玉屏风散配方颗粒汤剂与传统饮片汤剂对免疫抑制小鼠T细胞亚群影响的比较*

樊凯芳 赵建平 冯振宇

（1.山西中医学院，山西 太原 030024；2.山西中医学院中西医结合医院，山西 太原 030013）

汤剂作为传统中药剂型，虽具有吸收快、疗效好、随证加减等优点，但亦有服用携带不便、质量标准不明等缺点。中药配方颗粒是以符合炮制规范的优质药材为原料，采用现代高新技术提取、浓缩、制粒而成的产品，具有可直接冲服、使用及携带方便等优点，在临床使用逐渐增多。玉屏风散具有益气固表、祛风止汗、扶正固本功效，能促进淋巴细胞的增殖分化，对细胞免疫和体液免疫均有增强作用［1］。为给中药配方颗粒替代中药饮片提供依据，本研究通过实验，将玉屏风散配方颗粒汤剂与传统饮片汤剂对免疫抑制小鼠的CD4+T，CD8+T的影响进行了比较。

1 材料与方法

1.1 动物 昆明种小白鼠，6～8周，体质量（20±2）g，雌雄各半，由中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所提供，许可证号：scxk20090017。

1.2 药物 玉屏风散由黄芪、白术、防风组成，中药饮片、配方颗粒（由同批次相应饮片制备而成），均由广州一方制药有限公司提供。传统饮片汤剂：黄芪30 g，白术30 g，防风15 g，共计75 g/d，按传统煎煮法制成水煎液，并浓缩至含生药0.5、1 g/mL两种浓度。配方颗粒汤剂：取与饮片剂量相当的配方颗粒（黄芪颗粒6 g，白术颗粒9 g，防风颗粒3 g），加水（80～100 ℃）配制成相应的浓度（同传统饮片）。

1.3 仪器与试剂 JA5003型电子分析天平（上海精科天平厂）；DDL-5冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；电热恒温培养箱 （上海跃进医疗器械厂）；Facscalibur流式细胞仪（BD公司）；酶标仪（Laysystems Multiskan As-cent）。环磷酞胺（上海华联制药有限公司）；生理盐水（山东齐都药业有限公司，批号1D07091609）；FITC标记的大鼠抗小鼠CD8单克隆抗体 （美国EB公司）；PE标记的大鼠抗小鼠CD4单克隆抗体 （美国EB公司）。

1.4 分组与造模 72只实验动物按随机数字表法分为正常对照组、模型组、玉屏风散传统饮片汤剂低、高剂量组和配方颗粒汤剂低、高剂量组，每组12只。动物常规饲养1周后进行造模，采用腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下模型，除正常对照组外，各组均腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg，连续7 d，复制免疫低下模型，正常对照组腹腔注射等量的生理盐水。

1.5 给药方法 药物剂量按人鼠体表面积折算等效比率剂量表［2］，计算出小鼠的等效剂量。传统饮片汤剂低、高剂量组分别为 5、10 g/（kg·d），配方颗粒汤剂低、高剂量组同传统饮片汤剂组，正常对照组和模型组对照组小鼠给予20 g/（kg·d）的生理盐水溶液。各组于造模后均为每日灌胃1次，连续10 d。

1.6 标本采集与检测 末次给药24 h后，每组小鼠摘眼球收集血液。将血置于抗凝管中（含肝素），加入抗小鼠CD4单克隆抗体 （PE）和抗小鼠CD8单克隆抗体（FITC）各10μL，置4℃避光20min。加染色洗涤液1mL混匀，离心洗涤3次后弃上清。加入0.5 mL的固定液固定，置4℃存放30 min，流式细胞仪测定。

1.7 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件。数据以（±s）表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

见表1。与正常对照组比，模型组小鼠外周血CD4+T，CD8+T淋巴细胞率明显降低（P＜0.01）。与模型组比，玉屏风散饮片、玉屏风散颗粒高剂量组外周血CD4+T，CD8+T淋巴细胞率均显著升高 （P＜0.05），玉屏风散饮片、配方颗粒低剂量组外周血CD4+T，CD8+T淋巴细胞率无明显差异（P＞0.05）。玉屏风散饮片高剂量组和配方颗粒高剂量组间无明显差异（P＞0.05）。

表1 各组小鼠外周血T细胞亚群细胞率比较（％，±s）

表1 各组小鼠外周血T细胞亚群细胞率比较（％，±s）

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组 别 n CD4+T CD8+T正常对照组 12 62.52±1.90** 56.49±1.35**模型组 12 40.35±1.81 36.75±1.24玉屏风散饮片低剂量组 12 47.18±2.00 39.67±1.46玉屏风散饮片高剂量组 12 61.69±1.80* 54.58±1.64*玉屏风散颗粒低剂量组 12 46.29±1.60 38.89±1.56玉屏风散颗粒高剂量组 12 60.84±1.50* 53.58±1.78*

3 讨论

玉屏风散是中医扶正固本的经典方剂，大量的实验研究表明其对免疫功能低下的动物模型具有明显的增强免疫功能作用［1］。T细胞亚群中的T辅助细胞和T抑制细胞对免疫反应起调控作用，对维持免疫稳定起重要作用。CD4+代表辅助性T细胞，CD8+代表抑制性和细胞毒性T细胞，CD4+，CD8+彼此相互调节，表现出辅助和抑制的作用，是免疫系统的核心。因而机体CD4T，CD8+T及CD4+/CD8+可以作为评价机体细胞免疫状态的指标［3］。

为给中药配方颗粒替代中药饮片提供依据，本研究通过实验观察比较玉屏风散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂对免疫抑制模型小鼠T细胞亚群的影响。实验结果表明，模型组较正常对照组小鼠外周血CD4+T，CD8+T细胞率显著降低，玉屏风散传统饮片高剂量组和配方颗粒高剂量组均较环磷酰胺组小鼠外周血CD4T，CD8+T细胞率显著升高，说明玉屏风散传统饮片高剂量组和配方颗粒高剂量均通过升高小鼠外周血CD4T，CD8+T细胞率，增强其T细胞免疫功能。且玉屏风散传统饮片高剂量组和配方颗粒高剂量组间比较无显著性差异，说明两种汤剂等剂量间增强小鼠T细胞免疫功能作用基本相当，为玉屏风散配方颗粒在临床上替代传统饮片，进一步推广其应用提供一定的实验依据。

［1］张红军，张晓莉，宋宝辉，等.玉屏风散对免疫抑制小鼠的免疫功能的调节作用［J］.细胞与分子免疫学杂志，2001，17（4）：398.

［2］陈奇，王建华.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1993：33.

［3］王月飞，赵红晔，王玉阁，等.玉屏风散生物转化液对免疫抑制小鼠细胞免疫的干预作用［J］.中国实验方剂学，2010，16：（14）：176-178.