口服理囊散治疗排卵延迟奶牛的B超影像学的研究

杨恒，高树，胡路锋，刘贤侠，谷新利，王建梅，陈爱江，李吉堂，赵宏，苏军，李明，徐奇，陆良

（1石河子大学动物科技学院，石河子832003；2新疆西部牧业股份有限公司，石河子832000；3新疆澳利亚牧业有限公司，奎屯834032；4新疆克拉玛依绿成农业开发有限责任公司，克拉玛依834000）

新疆是我国奶牛养殖大省，发展奶牛养殖有着得天独厚的优势，拥有丰富的乳业资源。尤其是近几年随着新疆奶牛业的快速发展，截至2011年全疆奶牛存栏已达250万头，仅在新疆兵团第七师和第八师地区规模化奶牛场和养殖小区就达100多个。但与此同时，影响奶牛业发展的问题也日渐突出。目前制约奶牛场发展的“瓶颈”因素之一是奶牛不孕症，尤其是奶牛排卵延迟是引起奶牛卵巢疾病性不孕的主要原因之一，其是导致排卵障碍的重要原因，据报道由排卵障碍引起的屡配不孕奶牛占整个不孕牛总数的30%～40%［1］，由于排卵延迟导致奶牛错失最佳受精时机、使产犊间隔延长，最终降低了奶牛场的经济效益。而中药具有副作用小，药物残留量少，对动物无毒副作用［2］的特点。目前已有报道研究证实中药对卵巢疾病有明显的效果［3－5］。

本研究中所用的中药理囊散治疗奶牛卵巢疾病前后血液中激素、微量元素以及白介素的变化已有报道［6－7］，本试验是在此基础上对排卵延迟奶牛用中药理囊散进行治疗，同时应用B超对卵巢和子宫进行连续跟踪检查，旨在为治疗排卵延迟奶牛的作用机理研究提供一定理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1试验动物

试验地点在新疆西部牧业股份有限公司牛场、澳利亚牧业有限公司牧场、克拉玛依绿成农业开发有限责任公司牛场，这些牛场饲养规范，无结核，布氏杆菌病。所选牛均为荷斯坦奶牛。

1.1.2试验仪器

50 s型Tringa Vet兽用便携式B超仪2台，分别配备3.5／5.0 MHz变频凸阵探头和5.0～7.5 MHz变频线阵探头，荷兰Piemed ICAL公司生产，配备Ni－MH 12 V充电电池各1个，2215型NiCd／Ni MH charger各1个，另外有配套50 s Tringa communication software version 1.0图像处理软件ODTCOMM和双向红外传输接口。

1.1.3试验药品

耦合剂：天津市南开区华科医疗器械厂生产，规格250 g；理囊散：女贞子、熟地黄、附子、三棱、藿香、香附子、甘草、青皮等12味中药组成。

1.2 方法

1.2.1饲养和给药方式

牛场饲养方式全部为散栏饲养，采用全混合日粮（total mixed ration，TMR）饲喂。每天早晨8：00－9：00给药，每天1次，每次400 g，连续口服5 d为1个疗程。

1.2.2排卵延迟的诊断

查阅繁殖记录：多次正常发情和人工授精（artificial insemination，AI）但未妊娠；临床症状［8］：外表发情症状和正常发情一样，但发情的持续期延长；直肠检查［8］：发情期检查卵巢和子宫无明显的疾患，卵巢上有卵泡存在，大小正常，人工授精后次日检查成熟卵泡未排卵；B超检查：人工授精后次日在同一卵巢部位成熟卵泡大小和位置基本未发生变化，声像图显示低回声液性暗区。

1.2.3理囊散治疗排卵延迟奶牛卵巢和子宫的B超形态学检查

使用B超对奶牛卵巢及子宫在用药前5 d及用药后至发情后1周不同时间段进行动态跟踪扫描，每隔3 d测量1次，观察适时图像，当显示出卵巢、卵泡、黄体、子宫清晰图像后，将画面冻结，通过B超仪内置电子标尺卵巢、卵泡、黄体、及子宫的纵横径等指标进行测量，B超存储的图像通过红外图像软件传输到电脑上。

1.2.4子宫和卵巢的B超形态学指标测量说明

黄体直径：B超探查切面图像显示黄体最大直径时测量；卵泡直径：B超探查切面图像显示卵泡最大直径时进行测量；子宫颈纵颈：B超探查子宫颈中间位置的纵向直径进行测量；子宫角纵颈：B超探查子宫角基部为准，测量最大子宫角纵向直径进行测量；卵巢长度：B超探查显示卵巢的最大纵切面来测量卵巢最大直径；卵巢宽度：B超探查显示卵巢的最大横切面来测量卵巢最大直径。

1.2.5治疗效果判定

患病奶牛经治疗1～2个情期内正常发情，人工授精后次日检查成熟卵泡破裂并排卵记为有效，否则记为无效。

1.2.6统计分析

数据采用Excel进行整理，应用SPSS18.0进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 排卵延迟的诊断

共诊断出排卵延迟奶牛37例，选择其中无子宫疾病（子宫内膜炎、子宫肿瘤等）和其他疾病（尤其是乳房炎和蹄病）的30头单侧排卵延迟奶牛口服中药理囊散，这些奶牛的体况评分（body condition score，BCS）平均为（3.03±0.57），胎次平均为（2.39±2.170），泌乳量平均为（26.24±3.16）kg／d。

2.2 排卵延迟奶牛典型B超声像图

图1为排卵延迟奶牛卵泡的B超声像图，声像图特征显示卵泡壁呈强回声，边界清晰、光滑，卵泡呈低回声液性暗区，本试验中排卵延迟奶牛卵泡的直径范围为15.5～22.7 mm。

图1 排卵延迟奶牛的B超声像图Fig.1 The B－Mode image of ovulation－delayed dairy cows

2.3 理囊散治疗排卵延迟奶牛的效果

口服中药理囊散后，经过B超跟踪检查，30头奶牛中有24头在下一情期发情并排卵，治疗有效率为80%，6头治疗无效，无效率为20%。

2.4 口服理囊散前后排卵延迟卵巢和子宫形态指标的变化

2.4.1口服理囊散前后排卵延迟卵巢形态指标变化

由表1可见，口服理囊散前后左卵巢长、左卵巢宽、右卵巢长、右卵巢宽变化无统计学意义（P＞0.05）。

表1 口服理囊散前后排卵延迟奶牛卵巢形态指标 mmTab.1 The morphological indices of ovarian of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powder

图2 口服理囊散前后排卵延迟奶牛卵巢形态指标变化曲线Fig.2 The curve of change of morphological indices of ovarian of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powder

由图2可见，左卵巢长和宽在口服前最大，停药后第1天后开始下降，之后出现小幅度的升高，第10天以后无明显变化。右卵巢长和宽在口服前最大，在停药后第1－4天开始下降，然后开始升高，停药后第7天又恢复到口服前的大小，之后又开始下降，但降幅不大。

2.4.2口服理囊散前后排卵延迟奶牛子宫形态指标变化

由表2可见，子宫角纵径在口服理囊散后第7、10、13天与口服前比较有统计学意义（P＜0.05），子宫颈纵径在口服理囊散后与口服前比较无统计学意义（P＞0.05）。

表2 口服理囊散前后排卵延迟奶牛子宫形态指标 mmTab.2 The morphological indices of uterine of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powderr

由图3可见，子宫角纵径在口服理囊散后开始降低，停药第7天降至最低，然后明显升高，在第19天升高至口服前大小，子宫颈纵径变化规律与子宫角相似。

图3 口服理囊散前后排卵延迟奶牛子宫形态指标变化折线图Fig.3 The line curves of morphological indices of uterine of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powder

2.5 口服理囊散前后典型B超声像图

图4为新疆澳利亚牧业有限公司第八牧场检查6002号奶牛 B超图像，2胎，产奶量23.8 kg／d，2012年4月8日产犊，6月28日下午发情，次日早上实施AI，7月20日下午第2次出现发情，应用直肠检查结合B超进行检查发现两侧卵巢以及子宫正常，并且左侧卵巢上有成熟卵泡存在，直径约18 mm，B超声像图显示卵泡壁呈强回声，边界清晰、光滑，卵泡呈无回声液性暗区（图4a）；次日早上实施人工授精，7月22日早上B超检查左侧卵巢发现发情卵泡直径大小未发生变化（图4b），说明未排卵，最终诊断为排卵延迟；当日开始口服理囊散，每天1次，每次400 g，连续口服5 d，7月26日灌药结束，8月2日检查有腔黄体直径31.8 mm（图4c）；之后液体腔逐渐缩小，8月11日检查为周期黄体，液体腔消失，声像图特征为超声特征显示不均匀较强回声，与卵巢基质界限明显，轮廓清晰，左侧有卵泡发育，黄体开始退化，此为发情前期（图4d）；8月13检查卵泡直径变大，直径为15.5 mm，声像图显示无回声液性暗区区域扩大（图4e），当天上午出现发情，晚上实施AI；8月15日早上检查左侧卵泡已排卵，声像图显示液性暗区逐渐消失，排卵后的卵巢呈中等密度的回声，边界清晰（图4f）；8月20日检查为有腔黄体，排卵后第7天后形成的黄体，说明已经排卵（图4g）；9月13日B超妊娠检查，声像图显示扩张子宫角内有规则强回声结构的胎儿，超声测量胎龄头臀长10.8 mm，显示胎龄31 d（图4h），与实际妊娠时间基本相符，治疗效果可判定为有效。

图4 排卵延迟奶牛口服理囊散前后B超声像图Fig.4 The B－Mode Image of ovulation－delayed dairy cows before and after taking medicine of dairy cows

3 讨论

3.1 排卵延迟奶牛的诊断

严格来说，排卵延迟属于卵巢机能不全或排卵障碍，指在发情时有发情的外表症状，但不出现排卵，在牛上时有发生。该病诊断主要通过直肠检查和B超，和其他卵巢疾病相比，排卵延迟奶牛外部发情症状正常，直肠检查卵巢和子宫无异常，但发情持续的时间比正常奶牛要长，通过查阅繁殖记录对发情配种正常但未受孕的奶牛在下次实施人工授精后10－12 h进行直肠检查和B超扫查，如卵泡仍然存在并且B超声像图上显示为低回声液性暗区，卵泡直径大小和位置也基本未变，连续跟踪检查最终卵泡会发生排卵，由此可诊断为排卵延迟。但需要与不排卵进行鉴别诊断［8］，二者都属于排卵障碍范畴，并且临床症状比较相似，但不排卵的奶牛是在卵泡发育到最大体积时也不发生排卵［9］。动物正常排卵是在下丘脑—垂体—卵巢轴的相互调节下进行的［10］，排卵前成熟卵泡分泌大量的雌激素通过正反馈诱发排卵前促黄体素（luteotropin，LH）峰的出现。所以排卵延迟往往与LH脉冲释放减少或不及时有关，也可能与雌激素合成受阻及某些排卵活性降低有关。

本文中患病奶牛产奶量平均为（26.24±3.16）kg／d，多数为高产奶牛，泌乳产生大量催乳素，造成脑垂体前叶抑制LH的分泌，同时降低了卵巢LH的正常反应，进而影响卵泡的正常排卵。另外饲养管理不当、应激和遗传也是导致奶牛排卵延迟的重要原因之一。

3.2 理囊散治疗排卵延迟奶牛的中兽医辨证理论

中医理论认为，卵子是生殖之精，藏于肾，其发育成熟与肾精充盛密切相关，而卵子的正常排出有赖于肾阳鼓动，肝之疏泄，冲任气血调畅。肾阳亏虚，排卵缺乏内在动力；肝气郁结，肝失疏泄，不能疏泄卵子排出；冲任气血瘀滞，阻碍卵子的排出。因此我国中医学认为排卵延迟是由于肾－天葵－冲任之间相互协调失常和肝、脾、肾功能失调所致［11］。中医辨证本病为肾虚、肝郁、气滞血瘀型，治疗以补肾、疏肝、活血为主［12］。根据中兽医辨证理论，理囊散是采用活血理气、益气补血、活血祛瘀、散淤软坚的治则。而组方熟地黄归经入心、肝、肾经；附子归经入心、脾、肾经；藿香归经入脾、胃、肺经；青皮归经入肝、胆经；香附入肝、胆、脾经；三棱归经入肝、脾经；女贞子归经入肝、肾经。方中以熟地黄温阳益肾填精为君药，当归益气养血为臣药，配以香附疏肝理气调经；女贞子滋肾补血，益髓填精，以三棱和青皮散瘀软坚、破气形血、消积化滞、疏肝破气。青皮生地黄中的主要成分VA和VC对调节动物的繁殖性能非常重要。

附子对垂体——肾上腺皮质系统有兴奋作用［13］。实验研究证明，方中菟丝子等能提高垂体对下丘脑黄体生成激素释放激素的反应，使之分泌更多的LH；又能提高LH受体功能，从而改善内在的神经内分泌调节机制，这是诱发排卵的基础。诸药合用共奏补血活血，活血祛瘀、充沛精血、滋阴补肾、调冲任二脉之功，以促进排卵。

3.3 口服理囊散对排卵延迟奶牛卵巢形态的影响

本实验中选取20头发情周期正常产后45－60 d未配种的奶牛应用B超测量卵巢的形态指标作为对照，结果左侧卵巢长平均为（33.91±5.69）mm，宽平均为（21.18±5.55）mm，右卵巢长平均为（31.33±6.11）mm，宽平均为（20.64±5.89）mm。排卵延迟奶牛口服中药前左侧卵巢长平均为（34.45±7.56）mm，宽平均为（25.35±13.93）mm，右侧卵巢长平均为（37.00±4.10）mm，宽平均为（24.37±5.19）mm，卵巢体积大于正常卵巢的大小，但无统计学意义（P＞0.05）。

而口服理囊散后两侧卵巢体积有所降低，逐渐恢复至正常大小，主要和理囊散中菟丝子作用于垂体使LH分泌增多，诱导卵泡排卵有关，但差异不显著（P＞0.05）。左侧卵巢长在停药后第7天降至最低，平均为（30.88±3.12）mm，左卵巢宽在停药后第13天降至最低，平均为（19.43±2.40）mm；右侧卵巢长在停药后第16天降至最低，平均为（32.10±5.75）mm，右侧卵巢宽在停药后第13天降至最低，平均为（18.88±4.39）mm。本研究中6002号奶牛在口服中药结束后发情卵泡破裂并排卵，此后有新生黄体形成，形状类似轮状结构，停药后的第7天黄体体积最大，这与报道［11］中的奶牛在排卵后48 h内形成直径15 mm的黄体，在排卵后7－8 d黄体体积最大，直径达到20～25 mm基本一致。之后黄体中间的液性空腔开始缩小，在停药后的16 d卵巢上的黄体逐渐被溶解开始出现发育卵泡，第19天出现直径为18.7 mm的发情卵泡，配种次日B超检查卵泡破裂并排卵，说明理囊散对此排卵延迟奶牛治疗有效。这主要由于理囊散中几味中药具有改善卵巢营养刺激卵巢血管，促进卵泡成熟并排卵的作用。

3.4 口服理囊散前后对排卵延迟奶牛子宫形态的影响

本实验中选取20头发情周期正常，产后45－60 d未配种的奶牛应用B超测量子宫的形态指标作为对照，正常对照组测得子宫角平均直径为（39.18±4.52）mm，子宫颈平均直径为（32.92±4.11）mm，排卵延迟奶牛灌药前子宫角平均直径为（42.75±8.93）mm，子宫颈平均直径为（32.55±9.24）mm，子宫角平均直径略高于对照组，主要由于排卵延迟奶牛较正常奶牛发情持续时间要长，子宫尚处于轻度水肿期；子宫颈平均直径与对照组比较接近。口服中药结束第7、10和13天子宫角直径较灌药前下降有统计学意义（P＜0.05）；子宫颈直径下降无统计学意义（P＞0.05）。从灌药结束第13天开始子宫角直径和子宫颈直径开始升高逐渐恢复至正常大小。这可能与理囊散中的几味中药对子宫平滑肌有兴奋作用有关。

4 结论

本试验通过对诊断出排卵延迟奶牛口服理囊散，应用B超对用药前后奶牛卵巢和子宫形态进行测量，结果表明，口服理囊散后卵巢长和宽、子宫角和子宫颈的直径逐渐降至正常范围，对诊断出排卵延迟的奶牛口服理囊散后出现发情并排卵，说明口服理囊散对治疗排卵延迟奶牛具有明显效果。

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