安徽省不同产区不同栽培品种银杏叶总内酯含量的研究

2013-11-21周正华杜安全王先荣王德群刘守金梁益敏

世界中医药 2013年4期

周正华杜安全王先荣王德群刘守金梁益敏

(1安徽省医学科学研究院，合肥，230061;2安徽中医学院，合肥，230038)

银杏Ginkgo biloba L.属裸子植物，是银杏科银杏属唯一生存种，是我国特有的古树种之一。银杏叶主要有效成分是黄酮类化合物和萜类内酯，能有效改善心脑血管和末梢循环，用于治疗动脉硬化、高血压、脑卒中等心脑血管疾病。其中银杏内酯主要有银杏内酯A、B、C(Ginkgolide A、B、C)和白果内酯(Bilobalide)等。我们于1997年至1999年间，研究了安徽省不同产区、不同栽培品种和不同生长年限银杏叶总黄酮苷和总内酯的含量［1－5］。本文是研究安徽省不同产区不同栽培品种银杏叶中萜内酯的含量，现报道如下。

1 仪器和试药

美国Waters公司高效液相色谱仪(600型泵，410示差折光检测器)，Perkin－Elmer天平，C18萃取小柱(Waters公司)。对照品 Ginkgolide A、B、C和 Bilobalide由本组自制，经四谱鉴定，纯度经HPLC分析，含量大于99%。银杏叶样品由安徽中医学院王德群教授采集并鉴定。试剂:甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱条件色谱柱:大连依利特Hyper ODS2 C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，柱温30 ℃。流动相:甲醇－水(33∶67)，流速 1.0 mL/min。

2.2 对照品溶液的制备分别取内酯对照品Ginkgolide A、B、C 和Bilobalide 1.5 mg，精密称定，以流动相溶解定容至10 mL，摇匀，即得。

表1 安徽省不同产区不同栽培品种银杏叶总内酯的含量(n=3)

2.3 供试品溶液的制备取干燥的银杏叶细粉0.5 g，精密称定，放入25 mL圆底烧瓶中，加入10%甲醇5mL，于150℃油浴中回流提取15 min，趁热抽滤，残渣用2%甲醇2 mL洗涤，抽干，继续用10%甲醇4 mL同法提取，过滤，合并提取液待上柱。称取0.5 g聚酰胺装入小层析柱，下口接C18小柱，先用甲醇10 mL洗脱，再用2%甲醇10 mL洗脱，然后在聚酰胺柱上缓慢加入银杏叶提取液，瓶用2%甲醇5 mL洗3次，洗液一并加入聚酰胺柱，待快干时，用5%甲醇5mL洗脱，减压抽干，弃去聚酰胺小柱，C18小柱先用蒸馏水1 mL洗涤，再用正己烷6 mL洗涤，弃去洗涤液，最后用乙酸甲酯－正己烷(4∶6)10 mL洗脱，并收集于20 mL圆底烧瓶中，于旋转蒸发器上减压蒸干，残留物准确加入流动相2 mL使溶解，即得。

2.4 样品测定根据安徽省纬度分布，分别采集8、9月份安徽省6个产区不同栽培品种的银杏叶制备供试品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各100 μL，分别注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定峰面积，用外标法计算，即得总内酯含量，结果见表1。

2.5 方法学考察参见我们已发表银杏内酯含量测定的论文［1］标准曲线分别为:Bilobalide回归方程Y=－215+1 413X;相关系数为 0.999 7;线性范围:4.3758～20.879 μg。Ginkgolide A 回归方程 Y=97+1377X;相关系数为 0.998 4;线性范围:5.0760～25.380 μg。Ginkgolide B 回归方程 Y= －260+1 278X;相关系数为 0.999 3;线性范围:5.973 0～29.865 μg。Ginkgolide C回归方程Y= －48+1 334X;相关系数为0.999 1;线性范围:5.026 2～25.131 μg。

加样回收实验结果:Bilobalide为97.9%，Ginkgolide A为97.2%，Ginkgolide B为98.9%，Ginkgolide C为98.2%。