卵巢上皮性肿瘤中P27和P53蛋白的表达及其相关性研究

高会玲 焦悦 孙树静

在妇科肿瘤中，卵巢癌是死亡的首要原因，其生存时间明显低于五年［1］。对于卵巢癌早期诊断而言，没有一种理想的肿瘤标志物可以达到满意的灵敏度和特异性。国内外学者目前都在致力于研究能够预测恶性肿瘤患者预后的生物学指标，目的是更合理的应用综合治疗方法，以提高患者的生存期。细胞生物学因子P27及P53都是与细胞周期Gl期检查点(Check-Point)相关的抑癌基因，其蛋白异常表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。本研究应用免疫组织化学方法检测100例上皮性卵巢肿瘤组织中P27及P53蛋白的表达情况，研究P27及P53在上皮性卵巢肿瘤组织中的表达，探讨它们在上皮性卵巢肿瘤发生发展中的作用及其相互关系，并为上皮性卵巢肿瘤治疗监测和预后评估提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 120例标本均来自于河北医科大学第四医院2008年至2009年手术病例。分为3组：(1)卵巢上皮性良性肿瘤组25例(良性组)，年龄15～45岁;(2)卵巢上皮性交界性肿瘤组18例(交界性组)，年龄25～55岁;(3)卵巢上皮性恶性肿瘤组57例(恶性组)，年龄36～75岁，其中卵巢浆液性囊腺癌39例，黏液性囊腺癌9例，卵巢子宫内膜样癌9例。卵巢癌中Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期43例(根据国际妇产科学会制定的卵巢癌FIGO分期);高中分化34例，中低分化23例，盆腔淋巴结转移8例。并取正常卵巢组织20例作为对照组，年龄35～55岁。标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，粘贴于涂有0.05%多聚赖氨酸的载玻片备用。

1.2 方法 采用免疫组织化学S-P法，免疫组化结果按阳性细胞百分比及阳性细胞染色强弱评分(immunohistochemical scores，IHS)：IHS=A×B判定。P27蛋白免疫组化染色阳性定位于细胞核及胞浆，P53蛋白免疫组化染色阳性定位于细胞核，二者阳性均呈棕黄色或棕褐色颗粒。光镜分析按AB值法(A代表显色深浅，B表示显色细胞所占的比例)。AB法判断：A：无显色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分;B：1分显色细胞少于1/3，2分显色细胞占1/3～2/3，3分显色细胞多于2/3。每个细胞阳性表达的积分(A×B)可分为四级：“-”(阴性)积分为0分;“+”(弱阳性)积分为1～3分;“++”(阳性)积分为4～6分;“+++”(强阳性)积分6分以上。染色特征及结果判定用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，组间率的比较采用χ2分割法和确切概率法(Fisher’s Exact Test);P27和P53的相关性采用Spearman等级相关分析，P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 P27蛋白在不同卵巢组织中的表达情况 P27染色阳性为胞核及胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，其在正常卵巢、良性肿瘤、交界性肿瘤及卵巢癌中的表达情况见表1～2，阳性表达率分别为90.00%，80.00%，55.56%和36.84%，恶性组P27蛋白表达明显低于正常组和良性组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1～3。

2.2 P27与卵巢癌组织临床病理学特征的关系 卵巢上皮性癌中，P27阳性表达率在＜50岁和≥50岁患者、在卵巢癌不同病理类型中差异无统计学意义(P＞0.05);在不同的组织学分级中(G1～G2，G3)P27阳性表达率分别为69.57%及14.71%，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);在不同的临床分期中早期癌(Ⅰ～Ⅱ期)与晚期癌(Ⅲ～Ⅳ期)P27阳性表达率分别为71.43%及25.58%，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。淋巴结有转移组P27阳性率低于无转移组，但差异无统计学意义(P＞0.05)。见表3。

表1 4组卵巢组织p27 IHS分值 例

表2 p27阳性表达χ2检验比较

表3 P27蛋白在不同病理类型卵巢组织表达比较

2.3 P53蛋白在不同卵巢组织中的表达情况 P53蛋白免疫组化染色阳性主要定位于细胞核，其在正常组织中未见表达，在卵巢良性、交界性及恶性肿瘤中阳性表达率逐级增高，分别为12.00%，16.67%和63.16%，恶性组P53蛋白表达明显高于良性组和交界性组(P＜0.05)。见表4～6。

2.4 P53与卵巢癌组织临床病理学特征的关系 卵巢上皮性癌中，P53阳性表达率在＜50岁和≥50岁患者、在卵巢癌不同病理类型中差异无统计学意义(P＞0.05);在不同的组织学分级中(G1～G2，G3)P53阳性表达率分别为43.48%及76.47%，差异有统计学意义，低分化的卵巢癌阳性表达率明显高于高分化组;在不同的临床分期中早期癌(Ⅰ～Ⅱ期)与晚期癌(Ⅲ～Ⅳ期)P53阳性表达率分别为35.71%及72.09%，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。说明P53蛋白表达阳性率与组织学分型、临床分期有关，差异有统计学意义(P＜0.05)。淋巴结有转移组P53阳性率低于无转移组，但差异无统计学意义(P ＞0.05)。见表6。

2.5 P27和P53在卵巢癌组织中表达的相关性 57例卵巢癌组织中P27与P53表达，二者在卵巢癌组织中呈明显负相关关系(Rs=-0.397，P ＜0.05)。见表7。

表4 4组卵巢组织p53 IHS分值 例

表5 p53阳性表达χ2检验比较

表6 P53蛋白在不同病理类型卵巢组织表达比较

表7 P27和P53在卵巢癌组织中表达的相关性 例

3 讨论

大量研究证明P27蛋白表达的缺失或减少与消化道癌症、肺癌、肾癌、前列腺癌等恶性肿瘤的浸润性增加及预后不良密切相关［2］。本实验通过免疫组化S-P方法对100例卵巢上皮性肿瘤以及20例正常卵巢上皮组织中的P27蛋白的表达进行检测，结果可见P27蛋白阳性表达定位于胞浆及细胞核中，在正常组织中P27蛋白阳性表达主要定位于细胞核中，但在卵巢上皮性癌中阳性表达主要定位于细胞浆中，本实验结果提示P27蛋白在卵巢正常上皮组织、良性肿瘤、交界性肿瘤及恶性肿瘤细胞核内的表达阳性率有显著差异(P＜0.05)，其在卵巢恶性肿瘤中的表达明显低于正常卵巢组织，这与姚军等［3］研究结果一致。并且本实验结果提示P27蛋白表达的阳性率与卵巢癌组织分化程度、临床分期有关，差异有统计学意义(P＜0.05)。在卵巢恶性肿瘤中，临床分期越高、组织分化程度越低者P27蛋白的阳性表达率越低。P27蛋白的表达在低分化组明显低于中高分化组，差异有统计学意义(P＜0.05)，P27蛋白的表达在临床分期Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期，差异有统计学意义(P ＜0.05)，这与 Shimizu等［4］研究结果一致，但其认为P27蛋白的表达只与恶性肿瘤临床分期相关，临床分期是惟一影响预后的独立预后因素。这种差异可能与样本量大小、临床分期及组织学分型等多个因素有关，有待进一步对卵巢恶性肿瘤患者进行大规模、系统性的研究，进而得出较可靠的一致性的结论。本实验中，卵巢癌中的P27蛋白表达明显低于卵巢正常组织、良性肿瘤及交界性肿瘤，而临床期别越晚，组织分化程度越低，P27蛋白的表达越低。提示P27蛋白的表达与临床分期及组织分化相关(P＜0.05)。说明P27在卵巢肿瘤中的发生发展、评估预后，指导治疗及逆转肿瘤耐药中发挥重要作用。

现在已逐渐明确，P53基因分为野生型P53基因和突变型P53基因。野生型P53基因在维持细胞的正常生长、抑制肿瘤细胞的增殖中起到了重要作用，而研究已证实突变型P53基因具有癌基因的功能，对细胞增殖有正性调控作用，促进瘤细胞向恶性转化［5］。P53蛋白的异常表达被认为是P53基因突变的标志。本实验通过免疫组化S-P方法对100例卵巢上皮性肿瘤及20例正常卵巢上皮组织中的P53蛋白的表达进行检测，结果发现大部分的肿瘤细胞核中可见P53蛋白表达。P53蛋白在卵巢正常上皮组织中不表达，而在卵巢良性肿瘤组织，交界性肿瘤组织及卵巢恶性肿瘤组织中表达的阳性率有显著差异(P ＜0.05)，这与多项研究结果［6，7］一致。P53 蛋白的表达上调提示P53基因的表达在卵巢癌发生发展中起重要作用，提示P53基因的突变与卵巢肿瘤恶性转化直接相关。本实验结果还提示P53蛋白表达的阳性率与年龄、淋巴结转移及组织学类型无关，差异无统计学意义(P＞0.05)。但有文献报道P53蛋白的表达与年龄、淋巴转移及组织学类型的关系还存在争议。可能与收集的样本数、实验方法等因素有关，也可能与卵巢肿瘤在恶性发展中还有其他原癌基因激活和抑癌基因失活有关。而本实验结果提示P53蛋白表达的阳性率与卵巢癌组织分化程度、临床分期有关。组织分化越低，临床期别越高，P53蛋白的表达阳性率越高，差异有统计学意义(P＜0.05)，提示P53基因的突变可能是发生在卵巢癌发生的早期，是卵巢癌发生过程中的早期事件，可以推测P53的表达是提示卵巢恶性肿瘤预后的一个十分有意义的指标，

目前国内外文献对二者在卵巢上皮性肿瘤中的表达鲜见报道。本研究采用IHS评分法对每张病理切片进行综合客观的评分，对P27及P53在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤、卵巢交界性肿瘤及上皮性卵巢癌组织中表达的相关分析，结果显示：在卵巢上皮性肿瘤中P27和P53蛋白的IHS分值呈负性相关关系，表明两者在卵巢上皮性癌的发生、发展中发挥一定的相互作用。P53蛋白的阳性表达率越高说明细胞DNA损伤越严重，它与P27蛋白的表达呈负性相关，可以解释为在M期肿瘤细胞损伤越多(即P53高表达)，其后在从G1向S期的转化过程中受P27的抑制作用越少(即P27低表达);反之，若在M期受到P53的抑制越少(即P53低表达)，那么在从G1向S期的转化过程中受P27的抑制越大(即P27高表达)。证实了P27和P53具有相当的预后价值，特别是同时两者检测意义更大。本实验研究虽然讨论了两者之间的关系，但细胞周期的调控还有很多因素参与。影响卵巢癌的诸多相关因子并非彼此独立的起作用，其相互之间存在着内在联系，各自的作用及相互之间的作用机制尚待研究，多因素的检测对卵巢癌的早期诊断、恶性程度的判断具有一定意义，对于评价预后，指导卵巢癌的多基因治疗，提高治疗效果发挥着重要的作用。

1 Matin AG，Femandez CM.Lights and shadows of the tumoral marker CA-125 in ovarian cancer.Clin Transl Oncol，2009，10：449-452.

2 张凤艳，张金子，邹树彪，等.胃癌组织中P21 P27 P53和Rb的表达及临床意义.临床与实验病理性杂志，2011，27：586-589.

3 姚军，曾永群，黄健.P27蛋白在卵巢癌组织中的表达变化及意义.山东医药，2009，49：63-66.

4 Shimizu M，Nikaido T，Toki T，et al.Clear cell carcinoma has an experssion pattern of cell cycle regulatory molecules that is unique among varian adenocarcinomas.Cancer，1999，85：669-677.

5 崔斩霞，王海军惠起源.胃粘膜不同病变组织中突变型P53蛋白表达的研究.延安大学学报(医学科学版)，2008，6：3-4.

6 徐海耿，王华.P53基因在上皮性卵巢癌的表达及临床意义.中华临床医学，2006，6：489-490.

7 Lee JS，Choi YD，Lee JH，et al.Expression of cyclooxgyenase-2 in peithelial ovarian tumors and its relation to vascular endothelial gorwth factor and P53 expression.Enterational Joumal of Gynecologieal Cancer，2006，16：1247-1253.