确可靠，灵敏、重现性好，可做为该制剂的质量控制指标。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：107.

［2］陆廷勇.HPLC法测定复方青黛胶囊中欧前胡素的含量［J］.齐鲁药事，2011，30（12）：688－689.

［3］唐福林，黎德南，韦翠吉，等.HPLC法测定克痢痧微丸中欧前胡素的含量［J］.广西工学院学报，2011，22（2）：78－80.

［4］高文平，李 拜，袁云刚.高效液相色谱法测定复方青黛丸中靛玉红含量［J］.中国药业，2007，16（17）：28.