菟丝子提取物对亚急性衰老小鼠的抗衰老作用研究*

★ 刘海云 吴欢欢 何志坚3

(1.江西中医学院 南昌 330004；2.江西中医学院科技学院 南昌 330009；3.江西省肿瘤医院 南昌 330029)

菟丝子提取物对亚急性衰老小鼠的抗衰老作用研究*

★ 刘海云1**吴欢欢2何志坚3***

(1.江西中医学院 南昌 330004；2.江西中医学院科技学院 南昌 330009；3.江西省肿瘤医院 南昌 330029)

目的：研究菟丝子提取物对实验性衰老小鼠的抗衰老作用及机制。方法：以D-半乳糖致亚急性衰老小鼠为模型,同时给予灌胃不同浓度的菟丝子提取物,6周后,采用比色法测定肝脏和脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性来研究菟丝子延缓衰老的作用。结果：菟丝子提取物能显著增加肝脏和脑组织中SOD和GSH-Px活性,降低其MDA含量。结论：菟丝子提取物抗衰老作用可能通过提高抗氧化酶SOD、GSH-PX活力，降低脂质过氧化物MDA含量而实现。

菟丝子提取物；D-半乳糖；衰老小鼠；SOD；MDA；GSH-Px

缓衰老或抗衰老研究，是衰老生物学和老年医学研究领域的热点，衰老虽不可避免,但延缓衰老却是可能的。[1]目前衰老的病理机制存在多种学术观点,自由基学说是其中较重要的一种观点。菟丝子为旋花科一年生寄生性蔓草菟丝子或大菟丝子的成熟种子。具有补肝肾、益精明目、固精缩尿、止泻安胎的功效。[2]菟丝子作为一种常用的补阳药物，在生殖内分泌方面的研究较多，但在抗衰老方面的研究较少。本实验从衰老的氧化损伤入手，采用D-gal衰老模型小鼠，[3]观察菟丝子提取物对小鼠肝脏和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响，进一步研究菟丝子抗衰老的作用机制。

1 材料

1.1 动物 昆明种5周龄小鼠50只,体质量20-25g,雌雄各半，购自江西中医药大学实验动物中心。各组小鼠同室分笼饲养,颗粒饲料喂养,自由饮水，实验前适应性饲养1周。

1.2 试剂 D-半乳糖(批号：274512)购自上海国药集团化学试剂有限公司。超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(批号20120121)、丙二醛(MDA)测定试剂盒(批号20120217)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力测定试剂盒(批号20120214)均购于南京建成生物公司，菟丝子购自南昌新圣爱国药馆,其它常用试剂为国产分析纯。

1.3 仪器 723型分光光度计(上海第三分析仪器厂),恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)微量进样器(德国eppendorf公司),MG-2型Y迷宫(张家港市生物医学仪器厂),AdventurerTM电子天平(奥豪斯国际贸易有限公司)，TECAN酶标仪sunrise(奥地利TECAN公司)，TGL16G型台式高速离心机(上海医用分析仪器厂)。

2 方法

2.1 菟丝子提取物的制备[4]菟丝子药材500g，加4 000mL水浸泡2h，至微胀，文火煎2次，每次煎煮0.5h,过滤。合并2次提取液，浓缩至生药浓度为0.4g/mL，置4℃冰箱贮藏，备用。

2.2 动物分组与给药 小鼠随机分为5组:正常对照组、衰老模型组、菟丝子提取物100、200、300mg.kg-1剂量组每组10只。除正常对照组外,其他各组按文献[5-6]方法造模。将D-gal溶于注射用水,体积分数10%,注射剂量为10mL/kg,颈背部皮下注射,每日1次,连续6周,正常对照组注射同体积的0.9%生理盐水。在造模的同时,按低、中、高剂量菟丝子组,每日1次,灌胃给药,对照组和模型组给同体积的0.9%生理盐水，连续6周。

2.3 肝脏和脑组织的制备 末次给药后30min眼眶取血,3 000r/min离心10min取血清。取血后迅速在冰上取肝脏和脑组织,用冰冷的生理盐水(4℃)冲洗2次,滤纸拭干后,立即称重,剪碎组织块后,置于匀浆瓶中分别用9倍冰冷生理盐水匀浆10min(匀浆器的末端置于冰水中)，分别制成10%肝脏组织和10%脑组织匀浆,然后以3 000r·min-1离心15min,取上清液待用，-70℃保存备用。

2.4 肝脏和脑组织中MDA水平、SOD活性和GSH-PX测定 按测试盒说明书方法测定SOD活性、MDA和GSH-PX含量,重复3次,取平均值。

3 结果

3.1 菟丝子对衰老小鼠肝脏SOD、MDA和GSH-Px活性的影响 与正常对照组比较,模型组小鼠肝脏中MDA含量显著提高,差异有统计学意义(P<0.01),SOD和GSH-Px活性明显降低(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，菟丝子中、高剂量组MDA含量显著降低(P<0.01),SOD和GSH-Px活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01),并呈剂量依赖性。见表1。

表1 菟丝子对衰老小鼠肝脏组织中SOD、MDA和GSH-Px的影响

3.2 菟丝子对衰老小鼠脑组织中SOD、MDA和GSH-Px活性的影响 与正常对照组比较,模型组小鼠脑组织中MDA含量显著提高,差异有统计学意义(P<0.05),SOD和GSH-Px活性明显降低(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，菟丝子中、高剂量组MDA含量显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01),并呈剂量依赖性。见表2。

表2 菟丝子对衰老小鼠脑组织中SOD、MDA和GSH-Px的影响

4 讨论

衰老是生物体随着时间的推移所带来的一种自发的必然过程，它是复杂的自然现象，表现为结构和机能衰退，适应性和抵抗力下降。[7]众所周知,由于衰老原因纷繁复杂,但众多的学说之中,最为中外学者所认同的是自由基学说。随着年龄的增长,自由基产生增多,而清除自由基的相关酶活性下降以及机体免疫功能下降等多种因素均是机体发生衰老的重要机理。D-半乳糖致衰老小鼠模型，D-半乳糖在半乳糖氧化酶作用下，参与氧化反应，生成糖和过氧化氢反应过程中产生超氧阴离子自由基，其过量损伤可产生衰老反应。[8]实验表明菟丝子提取物具有抗氧化的作用,这可能与其直接或间接清除自由基对机体的损害作用,消除D-半乳糖引起的自由基产生增多,避免了因抗氧化性物质消耗而导致组织损伤有关,从而达到延缓衰老的作用。

本研究采用D-半乳糖小鼠颈背部皮下注射6周,造成亚急性衰老小鼠模型,其一般状态欠佳,Y迷宫实验结果表明模型组小鼠学习记忆能力显著减退,而菟丝子各剂量组小鼠毛色光泽、精神状态良好,学习记忆能力明显改善。

SOD是机体防御体系的一种重要抗氧化酶,作为体内清除自由基的关键酶,通过清除氧自由基从而保护细胞免受氧自由基损伤,故检测SOD活性高低可间接反映机体清除自由基、保护细胞免受自由基损伤的能力。[9]MDA是机体在氧自由基作用下生成的脂质过氧化物,可反映机体内脂质过氧化的水平,MDA生成的多少可间接反映组织细胞损伤的程度。[10]依据自由基学说,若能通过适量补充外源性抗氧化剂,增强机体自由基防御系统机能,即可达到抗衰老的目的。本实验发现菟丝子提取物可不同程度地提高衰老小鼠肝脏和脑组织中SOD活性，抑制MDA含量的升高，表明两者可提高体内抗氧化酶活性，抑制脂质过氧化发生，增强体内自身抗氧化能力，对延缓衰老能起到一定的积极作用。

GSH-Px是广泛存在于机体内的一种重要的催化过氧化分解的酶,它特异性地催化GSH对过氧化氢的还原反应,抑制烟酸胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成OH-,削弱对脂质过氧化作用的损伤,从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。[11]本实验结果表明菟丝子提取物可显著提高D-半乳糖致衰老小鼠肝脏和脑组织GSH-Px活性,提高体内抗氧化酶活性,减轻自由基对生物大分子的伤害。

总之，本实验应用菟丝子提取物干预D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠，能明显改善衰老的行为学变化,提高衰老小鼠的学习记忆能力,显著提高SOD和GSH-Px活力，降低MDA含量，延缓衰老的进程。提示菟丝子提取物可通过提高抗氧化酶的活性，抑制自由基损伤，防止脂质过氧化的作用来延缓衰老，对进一步开发菟丝子的临床应用前景提供了实验依据。

[1]刘焕兰,武夏林,曲卫玲，等.琼玉口服液对衰老小鼠脑组织SOD活性及血清中SOD和MDA含量的影响[J].吉林中医药，2013,33(3):278-280.

[2]李建平，王静，张跃文，等.菟丝子的研究进展[J].中国医药导报,2009,6(23):5-6.

[3]郭红艳,张鹏霞,欧 芹，等.山茱萸对衰老大鼠蛋白质非酶糖化及DNA损伤的影响[J].中国临床康复,2010,14(19):136-137.

[4]兰鸿，杜士明.菟丝子提取物对自然衰老小鼠的抗衰老作用研究[J].中国药房，2010，39(21):3 667-3 669.

[5]戴士勇.人类的衰老与抗衰老[J].中国医药,2006,1(12):764-765.

[6]徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2002：826．

[7]Blagosklonny M V，Hall M N．Growth and aging：acommon molecular mechanism[J].Aging,2009，1(4):357．

[8]金英子，张红英孙，孙晓宇.马齿苋不同提取物对D一半乳糖致衰老小鼠空间学习能力的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011,17(12):178-181.

[9]蒋万志,张洪泉.枸杞多肽对D-半乳糖诱导小鼠的抗衰老作用及其可能机制[J].国际药学研究杂志,2010,37(1):47-49.

[10]王岚，梁日欣，杨滨，等.黄芩及红花水提物对快速老化模型小鼠的抗衰老作用研究[J].中国实验方剂学杂志，2010,16(13):159-161.

[11]王春梅，李香艳，崔新颖.酸樱桃汁对衰老模型小鼠的抗衰老作用及其机制[J].中国老年学杂志,2011,31(2):455-457.

征稿启事

《江西中医药》所设的重点栏目有《明医心鉴》、《滕王阁医话》等。《明医心鉴》以介绍名老中医经验和中医临证心得为主，重点刊载中医关于疑难病的诊疗经验，要求观点、方法新，经验独到。《滕王阁医话》主要反映中医教学、科研、临床的一得之见，要求以小见大，有感而文，语言生动流畅，可读性强，富于知识性、趣味性。

ResearchontheAnti-agingActionoftheExtractsofCuscutaChinensisinSubacuteAgingMice*

LIUHai-yun1**,WUHuan-huan2,HEZhi-jian3***

1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004;2.ScienceandTechnologycollegeofJiangxiUniversityofTCM,Nanchang330009;3.JiangxiTumorHospital,Nanchang330029

Objective: To observe the Anti-aging activity of the extracts of C. chinensis in the experimental aging mice. Method：The subacute aging mice model by D-galactose(D-gal) were given the extracts of C.chinensis via i.g. gtt. After 6 weeks, the colorimetric method was used to determine the cellular content of malondialdehyde(MDA)，the enzyme activity of superoxide dismutase(SOD) and glutathione peroxidase(GSH-PX). Results：Aqueous extract of C.chinensis could improve the activities of SOD,GSH-Px to differentdegree and decrease the contents of MDA. Conclusiou：The anti-aging activity of the extracts of C. chinensis is achieved by improving the activity of SOD and GSH-PX，and lowering the contents of MDA.

Extracts of Cuscuta Chinensis；D-Gal；Aging Model Mice； SOD；MDA；GSH-Px

江西省教育厅青年科学基金项目(项目编号：GJJ12541)；江西省卫生厅中医药科研基金项目(项目编号：2011A137)；江西中医学院校级课题项目(项目编号：2012ZR046)。

**作者简介：刘海云(1979-)，女，山东菏泽人，硕士，讲师，从事中医药抗衰老的研究工作,Tel：0791-87118930，E-mail：liuhaiyun98175@163.com。

***通讯作者：何志坚，硕士，副主任，从事肿瘤的研究工作,Tel：0791-88313571，E-mail：jxncga@126.com。

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2013-07-18)