高效液相色谱法同时测定小儿酚氨咖敏颗粒中3种组分的含量*

陈 娟，蒲恒然

(贵州省毕节市食品药品检验所，毕节 551700)

小儿酚氨咖敏颗粒常用于儿童伤风感冒引起的发热、头疼、关节痛等症状，为《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》第十二册收载品种，标准中对其中主要成分氨基比林、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量及限度有所规定，均采用高效液相色谱法进行含量测定。而另一主要成分对乙酰氨基酚的含量、限度及其测定方法均未予规定，笔者认为该标准存在一定缺陷。本文以高效液相色谱法同时测定小儿酚氨咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的含量，方法简便易行，结果可靠，重现性好，精密度高，提高了制剂质量标准，能更好地控制产品质量。

1 仪器与试药

岛津LC－10ATvp高效液相色谱仪，SPD－10Avp紫外检测器(日本岛津公司)，威玛龙色谱工作站(南宁威玛龙色谱科技有限公司)。Waters1525高效液相色谱仪，Waters 484紫外检测器，Breeze色谱处理软件(美国Waters公司)。UV－2100型可见－紫外分光光度仪(日本岛津公司)。AG135电子天平(瑞士梅特勒);AY120电子天平(日本岛津公司)。对乙酰氨基酚、咖啡因、氨基比林对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为 100018－200107、171215－200406、100503－200301)，小儿酚氨咖敏颗粒为市售品(为不同的三家药厂生产，批号分别为20110109、20110121、20110201)。甲醇为色谱纯;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Diamonsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:1%醋酸溶液(用二乙胺调节pH值为3.7)－ 甲醇(60∶40);检测波长 272 nm;流速 1.0 ml/min;进样量20 μl，按对乙酰氨基酚峰计理论塔板数不小于4000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取对乙酰氨基酚约40 mg(41.61 mg)(括号内为实际称量，下同)、咖啡因对照品约10 mg(9.28 mg)，氨基比林对照品约32 mg(35.82 mg)，置同一100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，精密量取上述对照品储备液5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10袋的内容物，研细，精密称取适量(约相当于对乙酰氨基酚10 mg)，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25 ml，充分振摇使溶解，滤过，精密量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 依处方，分别称取白糖30 g、糊精 18 g、淀粉 0.8 g，研匀，精密称取 0.8023 g，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相25 ml，充分振摇使溶解，滤过，精密量取续滤液5 ml，置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为阴性对照溶液。

2.3 系统适应性试验 取对照品溶液20 μl，重复进样5次，按峰面积计算，对乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的RSD分别为0.26%、0.25%和0.17%。各峰分离度均大于5，理论塔板数(按对乙酰氨基酚峰计算)平均为5256，符合《中国药典》要求［1］。结果见图1。更换仪器(Waters1525)同法测定，对乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的 RSD分别为 0.25%、0.22%和0.19%。各峰分离度均大于5，理论塔板数(按对乙酰氨基酚)平均为5302。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

另外取阴性对照溶液，按样品测定方法进行测定，结果表明其他成分不干扰对乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的测定。

2.4 线性关系 精密量取上述对照品储备液6.0、8.0、10.0、12.0 和 14.0 m l，分别置 100 m l量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得系列对照品溶液。分别吸取20 μl注入高效液相色谱仪，依法测定，记录色谱图，以浓度X(μg/ml)为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为:对乙酰氨基酚Y=27 591.0 X － 0.400 01(r=1.0000);咖啡因 Y=69 638.7 X+0.222 09(r=1.0000)，氨基比林 Y=44 079.6 X+0.081 734(r=1.0000)。结果表明:对乙酰氨基酚在 20.80 ～ 62.41 μg/m l、咖啡因在 4.64 ～13.92 μg/ml、氨基比林在17.91 ～53.72 μg/ml范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 按照样品测定方法，取同一份供试品溶液(批号20110109)，按照含量测定的方法重复进样5次。按峰面积计算，对乙酰氨基酚RSD为0.5%;咖啡因RSD为1.0%，氨基比林RSD为0.8%。

2.6 重复性试验 取本品(批号为20110109)5份，精密称定，按照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，照含量测定的方法依法测定，按峰面积分别计算出每份供试品的含量，根据含量结果依法计算RSD。对乙酰氨基酚RSD为0.6%，咖啡因RSD为1.1%，氨基比林RSD为0.9%(n=5)。结果表明，含量测定方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液(批号为20110109)，在12 h内按照含量测定的方法，在不同时间进样测定，按峰面积计算，对乙酰氨基酚 RSD为0.6%，咖啡因 RSD为1.0%，氨基比林RSD为0.7%(n=6)。结果表明，供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 回收率试验 分别精密称取样品(约相当于氨基比林2、4和6 mg)各3份，置具塞锥形瓶中，精密加入对照品储备液各10 ml、乙醇15 ml，超声5 min使溶解，滤过，精密量取续滤液5 ml，置50 m l量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，按样品测定方法测定，计算平均回收率(n=9)，对乙酰氨基酚回收率为99.9%，RSD为0.5%，咖啡因回收率为99.9%，RSD 为1.2%;氨基比林回收率为100.7%，RSD为1.0%。结果见表1、表2和表3。

表1 对乙酰氨基酚加样回收率试验结果

表2 咖啡因加样回收率试验结果

表3 氨基比林加样回收率试验结果

2.9 样品测定 精密称取小儿酚氨咖敏颗粒(约相当于氨基比林8 mg)，置具塞锥形瓶中，精密加乙醇25 ml，超声5 min使溶解，滤过，精密量取续滤液5 ml，置50 m l量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别吸取对照品溶液及供试品溶液20 μl注入高效液相色谱仪，依法测定，按外标法以峰面积计算，并将咖啡因计算结果与1.0927相乘，即得。分别对3个厂家的三批产品进行测定，结果均在标示量的95.0% ～105.0%的范围内，批内 RSD 均小于1.0%。结果见表4。

表4 小儿酚氨咖敏颗粒含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 按《国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准》第十二册，标准中对酚氨咖敏颗粒的另一主要成分对乙酰氨基酚含量测定未予规定，存在一定缺陷。本文采用高效液相色谱法同时测定小儿酚氨咖敏颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和氨基比林的含量，方法简便、快速、准确，不但完善了现行标准，提高了制剂标准的可行性及可靠性，而且可以更好地控制该制剂的质量。

3.2 检测波长的选择，在200～400 nm波长范围内，分别取对乙酰氨基酚、咖啡因及氨基比林混合对照品溶液及样品溶液进行光谱扫描，根据扫描结果，选用272 nm为检测波长，结果比较理想。

3.3 实验结果表明，对乙酰氨基酚在20.80～62.41 μg/ml、咖啡因在 4.64 ～ 13.92 μg/ml、氨基比林在17.91 ～53.72 μg/m l范围内线性关系良好，而且精密度、重复性和回收率等试验结果均较为理想，样品含量测定结果也比较可信。

1 中国药典［S］.二部.2005:附录28