黑龙江某猪场繁殖障碍性疾病病原分析

许云龙，佟海山，周玉龙，徐 闯，张泽才，蒋东平，许铁男，朴范泽

（1.黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆163319；2.杜尔伯特蒙古族自治县畜牧兽医局，黑龙江 杜尔伯特166200）

种猪繁殖障碍性疾病主要以妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎、产出无活力的弱仔、畸形仔、少仔和公、母猪的不育等为特征，给养猪业带来了巨大的经济损失。能够引起母猪繁殖障碍的病因比较复杂，既包括病原因素，又包括非病原因素。危害最严重的主要是病毒感染，如猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪日本乙型脑炎病毒（JEB）和猪瘟病毒（CSFV），另外猪圆环病毒（PCV）感染引起的母猪繁殖障碍也引起了人们的关注［1］。对于发生母猪繁殖障碍性疾病的猪场，只有弄清发病主要原因，采取相应的措施才能有效地控制该病的流行。

1 发病情况

黑龙江省某大型猪场的一个分场具有基础母猪和后备母猪3 000头，自2011年3月，该场母猪发生繁殖障碍性疾病，经调查发生繁殖障碍的母猪90%是初产。猪群中出现死胎和木乃伊胎的母猪平均每个月占33.6%（84/250），流产母猪平均每个月占1.2%（3/250）。个别胎次中伴有弱仔，出生后不久死亡。猪群其他类型的猪相对比较稳定。

2 主要症状及病理变化

一般初产母猪上产床后就表现为喘，高烧，厌食，产完仔以后症状立即消失。可见母猪产出不同发育阶段的死胎和木乃伊胎。不同的流产胎儿表现的病理变化差别较大，通过剖检观察结果总体可见如下病理变化，有的胎儿可见皮下水肿，皮下或者内脏器官黄染，腹腔积液有纤维素性渗出物，肺水肿，肾脏有出血点，膀胱黏膜有出血点等。

3 实验室诊断

为确诊病因及进一步防控该病，本研究通过PCR方法对能够引起猪繁殖障碍的主要病毒性病原PRRSV、CSFV、PRV、PPV 和PCV2进行了检测，同时对相应样本进行了细菌分离鉴定。

3.1 常见病毒检测 根据文献［2－3］报道设计 CSFV、PRV、PPV和PRRSV的PCR检测引物，并进行上述病毒的PCR检测。参照PCV2REP基因序列（GenBank登录号：HM038020），应用 DNAStar软件设计一对特异性引物，上游引物：5′－CGCGGGCTGGCTGAACT－3′492～508bp，下游引 物：5′－CGGGGTCTGATTGCTGGTAA－3′808～827bp，目的基因336bp（由上海生工生物工程技术服务有限公司合成）。PCV的PCR检测如下：反应体系（25μL）：以提取的组织DNA为模板，Buffer 2.5μL，dNTPs 2.0μL，上下游引物各1.0μL（25 μmol/mL），模板1.0μL，TaqDNA 聚合酶0.65 U，MgCl22.0μL。反应程序为：94℃10min，30个循环（94℃ 40s、55℃ 40s、72℃ 1min），72℃ 10 min。为进一步证实PCR扩增得到的PPV和PCV目的基因是正确的，各随机选择一个样本的目的基因进行克隆测序分析。

18头胎儿样本经PCR检测结果，未检测到CSFV、PRV和PRRSV的目的基因，检测到了PCV和PPV目的基因，见图1，2。PCV和PPV目的基因测序结果，经BLAST分析表明，最高同源性分别达到（PCV GenBank登 录 号：JQ955679.1）99% 和 （PPV GenBank登录号：DQ675456.1）100%，证明扩增得到的PCR产物为特异性的目的基因。结果PCV阳性率100%（18/18），PPV阳性率50%（9/18）。

图1 PCV－2PCR扩增结果

3.2 细菌的分离鉴定 将无菌采集的流产胎儿肝脏、脾脏和肺脏分别接种到含有新鲜的5%绵羊血液营养琼脂培养基和TSA培养基，进行常规细菌分离培养（需氧培养和厌氧培养），生化鉴定。结果在需氧和厌氧条件下，从流产胎儿的肝脏、脾脏和肺脏内分离到一种革兰阳性链状球菌，在血液营养琼脂培养基上呈透明小菌落，有α溶血特征。分离菌株菊糖、棉子糖和蜜二糖阳性，甘露醇和山梨醇阴性，马尿酸盐阳性，精氨酸阳性，透明质酸酶试验阴性，在6.2%NaCl中不生长等，以上生化结果基本符合猪链球菌生化指标［4］。经上述方法最终确定猪链球菌感染率17%（3/18）。

图2 PPV PCR扩增

4 防治措施

通过上述病毒和细菌检测结果最终确定，病死胎儿样本中PCV2感染率100%（18/18），PPV感染率50%（9/18），猪链球菌感染率17%（3/18），上述病原可能是引起该猪场母猪繁殖障碍的主要病原因素。针对上述情况，我们除了采取改善营养、增强母畜抗病力、加强环境卫生条件以外，母猪在配种前增加了2次圆环病毒灭活疫苗免疫，将原来使用的PPV灭活疫苗产品进行了更换，并进一步加大在免疫环节中的监督力度，尽量避免漏免和免疫不确实等问题。针对猪链球菌感染，在母猪配种后每间隔30d使用高度敏感的壮观霉素或新霉素原粉进行预防。通过上述方法的实施，显著降低了该猪场的母猪繁殖障碍发病率。

在本次病原检测结果中，存在PCV2、PPV和猪链球菌混合感染的情况，是否上述3种病原同时参与致病还有待于进一步研究，但是可以说明三者均可以垂直感染。18个胎儿样本中PCV2阳性率100%，可见我们在关注传统的繁殖障碍性疾病的同时，应该对PCV2引起的繁殖障碍加以重视。据不完全统计，繁殖障碍性疫病发病率达20%～40%以上，平均在30%以上给养猪业带来很大的经济损失。因此，应该加大对猪繁殖障碍性疾病的研究力度，保障养猪业的持续健康发展。

［1］ （美）斯特劳.猪病学［M］.9版.赵德明，张仲秋，沈建忠，主译.北京：中国农业出版社，2008.

［2］ 刘建柱，于立权，朴范泽，等.猪瘟病毒猪细小病毒猪伪狂犬病病毒PCR检测方法的建立［J］.中国兽医杂志，2005，41（10）：17－19.

［3］ 刘辉，熊金凤，邹浩勇，等.猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT－PCR检测方法的建立［J］.华中农业大学学报，2008，27（1）：12－18.

［4］ 李一经.兽医微生物［M］.北京：高等教育出版社，2011：150.