毛节缬草挥发油成分分析及镇静作用实验研究

杜 娟，刘 娟，王丽红，杨春荣，胡艳秋，王伟娥，彭惜媛，吴 岚

（佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯154007）

毛节缬草Valeriana alternifolia Bunge var.stoloniferaBar.et Skv.为败酱科（Valerianaceae）缬草属（Valeriana）多年生草本植物[1]，其根及根茎入药。由于该属植物的药用价值具有镇静安神、解痉止痛的功效，已得到高度重视和广泛的研究[2]，毛节缬草在东北地区分布较多，目前，对于毛节缬草的显微鉴别研究已经有报道[3]，本实验对黑龙江省分布小兴安岭的毛节缬草中挥发成分及其镇静作用进行了分析研究，旨在为其开发利用提供依据。

1 实验材料与方法

1.1 材料与试剂

毛节缬草采自黑龙江省伊春地区，经本校生药学教研室刘娟教授鉴定为败酱科植物毛节缬草Valeriana alternifolia Bunge var.stolonifera Bar.et Skv.的根茎；乙醚（分析纯）上海哈勃技术公司；无水碳酸钠（分析纯）：天津科茂化学试剂有限公司。昆明健康小鼠，清洁级，体重18～25g，由佳木斯大学动物实验中心提供。

1.2 仪器

GC－17A型气相色谱仪，日本岛津公司；MSQP5050A质谱仪，日本岛津公司，电子恒温电热套，天津市泰斯特仪器有限公司；挥发油提取器，上海玻璃仪器厂（密度小于1）。ZZ－6小鼠自主活动测试仪，成都泰盟科技有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 提取方法

毛节缬草挥发油提取采用水蒸气蒸馏法：取粉碎后的药材过筛，采用水蒸气蒸馏装置提取挥发油。

1.3.2 色谱条件

气相色谱条件：检测器FID；弹性石英毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；进样口温度280℃ ；流 速41.8 mL／min；炉初始温度230℃；柱前压40.00kPa；分流比50：1；进样量2μL；程序升温：60℃（保持3 min）4℃／min80℃（保持2 min）4℃／min225℃（保持10 min）。

质谱条件：EI离子源；电子能量70ev；扫描范围40～500AMV；扫描速率1000amu／s；离子源温度230℃；接口温度280℃；倍增电压1.30 KV；检索谱库 DATABASE／NIST98L[4]。

1.3.3 镇静作用实验

取小鼠60只，雌雄各半，随机分为5组：生理盐水对照组，挥发油低剂量组（0.03g／kg）、挥 发 油 中剂量组（0.06g／kg）、挥发油高剂量组（0.12g／kg），地西泮组（1 mg／kg），每组12只。对正常小鼠自发活动的影响，于末次给药30 min后，置于自发活动仪内，先适应环境5 min，再记录10 min内小鼠的自发活动次数。试验要求在安静、光线较暗的环境下进行。

1.4 统计学方法

所得实验数据用SPSS11.0统计软件，组间结果作t检验。

2 实验结果

2.1 挥发油含量测定

采用毛节缬草挥发油所含成分的含量为峰面积，利用归一化的面积百分比计算总含量。从分离的额67个峰中，用质谱鉴定出34个化合物，占总含量的91.12%。

2.2 挥发油成分测定

通过图谱检索鉴定化合物，毛节缬草挥发油成分中主要以烯、酯、醇 为主，其 中 乙 酸 龙脑 酯 （30.57%）、龙 脑（7.41% ）、石竹烯（3.98% ）、蒎 烯（3.12% ）、莰烯（2.23% ）、石竹烯（3.98%）、缬草酮（1.22%）等，另外还含有芳樟醇（0.26% ）、百里香甲醚（0.11% ）、α－松油醇（0.72% ）、α－古芸烯（1.03%）、α－榄香烯（2.68%）、3－乙烯基甲醇（0.23% ）、大根香叶烯D（0.91% ）、邻苯二酚（0.96% ）、紫罗兰酮（0.95% ）、佛手柑油烯（1.86% ）、烯戊酸（1.06% ）、匙叶桉油烯醇（0.16%）、紫丁香酚（0.83%）、红没药醇（0.08%）、α－杜松醇（0.34%）、十八烯酸（0.13%）、十八酸二烯酸甲酯（0.45% ）等。

2.3 镇静作用结果

与生理盐水组比较，毛节缬草挥发油提取物的高、中、低剂量组能显著抑制小鼠自主活动次数，差异具有显著性（P＜0.05）。提示毛节缬草挥发油成分具有镇静的药理作用，结果见表1。

表1 毛节缬草挥发油成分对小鼠自主活动次数的影响（n＝12，次，±s）

表1 毛节缬草挥发油成分对小鼠自主活动次数的影响（n＝12，次，±s）

注：与生理盐水对照组比较，＊P＜0.05，＊＊ P＜0.01。

组给药前活动次数 给药后活动次数生理盐水对照组 142.3±26.0 17.6±26.别2挥发油低剂量组 140.1±34.2 164.6±29.5＊挥发油中剂量组 142.2±26.7 161.9±23.2＊＊挥发油高剂量组 141.8±34.2 157.6±32.2＊＊地西泮组 142.5±29.7 61.3±13.8＊＊

3 讨论

本实验通过对毛节缬草提取的挥发油进行成分的分析，确立毛节缬草的GC－MS分析色谱条件，共鉴定出34种成分，以莰烯、蒎烯、柠檬烯、龙脑、乙酸龙脑酯等含量多占比例较多，鉴定的成分占挥发油总量的91.12%。在毛节缬草中发现缬草酮成分（1.22%），在陈虎彪报道的毛节缬草挥发油成分中未见有[5]。通过小鼠行为学观察毛节缬草挥发油提取物的高、中、低剂量组均能显著抑制小鼠活动，说明提取物具有显著的镇静活性，目前有关缬草属的药理研究中，均认为是挥发油和缬草素共同发挥镇静安神作用作用，后续实验将从镇静安神机制进行研究，这也为毛节缬草的开发利用提供了科学数据。

[1]傅沛云主编.东北植物检索表[M].第2版，北京：科学出版社，1995，627－629

[2]朱有昌主编.东北药用植物[M].哈尔滨：黑龙江科学出版社，1989，1073－1076

[3]杨春荣，单静颖，刘莉，等.毛节缬草的解剖构造观察[J].黑龙江医药科学，2003，26（6）：25－26

[4]杜娟，黄英，刘娟，等.栽培黑水缬草中挥发油成分分析[J].黑龙江医药科学，2010，33（6）：32－33

[5]陈虎彪，徐学明，赵玉英.毛节缬草挥发油化学成分的研究[J].中国中药杂志，1998，23（7）：418－419