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盐酸青藤碱醇质体凝胶的制备及质量控制

2013-10-08姜素芳胡姣艳何丽华李红苹

关键词:质体青藤脂质体

姜素芳,胡姣艳 ,何丽华,李红苹

(湖南师范大学医学院,湖南 长沙 410013)

盐酸青藤碱(sinomenine hydrochloride)具有抗炎、抗心率失常、镇痛、镇静、镇咳等作用,主治类风湿性关节炎等各种风湿病以及心率失常,临床疗效确切[1]。该药口服制剂的胃肠道不良反应较大,生物利用度低,注射剂半衰期短,需频繁给药[2]。因此,凝胶、帖片等透皮给药制剂在给药方式上有着一定的优势。但普通的透皮给药系统中,致密的角质层严重阻碍了药物的透皮速率和透皮量,因此研究强效安全的透皮促进方法成为目前透皮研究的热点。醇质体是由磷脂、乙醇、水组成的新型的具有脂质体双分子层结构的囊泡给药载体,相关研究发现醇质体可促进药物穿透皮肤并能增加药物在皮肤中的蓄积[3-4]。为此,本试验将盐酸青藤碱制成醇质体凝胶剂,并制定了初步的质量控制方法。

1 .仪器与试药

盐酸青藤碱(HCSN,湖南正清制药有限公司,含量 98.7%);卵磷脂(德国Lipoid公司);乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯;水为自制重蒸馏水。探针式超声仪(美国Branson公司);78HW-1型恒温磁力搅拌器 (江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);1101型高效液相色谱仪(美国 安捷伦)。

2 处方与制备

2.1 盐酸青藤碱醇质体的制备

采用注入法制备:称取处方量的盐酸青藤碱和磷脂,用无水乙醇溶解,置于磁力搅拌器上,在密闭条件下边搅拌边缓慢细流注入磷酸盐缓冲液,继续搅拌30分钟,于冰水浴中探头式超声30 s(超声3 s,停 2 s),以 0.22 μm 的微孔滤膜滤过,即得盐酸青藤碱醇质体。

2.2 正交试验筛选处方和工艺

根据单因素考察结果,选择对醇质体的制备影响较大的三个主要因素:磷脂与盐酸青藤碱的质量比(A)、磷酸盐缓冲液(PBS)的 PH 值(B)、乙醇体积分数(C)进行正交设计,每个因素取三个水平,以包封率(E%)为考察指标,按 L9(34)安排正交试验。因素水平见表1,结果见表2。

表1 因素与水平

表2 L9(34)正交设计表及实验结果

由表2可知,各影响因素的影响大小依次为:A>C>B。最佳的工艺组合为A3C1B2,即磷脂与盐酸青藤碱的质量比为10:1;乙醇体积分数为30%;磷酸盐缓冲液pH值为6.8。在此优化条件下制备3批盐酸青藤碱醇质体,测得药物平均包封率为62.8%。

2.3 盐酸青藤碱醇质体凝胶的制备:称取0.5g卡波姆934,置于10mL蒸馏水中,于室温放置过夜,充分溶胀,加三乙醇胺调pH至中性使成凝胶状,即得空白凝胶基质。将已制备的醇质体混悬液与空白凝胶基质以1:1的比例研和均匀,即得含盐酸青藤碱0.2%的醇质体凝胶。

3 质量控制

3.1 性状

本品为淡黄色透明凝胶,凝胶均匀细腻,稠度适宜,涂展性好。

3.2 pH值

取本品2g,加20mL水,搅匀,测定3批样品的pH值分别为 6.82,6.87,6.86,符合相关规定。

3.3 含药醇质体形态观察

将盐酸青藤碱醇质体样品用30%乙醇溶液稀释适当的倍数,用磷钼酸负染色法染色后,固定于铜丝网格上,置于透射电子显微镜下观察,醇质体为近球状小囊泡,形态圆整,粒径小而均匀。盐酸青藤碱醇质体透射电镜照片见图1。

图1 盐酸青藤碱醇质体电镜照片(×20000)

3.4 含量测定

3.4.1 色谱条件

高效液相色谱法的色谱条件为:Hypersil GOLD C18柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm); 流动相为乙腈-0.01mol/LNaH2PO4(15:85);柱温为30℃;体积流量为1 mL/min;检测波长为266 nm;进样量为20 μL。此条件下辅料对药物测定无干扰,方法可行。空白醇质体凝胶和盐酸青藤碱醇质体凝胶的色谱行为见图2。

图2 高效液相色谱图

3.4.2 标准曲线的制备

精密称取干燥至恒重的盐酸青藤碱对照品10mg,置50mL棕色容量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,得浓度为0.2 mg/mL的对照品储备液。分别精密吸取储备液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL于10 mL棕色容量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,得浓度为 5、10 、20 、30 、40 、60 、80μg/mL的系列溶液,分别取20μL进样,以浓度 (C)为横坐标,峰面积 (A)为纵坐标,回归,得回归方程:A=17.354 C+2.307,r=0.9999,线性范围为5~80μg/mL。

3.4.3 回收率试验

分别精密称取高,中,低已知含量的盐酸青藤碱醇质体,加至空白凝胶中,搅拌均匀,即得不同浓度的盐酸青藤碱醇质体凝胶,分别取凝胶约0.5g,按"3.4.4"项下方法处理,测定低、中、高浓度的回收率,结果详见表3。

表3 回收率实验结果(n=6)

3.4.4 样品含量测定

准确称定盐酸青藤碱醇质体凝胶0.5g,置于25ml容量瓶中,加无水乙醇适量,超声并振摇使基质分散、盐酸青藤碱溶解,再用无水乙醇稀释至刻度,过滤,取20μL续滤液进样,另精密称取盐酸青藤碱对照品适量,用无水乙醇配成浓度为40μg/mL的对照品溶液,同法测定,以外标法计算含量。结果三批样品的标示百分含量分别为97.36%,99.08%,98.65%。

3.5 醇质体包封率测定

精密吸取1mL醇质体混悬液置于透析袋中,封口,将透析袋浸入20 mL pH6.8磷酸盐缓冲液中,置于25℃恒温水浴中振荡,每2h更换1次透析介质,将所换出的透析液取20μL进样分析,计算盐酸青藤碱游离药物累积透出量W游。另取相同浓度盐酸青藤碱水合介质溶液1 mL于透析袋,同上平行操作,8h已透出100%,按8 h透析完全,计算包封率=(1-W游/W总)×100%,结果,三批样品的包封率分别为61.2%,63.3%和63.8%。

3.6 初步稳定性实验

取盐酸青藤碱醇质体凝胶10g,装入带刻度的离心管中,以2500r/min离心20min。观察样品是否出现分层现象。另将样品10g装于俱塞瓶内,置于60℃烘箱中,恒温6h进行耐热稳定性实验;置于-20℃冰箱内6h进行耐寒实验,重新考察其PH值、含量、性状和外观等指标是否有明显变化[13]。结果离心后样品未见分层现象。经耐热、耐寒实验后的样品置于常温下考察1mo,其PH值、含量、性状和外观等指标均无明显变化。

4 讨论

脂质体用于皮肤给药已有20多年的历史,一般认为普通脂质体应用后,不能增加药物的透皮速率,仅能增加药物在皮肤内的滞留。醇质体作为一种新型的具有囊泡结构的经皮渗透载体,具有更多优于脂质体的特点[5]。本实验在将盐酸青藤碱制备成醇质体时,通过离体透皮试验,发现其透皮速率和透皮量均远高于普通脂质体,因而可望有效促进盐酸青藤碱的经皮吸收。但其混悬液药物容易泄露,不宜贮存,且乙醇较易挥发,因此进一步将醇质体制备成凝胶,以提高制剂的稳定性。

本文采用注入法制备盐酸青藤碱醇质体,操作简单,流程时间短,重现性好。所得醇质体粒径小而均匀。制备过程中发现将盐酸青藤碱溶于乙醇比将其溶于PBS可显著提高包封率,同时乙醇以及磷脂的浓度对所形成醇质体的粒径及包封率都有较大的影响,乙醇比例越高,醇质体粒径越小,磷脂浓度越大,醇质体粒径越大,包封率越高。

[1]刘强,周莉玲,李锐.青藤碱的研究概况 [J].中草药,1997,(4):247.

[2]周莉玲,李锐,周华,等.青藤碱制剂药动学相关性研究 .中成药,1996,18(9)∶1.

[3]FANG YP,TSAIYH,WU PC,etal.Compadson of 5-aminolevu-linic acid-encapsulated liposome versus ethosome for skin delivery for photodynamic therapy[J].IntJ Pham,2008,356(1-2):144.

[4]Maghraby G M,Willims A C,Barry B W.Interactions of surfactants(edge activators)and skin penetration enhancers with liposome[J].Int J Pham,2004,276(1/2):143.

[5]Elsated M M,Abdallah O Y,Naggar V F,et al.Deformable liposomes and ethosomes:mechanism of enhanced skin delivery[J].Int J Pharm,2006,322(1~2):60.

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