HPlC法测定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及有关物质

★ 付长华 杨琴香 蔡华吉

(江西施美制药有限公司 东乡 331800)

HPlC法测定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及有关物质

★ 付长华 杨琴香 蔡华吉

(江西施美制药有限公司 东乡 331800)

目的:建立反相高效液相色谱法测定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及有关物质。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶填充柱(Apollo C18，5μm，250mm×4.6mm)，甲醇-0.03mol/L磷酸二氢钾溶液(75∶25)为流动相，检测波长为238nm，流速为1.0mL/min，柱温为室温。结果:主成分与其余杂质峰完全分离，苯磺酸左旋氨氯地平溶液在2.448μg/mL-122.4μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系，相关系数为0.9999，平均回收率为99.1%，RSD为0.8%，最小检出量为1.67ng，方法精密度良好(RSD=0.4%)。结论:该方法专属性强，精密度、准确度符合要求，方法可靠，可用于苯磺酸左旋氨氯地平片的含量测定及有关物质检查。

苯磺酸左旋氨氯地平片；反相高效液相色谱法；含量；有关物质

苯磺酸左旋氨氯地平(levamLodipine)是一种钙离子拮抗剂(CCB)类的降压药。苯磺酸左旋氨氯地平是在苯磺酸氨氯地平的消旋体分子中进行手性拆分，将容易引起水肿等副反应而没有降压作用的右旋体拆除，保留有降压作用的左旋体。氨氯地平是由左旋氨氯地平和右旋氨氯地平以1∶1的比例构成的外消旋混合物，左旋体钙拮抗活性是右旋体的近1000倍,是消旋体的2倍,理论上表明左旋氨氯地平剂量是消旋体的1/2时,即可有相同的降压疗效,同时副作用减少。[1]它是我国拥有独立知识产权的抗高血压药物。本文对其有关物质检查及含量测定方法进行了研究，方法准确、灵敏、可靠，为保证本品的质量提供了质控方法。

1 仪器与试药

日本岛津lC-10AT高效液相色谱仪，包括lC-10ATVP泵、SPD-10AVP检测器、Class-VP色谱工作站。甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯，试验用水为自制蒸馏水。

试验用的苯磺酸左旋氨氯地平对照品由中国食品药品检定研究院提供。对照品含量：95.7%(以C20H25N2O5C1·C6H6O3S计)；样品提供单位：江西施美制药有限公司，批号：20130309、20130312、20130320，规格：2.5mg(以左旋氨氯地平计)。空白辅料均符合药用标准。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Apollo C18，5μm，250mm×4.6mm；流动相：甲醇-0.03mol/l的磷酸二氢钾溶液(75∶25)；检测波长为238nm；流速：1.0mL/min；进样量：20μL；理论板数按左旋氨氯地平计算应不低于2000；左旋氨氯地平峰与相邻杂质峰的分离度应大于1.5。

2.2 溶液的制备

对照品溶液的制备 取苯磺酸左旋氨氯地平对照品17mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(相当于左旋氨氯地平12.5mg)，置100mL量瓶中，加流动相适量超声使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 标准曲线的测定

避光操作。精密称取苯磺酸左旋氨氯地平对照品约17mg，置100mL量瓶中，加流动相适量超声溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取该储备液5mL,分别置250、200、100、50、25、10、5mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20μL注入色谱仪中，记录色谱图，以浓度(C)为横坐标，所测峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：A=6177157.9C+2949，r=0.9999，表明在2.448μg/mL-122.4μg/mL的浓度范围内线性关系良好。

2.4 最低检出限测定

精密称取苯磺酸左旋氨氯地平对照品适量，加流动相溶解并按逐步稀释法测定得当信噪比约为3∶1时，进样量约为1.67ng。

2.5 空白辅料干扰实验

取本品空白辅料1片量细粉，置100mL量瓶中，加入含量测定项下的流动超声溶解，过滤，精密吸取20μL续滤液注入液相色谱仪中，结果空白辅料无干扰。

2.6 苯磺酸的检测

取苯磺酸适量，加流动相溶解，摇匀，过滤，取续滤液20μL注入色谱仪中，图谱中显示苯磺酸的峰。

2.7 专属性考察试验

酸破坏：取本品1片量细粉，置100mL量瓶中，加10mL水溶解，加10mL 0.1mol/L盐酸溶液水浴1h，加0.1mol/L氢氧化钠溶液10mL，加流动相稀释至刻度，过滤，精密吸取20μL续滤液注入色谱仪中，结果见附图B。

碱破坏：取本品1片量细粉，置100mL量瓶中，加10mL水溶解，加10mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液水浴1h，加0.1mol/L盐酸溶液10mL，加流动相稀释至刻度，过滤，精密吸取20μL续滤液注入色谱仪中，结果见附图C。

氧化破坏：取本品1片量细粉，置100mL量瓶中，加10mL水溶解，滴加过氧化氢溶液10滴，振摇，加流动相至刻度，摇匀，过滤，精密吸取10μL续滤液注入色谱仪中，结果见附图D。

高温破坏：取本品1片量细粉，置100mL量瓶中，置120℃烘箱放置120min，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密吸取20μL续滤液注入色谱仪中，结果见附图E。

光照破坏：取本品1片量细粉经4500lX光照48h，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，精密吸取20μL续滤液注入色谱仪中，结果见图1。

A

B

C

D

F

以上试验结果可见：本品在流动相中的溶液在强酸、强碱、过氧化氢溶液、高温及光照环境中均有不同程度的分解，各主要降解产物与主药能有效分离，表明本方法专属性良好。

2.8 溶液稳定性试验

取“2.2”项下的供试品溶液置室温下避光放置，于0、2、4、8、10、24h取样测定峰面积，测得RSD为0.4%，放置过程中峰面积无明显变化，溶液在24h内避光稳定。

2.9 样品回收率测定

按80%、100%、120%三个浓度梯度，分别精密称取苯磺酸左旋氨氯地平对照品，加入处方量的空白辅料中，置适宜的容量瓶中，然后按2.12项下的方法测定含量，再计算回收率。测得平均回收率为99.6%，RSD为0.28%，表明本方法回收率好。

2.10 精密度和方法重复性试验

取“2.2”项下的对照品溶液，连续进样6次，量取峰面积，计算RSD为0.4%，表明进样精密度良好；分别精密称取同一批(20130309)样品6份，照含量测定项下的方法，测得平均含量为100.36%，RSD为0.25%，表明本方法有良好的重复性。

2.11 有关物质检查

避光操作。取本品细粉适量(约相当于左旋氨氯地平12.5mg)，置100mL量瓶中，加流动相适量使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液，精密量取1mL供试品溶液置100mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照溶液。取对照溶液20μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的20%，再取供试溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图若显杂质峰(苯磺酸峰和辅料峰除外)，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液的主峰面积(1.0%)。本品三批样品(20130309、20130312、20130320)的总杂质量分别为0.22%，0.19%和0.20%。

2.12 含量测定

各批样品按“2.2”项下方法制备成供试品溶液、对照品溶液，精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，三批样品(20130309、20130312、20130320)的含量测定结果分别为100.40%、99.40%和99.78%。

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

参考《中华人民共和国药典》[3]中同类品种的色谱条件，选用C18柱。实验曾用Apollo和AgilentTC不同牌号的C18柱对苯磺酸左旋氨氯地平及其有关物质进行分离测定，结果一致，表明本方法耐用性较好。

左旋氨氯地平为碱性化合物，本品为其苯磺酸盐，为保持色谱峰具有较好的峰形，需在流动相中加入适当的缓冲液(磷酸二氢钾溶液)。参照国家药品标准[2]项下的色谱条件，确定本文中使用的流动相，各峰均可达到基线分离。

3.3 检测波长的选择

实验中取苯磺酸左旋氨氯地平对照品适量，加流动相溶解并稀释成每1mL含17ug的溶液，在200-300nm波长范围内扫描，结果在238nm波长处有最大吸收，确定定238nm为检测波长。

3.4 有关物质检查

苯磺酸左旋氨氯地平经酸、碱、氧化、高温及光照破坏后,产生的杂质峰均在主峰保留时间的二倍内,并能与主峰基线分离,说明本色谱系统能有效控制其降解产物,并将记录时间定为主峰保留时间的二倍。

3.5 含量测定

高效液相色谱法测定苯磺酸左旋氨氯地平片中苯磺酸左旋氨氯地平的含量，经方法学研究结果表明，该法具有较好的准确性和重复性，可用于苯磺酸左旋氨氯地平片的质量控制。

[1]胡大一,赵秀丽,孙宁.苯磺酸左旋氨氯地平与苯磺酸氨氯地平治疗原发性轻中度高血压的随机、双盲平行研究[J].中国医刊，2002(5):46-47.

[2]国家食品药品监督管理局国家药品标准[S]，标准号：WS1-(X-020)-2002Z.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

DeterminationoflevamLodipineBesylateTabletsandRelatedSubstancesbyHPlC

FUChang-hua,YANGQin-xiang,CAIHua-ji

JiangxiShimeiPharmaceuticalCo.,ltd.JiangxiDongxiang331800

Objective:To Determinate levamlodipine besylate tablets and related substances by rp-HPlC. Methods:The eighteen alkyl silane bonded silica gel packed column(Apollo C18，250mm×4.6mm，5μm)，Methanol-0.03mol/L potassium dihydrogen phosphate (75∶25) as the mobile phase, The detection wavelength was 238nm, the flow rate was 1.0mL/min, column temperature was at room temperature. ResμLts: Principal component completely separated from other impurity peak, levamLodipine besylate solution at 2.448μg/mL to 122.4μg/mL concentration range showed a good linear relationship, the correlation coefficient was 0.9999, the average recovery was 99.1%,RSDwas 0.8%, The minimum detectable amount is 1.67ng, the precision of the method is good (RSD=0.4%), Conclusion The method has high specificity, precision, accuracy, reliable method, can be used for the determination of levamLodipine besylate tablets of the content and the related substances.

Levamlodipine Besylate Tablets; RP-HPlC; Content; Related Substances

R284.1

A

2013-07-24)