溶血和脂浊标本对负相速率反应生化检测项目干扰的消除方法探讨

费月平，邢建明

(湖州市妇幼保健院，浙江 湖州 313000)

·基础与临床研究·

溶血和脂浊标本对负相速率反应生化检测项目干扰的消除方法探讨

费月平，邢建明

(湖州市妇幼保健院，浙江 湖州 313000)

目的：探讨速率法检测结果出现负值的原因及其消除干扰措施。方法应用全自动生化分析仪设置380nm和410nm 2种副波长，同时对日常标本中溶血和脂浊标本进行ALT、AST、HBDH、BUN、CO2等5项生化实验进行对比检测。结果副波长设置为380nm时，Hb>2.5g/L产生干扰，设置为410nm时，Hb>5.0g/L有显著干扰，2组干扰值间的差异具有统计学意义(P<0.05)；TG>9.8mmol/L对ALT、AST、BUN、CO2结果产生干扰，TG>14.6mmol/L对HBDH结果产生干扰，TG2组干扰值间差异无统计学意义(P>0.05)；随着溶血、脂浊的加深干扰逐渐加大，经稀释后的血清标本或10000r/min离心后的下清液血清标本检测结果相近。结论对于溶血标本进行以上5项检测时，副波长设置为410nm可以较好地消除轻度溶血的干扰，对于脂浊标本通过样本稀释或提高离心速度，在一定程度上可以消除脂浊的干扰。

速率法；降反应；辅助波长；溶血；脂浊

Abstract: [Objective] To investigate reasons for negative value results from five biochemical tests of rate assay and take measures to eliminate interference. [Method] Set two different secondary wavelengths for Auto Biochemical Analyzer, 380nm and 410nm respectively. Meanwhile, use different rates of centrifugal speed and dilution to detect ALT, AST, HBDH, BUN, CO2in daily heamolysed or turbid samples. [Result] Interference emerges in samlpes with Hb>2.5g/L when secondary wavelength is 380nm, and a marked interference emerges in samlpes with Hb>5.0g/L when secondary wavelength is 410nm. Difference between interference in two Hb group is statistically significant (P<0.05). AST , ALT, BUN , CO2results could be interfered in samples with TG>9.8 mmol/L and HBDH results could be interfered in samples with TG>14.6 mmol/L. No statistical difference of interference was found in two TG groups (P>0.05). Interference was strongly related with heamolysed and turbid intensity. For five biochemical tests, similar results were found in serum samples diluted with 0.9% NaCl and centrifuged with 10000 r/min. [Conclusion] When Detecting ALT, AST, HBDH, BUN, CO2in mild heamolysed samples, interence can be better eliminated with 410nm secondary wavelength, which shows better anti-interference than 380nm. For turbid samples, to some extent, interference can be eliminated by sample dilution or centrfuge speeding up.

Keywords：rate；down； secondary wavelength； hemolysis；lipid turbidity

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、尿素氮(BUN)、二氧化碳(CO2)检测是生化检验中最常见的项目，通过检测反应下降速率(-△A/min)计算结果，主波长均为340nm，辅波长有380nm或410nm 2种可供选择[1]。由于溶血和脂浊会导致这5项检测结果严重偏差甚至出现负值等现象。为此，我们将自动生化分析仪设置380nm和410nm 2种副波长进行检测对比观察，并对脂浊、溶血标本采用高速离心或稀释等方法进行测定比较，探索如何消除溶血和脂浊对检测结果产生的干扰现象，现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器

美国Abbott Aeroset型全自动生化分析仪，测定前按要求对仪器例行保养、校正和质控。LDZ5-2型自动平衡离心机，北京医用离心机厂生产；TGL-16H型台式高速离心机，珠海黑马医学仪器有限公司生产。

1.2 试剂

ALT、AST试剂由德赛诊断系统(上海)有限公司生产；BUN试剂由上海科华东菱诊断用品有限公司生产，HBDH、CO2试剂由浙江宁波瑞源生物科技股份有限公司生产。

1.3 测定样本

高值浓度多项冻干质控血清(批号551UN)，由RANDOX公司提供。溶血和脂浊血清取自我院门诊和住院患者的日常生化检测标本。

1.4 干扰物质

高浓度脂浊TG校准品(39.0mmol/L)及Hb液(40.0g/L)，由RANDOX公司提供。制备如下：(1)Hb干扰液，将浓度为40g/L的Hb液按比例稀释成40.0、20.0、10.0、5.0、2.5g/L；(2)TG干扰液，将浓度为39.0mmol/L的TG校准液按比例稀释成39.0、29.2、19.5、9.8、6.6mmol/L。

1.5 操作方法

(1)设置副波长为380nm或410nm；在RANDOX质控血清中加入上述干扰物，同时用生理盐水做平行管对照；进行ALT、AST、HBDH、BUN、CO2检测，各测5次求均值；(2)选取外观正常、溶血、脂浊的日常标本各30份，进行 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2检测，每个标本各测3次取均值。将常规离心后的脂浊标本以10000r/min离心10分钟后吸下清液再同法进行 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2检测[2]，同时，用生理盐水5倍稀释进行ALT、AST、HBDH、BUN、CO2检测，每个样本各测3次取均值。

1.6 统计学处理

2 结 果

2.1 溶血和高脂血标本5项生化项目在不同副波长下检测结果

检测结果显示：溶血时，ALT、CO2随Hb浓度增加产生负干扰，其他产生正干扰；副波长设置为380nm时，除HBDH外，Hb>2.5g/L就产生干扰；设置为410nm时，Hb>5.0g/L才有干扰；除HBDH外，副波长设置为410nm能消除轻度溶血的干扰，2种副波长间差异有统计学意义(P<0.05)。脂浊时，BUN随TG浓度增加产生正干扰，其他产生负干扰；TG>9.8mmol/L对ALT、AST、BUN、CO2结果产生干扰，TG>14.6mmol/L对HBDH结果产生干扰，副波长设置为380nm或410nm均不能消除脂浊(TG>9.8mmol/L)的干扰，2种副波长间差异无统计学意义(P>0.05)，详见表1、表2。

表1 Hb(g/L)在2种副波长时5项生化实验的检测比较

注：★不同浓度干扰物在不同波长和“0”干扰比较ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目P均<0.05;△副波长为380nm和410nm比较ALT、AST、BUN、CO2项目P均<0.05 ；HBDH项目P>0.05。

表2 TG(mmol/L)在2种副波长时5项生化实验的检测比较

注：★不同浓度干扰物在不同波长和“0”干扰比较ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目P均<0.05;△副波长为380nm和410nm比较ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目,P均>0.05。

2.2 正常及溶血标本稀释前后生化测定结果

选取外观正常及溶血标本各30份,结果显示, 正常标本常规处理和经5倍稀释后检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。溶血标本常规处理和经5倍稀释后检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

表3 正常及溶血标本稀释前后生化测定结果对照表

注：★正常标本常规处理和经生理盐水5倍稀释比较ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目P均>0.05;△ 溶血标本常规处理和经生理盐水5倍稀释比较ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目P均<0.05。

2.3 严重脂浊标本经稀释或高速离心前后生化测定结果

选取外观严重脂浊的标本30份, 常规离心制成3份血清, 共3组。将其中一组再用高速离心法, 取下清液； 一组生理盐水稀释5倍，同时上机测定。结果表明, 经5倍稀释和高速离心法的2组结果基本一致，与常规处理结果有明显差异(P<0.05)。详见表4。

表4 严重脂浊标本经稀释或高速离心前后生化测定结果对照表

注：★严重脂浊标本常规处理和经高速离心后下清液或生理盐水5倍稀释比较 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目P均<0.05; △高速离心后下清液和经生理盐水5倍稀释比较 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2项目P均>0.05。

3 讨 论

溶血和脂浊对临床化学测定干扰的机制涉及光谱和化学两个方面，双波长的作用主要是消除内源性的干扰，如脂血、溶血等，以达到测定结果的真实性和可靠性。从我们的检测结果显示，副波长设置380nm时，Hb>2.5g/L就对此5项生化检测结果产生干扰，并随溶血、脂浊的加深干扰逐渐加大；副波长设置410nm时，Hb>5g/L才会对检测结果有显著干扰，能消除Hb<5.0g/L的干扰，差异有统计学意义(P<0.05)。表明对于溶血标本进行此5项检测时，副波长为410nm可以消除轻度溶血的干扰。本文检测结果还显示：溶血时ALT、CO2随Hb浓度增加产生负干扰，其他产生正干扰，原因可能是血细胞中高浓度组分逸出使测定结果增高，或某些物质的血细胞内浓度低于血清浓度时溶血相当于血清被稀释；也可能与仪器的线性和溶血使试验方法受影响有关。本文检测30例溶血标本实验结果显示，将溶血标本稀释后可在一定程度上起到消除干扰的作用，使测定结果更接近真实性和可靠性。

近年来，糖尿病血脂代谢紊乱、家族性高脂血症患者不断增多[2]，日常标本中TG在10～20mmol/L已屡见不鲜，血清似奶油状，无法报告结果。另一方面临床上患者静脉注射脂肪乳也出现同样的情况。从我们的检测结果显示：副波长设置为380nm或410nm时，TG干扰情况相同，差异无统计学意义(P>0.05)；TG>9.8mmol/L时，对ALT、AST、BUN、CO2检测结果产生明显干扰，TG>14.6mmol/L时，对HBDH检测结果明显干扰，且随着TG浓度加大干扰逐渐加大，BUN产生正干扰，其他产生负干扰。原因可能是由于脂浊血清中水份被不溶性的乳糜微粒(CM)所取代，随着浊度的加深对光线有一定的散射作用，使空白吸光度值升高，直接影响比色测定，从而导致扣除的空白过高，扣除空白与脂血对测定的干扰逐渐不成比例[3-4]，也可能与仪器的线性和试验方法有关。本文30例脂浊标本实验结果显示，ALT、AST、HBDH、CO2检测结果明显偏低，BUN检测结果明显增高；特别是ALT和AST部分结果为负值。将脂浊标本进行稀释或经10000r/min离心，进行此5项生化检测时结果明显改变。可见，将脂浊标本进行稀释或提高离心速度可以消除脂浊对测定的干扰。

溶血和脂浊是生化检验中常见的干扰和影响因素，为了消除干扰，在进行上述5项生化检测时，副波长设置以410nm为宜，同时将标本稀释后进行测定也可以降低溶血和脂血的干扰。必要时，对脂血标本也可采用高速离心，降低其干扰。

[1]周新，府伟灵.临床生物化学与检验[M].第4版.北京：人民卫生出版社，2008.117～121.

[2]石凌波，史惠群，利用高速离心法消除脂血对生化测定的干扰[J].检验医学，2004,19(2)：138～140.

[3]叶应妩，王毓三，申子瑜，全国临床检验操作规程[M].第3版.南京：东南大学出版社，2006.43.

[4]李治锋，日立7600全自动生化分析仪检测结果为负值的原因分析及应对方案[J].检验医学与临床，2010,7(23)：2688.

Themethodofdenoisingtheinterferencecausedbyhemolysisandlipidturbidityinnegativephasevelocityresponseofbiochemistryexamination

FEIYueping，XINGJianming

(The Maternity and Child Health Care Hospital of Huzhou, Zhejiang 313000, China)

费月平(1965-)，女，浙江湖州人，中专，主管技师。研究方向：生物化学检验

R446.1

A

0672-0024(2013)04-0047-04