当归补血汤治疗癌性贫血的实验研究

★ 曹娟 黄宇玫

(1.江西省儿童医院 南昌 330006；2.南昌大学科学技术学院 南昌 330029)

当归补血汤治疗癌性贫血的实验研究

★ 曹娟1*黄宇玫2

(1.江西省儿童医院 南昌 330006；2.南昌大学科学技术学院 南昌 330029)

目的：研究不同浓度当归补血汤对荷瘤小鼠补血作用。方法：建立生长良好的H22小鼠的腹水模型,将荷瘤小鼠随机分为2组(模型组、当归补血汤组)，另外再选12只健康小鼠为空白对照组(正常组)。给予正常组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水,当归补血汤组给予当归补血汤灌胃(剂量为12g·kg·d-1)。分组后连续给药10d，于末次给药24h眼球采血后处死小鼠收集骨髓。结果：实验数据表明，与正常组相比，模型组红细胞数及血红蛋白含量明显减少，提示可能存在癌性贫血现象。当归补血汤组相比模型组其红细胞数、血红蛋白有所上升，提示当归补血汤可能对抗癌性贫血。将各组骨髓细胞体外培养，当归补血汤组能减缓癌性贫血小鼠骨髓红系祖细胞的凋亡速度。结论：当归补血汤对荷瘤小鼠有一定补血作用。

当归补血汤；荷瘤H22；抗肿瘤；贫血

贫血是各种恶性肿瘤常见的并发症，其发生率及严重程度与肿瘤类型、病程、治疗方案、药物剂量，以及患者放疗和治疗期间是否发生感染等因素有关，临床上癌性贫血发生率高达50%以上。贫血可影响肿瘤治疗，降低患者的生存质量(QQL)，甚至危及生命。目前，恶性肿瘤及其治疗相关性贫血(简称癌性贫血)已开始受到临床重视。[1]

当归补血汤出自金代李东垣所著《内外伤辨惑论》，是补气生血的代表方，该方“重用黄芪大补脾肺之气，以裕生血之源；更用当归益血和营，以使阳生阴长，气旺血生”。[2-4]本实验建立了H22腹水瘤小鼠癌性贫血模型，探讨当归补血汤是否能修复骨髓有核细胞造血功能，治疗癌性贫血，以期为当归补血汤的临床应用提供更多实验依据。

1 材料

1.1 动物与瘤株

小白鼠，昆明种，体重18-22g，清洁级。均由南昌大学实验动物中心提供，合格证号SCXK-2005-0004。动物在实验前适应性驯养1周。饲料和垫料由南昌大学实验动物中心提供。实验期间自由采食饮水。腹水型H22瘤株由国家固体制剂重点实验室提供。

1.2 试验药物

中药材购自南昌开心人大药房:黄芪，500g/袋，批号:20100507，产地:甘肃岷县;当归，500g/袋，批:20090907，产地:甘肃岷县。取黄芪125g，当归25g，加蒸馏水浸泡1h，然后加1 000mL和500mL蒸馏水煮沸2次，每次1h，合并水液，浓缩至水煎液浓度1.2g生药/mL,高温消毒后置于4℃冰箱保存备用。

1.3 仪器与试剂

血球分析仪Sysmex-2000iV(Sysmex Corporation，日本);血球计数板(上海市求精生化试剂仪器有限公司)，酶标仪，倒置显微镜，二氧化碳培养箱，超净工作台，DMSO(Am resco公司产品),四氮甲唑蓝(MTT, Am resco公司产品),RPM I-1640完全培养基(Am resco公司产品)。

2 方法

2.1 动物模型的建立

无菌条件下抽取6-7d生长良好的H22小鼠的腹水,按1∶3比例用生理盐水稀释,反复冲打,充分混匀,在显微镜下计数,用生理盐水调整细胞浓度为1×107/mL,取0.2mL接种于每只小鼠腹腔，共24只。

2.2 分组及给药

肿瘤接种24h后随机分为两组,荷瘤H22小鼠12只(模型组),当归补血汤组12只(中药组);另外未造模的12只健康小鼠为空白对照组(空白组)。给予空白组和模型组小鼠每日灌胃生理℃盐水0.1mL/10g,中药组给予当归补血汤灌胃0.1mL/10g(剂量为12g·kg·d-1)。分组后第2d开始给药，1次/d，连续10d，于末次给药24h眼球采血后处死小鼠收集骨髓。

2.3 外周血RBC计数及血红蛋白HB含量测定[5]

于第1、5、10d将各组小鼠眼球采血0.5mL，血样置抗凝管，检测外周血象。(1)红细胞计数：取血20μL，加入3.98mL0.85%Nacl，混匀，用血细胞计数板于显微镜下计数红细胞数量。(2)血红蛋白含量的测定：取新鲜全血20μL，加入文齐氏工作液5mL，混匀，静置5min后比色。以蒸馏水校正“0”点，读取540mm吸光度(A)值，计算标本中血红蛋白的含量。

血红蛋白(g/L)=吸光度×367.7

2.4 当归补血汤对小鼠骨髓有核细胞生长的影响

颈椎脱臼法处死小鼠，每组取5只小鼠取双侧股骨，6号针头以1mL生理盐水液冲出骨髓细胞，4号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液。收集细胞液至离心管中，1 000r/min，离心5min。弃上清。加入红细胞裂解液(约3mL)，混匀。室温静置5min，再1 000r/min，离心5min，弃上清，PBS洗涤一遍，9mL 1640完全培养基重悬，每孔1mL，接种于12孔板中。铺3块板，分别为0、24、48h。每块板均培养时间结束后每孔加入100μL MTT，继续孵育4h。4h后，2 000r/min，离心10min。弃上清，每孔加入750μL DMSO，混匀后，转移至96孔板中，490nm测其OD值。(12孔板，每孔设3个复孔，每个复孔200μL)。

2.5 统计学处理

3 结果

3.1 对肝癌H22腹水型小鼠生活状况的影响

从肿瘤接种第4-5d开始，小鼠腹腔内腹水开始形成，腹部开始膨隆增大(如图1)。随着肿瘤的生长，小鼠自主活动较少，进食量和进水量减少，反应迟钝，毛色暗淡无光泽。模型组小鼠的肿瘤腹水生长最快，以上反应最明显，其它组小鼠腹水的生长不及模型组。

图1 左图小鼠毛色暗淡，右图小鼠腹部开始形成腹水

3.2 RBC计数及血红蛋白HB

3.2.1 当归补血汤对腹水型小鼠红细胞数的影响

实验数据表明，与正常组相比，模型组红细胞数明显减少，提示可能存在癌性贫血现象。当归补血汤组相比模型组其红细胞数有所上升。结果见表1。

表1 当归补血汤对腹水型小鼠红细胞数的影响±S)

3.2.2 当归补血汤对腹水型小鼠血红蛋白含量的影响

实验数据表明，与正常组相比，模型组血红蛋白含量明显减少，当归补血汤组相比模型组其血红蛋白含量逐渐上升，提示当归补血汤可能对抗癌性贫血。结果见表2。

表2 当归补血汤对腹水型小鼠血红蛋白含量的影响±S)

3.3 当归补血汤对小鼠骨髓有核细胞生长的影响

从表3可知，荷瘤小鼠骨髓生长受到抑制，小鼠死亡时模型组和当归补血汤组骨髓有核细胞明显少于正常组。经过24h、48h培养，骨髓有核细胞逐渐调亡，从图2斜率来看，模型组骨髓有核细胞体外培养调亡最快，当归补血汤组次之，说明对骨髓细胞有保护作用。

表3 当归补血汤对腹水型小鼠骨髓有核细胞生长的影响

4 讨论

骨髓是肿瘤转移好发部位，肿瘤细胞浸润可直接抑制骨髓造血干细胞增殖，消耗造血物质；释放癌性代谢产物损伤骨髓。骨髓涂片可见增生低下及与原发病相应的瘤细胞。肿瘤细胞浸润还可导致骨髓纤维化。荷瘤小鼠特别是腹水瘤小鼠贫血更加严重，可能是由于腹水瘤小鼠产生大量腹水造成体内蛋白大量流失，血红蛋白量减少造成，所以本实验用腹水瘤小鼠造成贫血模型再用药物进行治疗更能说明问题。[6-8]

动物实验由于腹水瘤小鼠生存期有限只能观察给药一段时间后小鼠骨髓造血功能的状况。我们在小鼠存活且给药10d治疗后处死小鼠，通过体外培养观察骨髓造血干细胞的状态及调亡情况，发现腹水模型组小鼠造血干细胞存活率偏低，调亡快，我们用腹水瘤小鼠血清刺激正常骨髓造血细胞发现存在炎性因子会加快正常骨髓造血细胞调亡，说明癌症造成小鼠出现贫血主要是由于癌性因子对骨髓造血细胞抑制造成的。当归补血汤能有效修复骨髓造血干细胞延缓其调亡速度。

[1]韩金凤，王芳．癌性贫血的研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2009，11(10)：198-199．

[2]张三印，冯蓓，杨苗，等.当归补血汤抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖及其分子机制[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(2):151.

[3]苗明三，方晓艳.当归补血汤粗多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床,2003,19(6):8.

[4]严苏纯，祝彼得，韩英光，等.当归补血汤不同制剂对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究[J].2008，6(25):229-231.

[5]解景田，刘燕强，崔庚演，等．生理学实验[M].北京：高等教育出版社，2011，12(4)：62-65.

[6]郝习，赵明耀，杨红艳，等．枸杞多糖对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响[J].郑州大学学报(医学版)，2011，46(2)：242-245．

[7]徐朝久，张灿珍，胡智兴，等.贫血对肿瘤化疗疗效影响的实验研究[J].2003,8(3):200-203.

[8]蔡琨，冯泳，何前松．小半夏加茯苓汤对H22荷瘤小鼠的抑瘤及免疫调节作用[J].实用医学杂志，2011，27(7)：1 290-1 292.

征稿启事

《江西中医药》所设的重点栏目有《明医心鉴》、《滕王阁医话》等。《明医心鉴》以介绍名老中医经验和中医临证心得为主，重点刊载中医关于疑难病的诊疗经验，要求观点、方法新，经验独到。《滕王阁医话》主要反映中医教学、科研、临床的一得之见，要求以小见大，有感而文，语言生动流畅，可读性强，富于知识性、趣味性。

ResearchofAngelicaBloodTonicSoupinTreatmentofCarcinomaofAnemia

CAOJuan1*,HUANYu-mei2

1.Children'shospitalofjiangxiprovince,Nanchang330006;2.Collegeofnanchanguniversityofscienceandtechnology,Nanchang330029

Clinical studies have shown that cancer more than 50% incidence of anemia, anemia can affect the tumor treatment, reduce the patient's quality of life, even life threatening. Objective: to study the different concentration of angelica blood tonic soup on a tumor-burdened mice blood tonic effect. Methods: H22mice ascites of good growth model is set up, a tumor-burdened mice were randomly divided into two groups (model group, angelica blood tonic soup), in addition to choose 12 healthy mice as blank control group (normal group). Give the normal group and model group mice lavage daily physiological saline, angelica group was given angelica blood blood tonic soup decoction lavage (dose of 12 g- kg-d-1). Grouping after dosing 10 days in a row, on time delivery at the end of the 24 h after eyeball blood executed collect in mice bone marrow. Results: the experimental data show that, compared with normal group, model group significantly reduced number of red blood cell and hemoglobin content and suggest possible cancer anemia phenomenon. Angelica blood tonic soup group compared with model group the number of red blood cells, hemoglobin increased, and suggest possible angelica blood tonic soup for cancer anemia. Groups of bone marrow cells in vitro, angelica blood tonic soup group can slow cancer anemia mice bone marrow apoptosis velocity of red blood cell precursors. Conclusion: angelica blood tonic soup for a tumor-burdened mice has a role in blood.

Angelica Blood Tonic Soup; A Tumor-burdened H22. Anti-tumor; Anemia

曹娟，女，硕士，主管药师，从事临床药学相关工作，Tel:13576956541，E-mail：caojuan0166@126.com。

R556.9 R730.6 R242

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2013-10-10)