复方益肾更宁合剂对围绝经期大鼠E2、β-EP 的影响*

王新斌，赵粉琴，谢智慧，安蓉芳

( 甘肃中医学院，甘肃 兰州730000)

目前现代医学对围绝经期综合征的治疗常用的是激素替代疗法，虽然其改善围绝经期综合征疗效肯定，但因其可致阴道不规则出血、乳房胀痛、中远期使用可致子宫内膜癌、乳腺癌等副作用而不被广大妇女普遍接受，使而且应用有一定局限性。中医药对本病的研究已经逐步深入并且取得了一定的进度，治疗上辨病与辨证相结合，着眼于整体调治，具有综合性强，副作用少，远期疗效较稳定的特点，因此从中医药角度寻找较为理想的疗法，成为研究的重点。本文通过对围绝经期大鼠血清雌二醇(E2)及下丘脑β－内啡呔(β-EP)的测定，探讨益肾更宁合剂防治围绝经期综合征的作用机制。

1 材料与方法

1．1 动 物

SPF 级SD 健康雌性大鼠60 只，鼠龄15～18 月，体质量(300±20)g;4～6 月龄SD 雌性大鼠10 只，体质量(250 ±20)g。动物合格证:SCXK(甘)2004－0006，均由甘肃中医学院中心实验室提供。

1．2 药品、试剂与仪器

益肾更宁合剂由熟地黄12 g、山茱萸10 g、淫羊藿18 g、珍珠母30 g、白芍12 g、麦冬10 g、黄连6 g、紫草12 g 等组成，由甘肃中医学院制剂室提供;尼尔雌醇，1 mg/片，北京四环制药有限公司产品，国药准字号［H11020123］。血清雌二醇(E2)、放射免疫盒，北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号20070605;β－内啡呔(β-EP )放射免疫盒，北京华英生物技术研究所提供，批号20070730。80－1 型电动离心机，金坛市恒丰仪器厂产品;GC－911 型γ－放射免疫计数器，中国科技大学实业总公司产品，兰空医院放免科提供。

1．3 模型的建立

选取60 只15～18 月龄SPF 雌性SD 大鼠，连续5 d 进行阴道脱落细胞涂片及光学显微镜下观察，无规律性动情周期变化，确定为围绝经期大鼠［1］。

1．4 动物分组与给药

据此选取15～18 月龄SD 雌性大鼠40 只，采用随机数字法分为模型对照组(围绝经期组)、尼尔雌醇组和益肾更宁合剂高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组8 只。另选青年大鼠(鼠龄4～6 月)8 只作为青年对照组。参照文献方法［2］，按人和大鼠间体表面积折算的等效剂量比率1∶0．018 计算给药剂量。模型对照组、青年对照组以蒸馏水0．01 mL/g体质量灌胃，1 d 1 次。尼尔雌醇组，用蒸馏水配成混悬液，剂量为0．24 μg /g，相当于成人用量的8 倍，以0．01 mL/g 体质量灌胃，每2 周灌胃1 次。益肾更宁合剂高、中、低剂量组依次按生药量26．56，13．28，6．64 g/kg，以0．01 mL/g 体质量灌胃，1 d 1 次。各组根据体质量变化，调整给药剂量，连续给药4 周。

1．5 检测指标

大鼠于末次给药并且禁食、禁水24 h 后，于腹主动脉采集血，离心分离血清，－20 ℃保存备用。大鼠血清E2、β-EP 检测按试剂盒说明书操作。

1．6 统计学方法

采用SPSS 13．0 统计分析软件处理。数据以均数()±标准差(s)表示，采用单因素方差分析。以P＜0．05 为差别有统计学意义。

2 结 果

益肾更年合剂可提高围绝经期大鼠E2、β-EP含量，且存在着一定的量效关系。与模型组对照对比，各剂量用药组E2、β-EP 含量均有所升高，其中益肾更年合剂高、中、低剂量组E2和高剂量组β-EP较之，差别均有统计学意义(P＜0．05)。结果见表1。

表1 各组大鼠血清E2、β-EP 含量对比 ng·L-1，±s

表1 各组大鼠血清E2、β-EP 含量对比 ng·L-1，±s

注:与模型对照组对比，* P ＜0．05，＊＊P ＜0．01;与青年对照组对比，# P ＜0．05 ，## P ＜0．01。

组 别 动物数 E2 β-EP模型对照组 7 7．547 1 ±0．806 7## 115．374 3 ±30．196 8##青年对照组 8 14．340 0 ±0．627 5 194．008 0 ±45．076 9＊＊尼尔雌醇组 8 11．137 1 ±0．932 6＊＊## 171．906 5 ±32．639 7*复方益肾更宁合剂高剂量组 8 10．213 1 ±0．782 1＊＊# 166．407 1 ±30．309 1*复方益肾更宁合剂中剂量组 8 9．283 8 ±0．539 5＊＊## 145．838 4 ±26．107 0#复方益肾更宁合剂低剂量组 8 8．953 3 ±0．821 7* ## 140．841 3 ±21．804 7#

3 讨 论

女性进入围绝经期，由于卵巢功能减退，雌激素分泌减少，对下丘脑－垂体－卵巢轴的负反馈作用减弱，使FSH、LH 分泌增加。雌激素的缺乏是发病的始动环节。本实验中，复方益肾更宁合剂低、中、高剂量组血清E2含量较模型对照组升高，差别有统计学意义(P＜0．05)，且低剂量、中剂量、高剂量组血清E2含量按顺序呈递增趋势，可见益肾更宁合剂能升高围绝经期大鼠血清E2水平。近几年，在中医微观辨证方面，有学者发现:雌激素水平低下者，大多与肾阴、癸水不足有关［3］。这也与本病的病因病机相符合。复方益肾更宁合剂中，主要有熟地黄、山茱萸、白芍、麦冬等药物，着重滋补肾阴，以升高雌激素水平，调整紊乱的生殖内分泌系统。此外，现代药理研究发现:淫羊藿能增强下丘脑－垂体－性腺轴及肾上腺皮质轴、胸腺轴等内分泌系统的分泌功能;紫草具有抗促性腺激素和绒毛膜促性激素的作用，具有雌激素样活性［4］。据此推测，益肾更宁合剂提高E2水平的机制，亦与其含有“植物样雌激素”成分，具有类似雌激素作用有关，但此尚需进一步证实。

β-EP 是神经肽类物质，参与调节呼吸、心血管运动、行为反应等，并有镇痛，抑制肾上腺素、多巴胺、P 物质等释放作用，且与内分泌系统相互影响，对促性腺激素释放激素(GnRH)、FSH、LH 有抑制作用。中枢性β-EP 参与神经内分泌的调节，下丘脑弓状核β－内啡肽神经元内有雌激素受体存在，成为雌激素在下丘脑的靶细胞之一。吕肖锋等［5］研究发现:绝经妇女血中β-EP 及其抗体水平明显低于正常育龄妇女，β－内啡肽的下降与雌激素的下降同步。β-EP 抗体的下降可能表示免疫系统对神经内分泌的调节紊乱，从而出现围绝经期妇女神经精神症状。此外，有学者［6］提出，精神抑郁与神经介质的变化有关，而内啡肽可与多种神经介质(包括儿茶酚胺)发生交叉反应，干扰生物胺(5－羟色胺、γ－氨基酸、组织胺等)的代谢，从而影响情绪和行为，与围绝经期抑郁的发生有关。本实验中测定了围绝经期大鼠下丘脑的β-EP 含量，发现益肾更年合剂高剂量组β-EP 与模型对照组对比，差别有统计学意义(P＜0．05)，说明益肾更宁合剂高剂量组可使下丘脑的β-EP 水平回升。提示益肾更宁合剂是治疗β-EP 水平降低致围绝经期情绪和行为异常等症的有效药物

本研究结果为益肾更宁合剂治疗围绝经期综合征提供了实验依据，即益肾更宁合剂能够改善围绝经大鼠体液内分泌功能，这可能是其治疗围绝经期综合征作用机制之一。

［1］程化奇，熊舜华，殷新尤，等．大鼠更年期实验模型研究［J］．实验动物与比较医学，1993，13(4):1921．

［2］黄继汗，黄晓晖，陈志扬，等．药理实验动物间和动物与人体间的等效剂量换算［J］．中国临床药理学与治疗，2004，9(9):1069－1071．

［3］夏桂成．中医妇科理论与实践［M］．北京:人民卫生出版社，2003:166．

［4］高学敏．中药学［M］．北京:中国中医药出版社，2002:516－518．

［5］吕肖锋，叶雪清．绝经后妇女血β－内啡肽及其抗体改变［J］．中国实验临床免疫学杂志，1993，5(4):37－38．

［6］Hanker JP，Schncider HP．Path0genesis and diognosis of disorders in the climacteric［J］．Gynakoioge，1986，19(4):210．