正交试验法优选防己配方颗粒的提取工艺△

陈娟，梁小银，林大都，严萍，林文华，詹若挺，陈蔚文

(广州中医药大学 中药资源科学与工程研究中心 岭南中药资源教育部重点实验室，广东 广州 510006)

中药工业

正交试验法优选防己配方颗粒的提取工艺△

陈娟，梁小银，林大都，严萍*，林文华，詹若挺，陈蔚文

(广州中医药大学 中药资源科学与工程研究中心 岭南中药资源教育部重点实验室，广东 广州 510006)

目的：优选防己配方颗粒的提取工艺。方法：采用正交试验法，以出膏率、粉防己碱和防己诺林碱的提取量为评价指标，考察加水量、提取次数和提取时间3个因素，优选出防己配方颗粒的提取工艺。结果：确定防己配方颗粒的最优提取工艺为防己饮片第1 次加8倍量水，浸泡0.5 h，煎煮1.5 h，第2次加6倍量水，煎煮1.5 h。结论：该工艺条件提取充分，稳定可行，可为防己配方颗粒的标准化、规范化生产提供一定参考依据。

防己；配方颗粒；提取工艺；正交试验；粉防己碱；防己诺林碱

防己为防己科植物粉防己StephaniatetrandraS.Moore的干燥根，具有祛风止痛，利水消肿的功效，用于风湿痹痛，水肿脚气，小便不利，湿疹疮毒[1]。此外临床上还用于治疗高血压病和心绞痛[2-3]。防己主要含粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、氧防己碱、防己斯任碱、小檗胺、粉防己碱D盐酸盐、荷包牡丹碱等生物碱类成分[2,4]。中药配方颗粒包装小，携带方便，可免去患者自行煎煮的过程，方便患者使用，同时也符合中医药的发展前景[5]。该研究通过采用正交试验法，以出膏率、粉防己碱和防己诺林碱为评价指标，优选防己配方颗粒的提取工艺参数，从而为其实际生产提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪(四元泵自动进样系统)，Waters 2998二极管阵列检测器，Empower化学工作站(美国沃特世公司)；Milli-Q超纯水设备(法国，Millipore公司)；BS224S电子天平(德国Sartorius公司，万分之一)，XR205SM-DR电子天平(瑞士Precisa公司,十万分之一)；DGX-9073鼓风干燥箱(上海福玛实验设备有限公司)。

1.2 试药

粉防己碱对照品(批号：110711-9103)、防己诺林碱(批号：110793-200003)，均购自中国食品药品检定研究院；防己(产地：安徽)，经广州中医药大学詹若挺研究员鉴定为防己科植物粉防己StephaniatetrandraS.Moore的干燥根。乙腈(Merk公司)为色谱纯，水为超纯水，甲醇等其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 出膏率的测定

取防己水提液，滤过，精密吸取滤液50 mL，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却1 h，迅速称重，按公式计算出膏率。

W1—蒸发皿恒重与干膏重之和，W2—蒸发皿恒重，M—药材质量，V1—样品溶液总体积，V2—量取的药液体积。

2.2 粉防己碱、防己诺林碱的含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 用Inertsil ODS-3(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-甲醇-水-冰醋酸(40∶30∶30∶1)(每100 mL含十二烷基磺酸钠0.41 g)为流动相A，乙腈为流动相B，以A-B(85∶15)等度洗脱；检测波长为280 nm，柱温为30 ℃。理论板数按粉防己碱峰计算应不低于4 000。

2.2.2 对照品溶液的制备和线性关系 取粉防己碱对照品、防己诺林碱对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1 mL含粉防己碱0.1 mg、含防己诺林碱0.05 mg的对照品溶液，即得。标准曲线方程：粉防己碱Y=3.555×105X+2.269×104，r=0.999 2；防己诺林碱Y=4.469×105X+2.117×104，r=0.999 6；结果表明粉防己碱和防己诺林碱分别在0.531～6.372 μg，0.263～3.151 μg呈良好的线性关系。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密量取防己水提液25 mL，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取3 次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，挥干，残渣加甲醇溶解，并转移至5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜滤过，即得。

2.2.4 测定方法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定(见图1)，以外标一点法分别计算粉防己碱和防己诺林碱的含量。

1.防己诺林碱，2.粉防己碱A.防己诺林碱 B.供试品 C.粉防己碱图1 防己供试品及对照品HPLC图

2.3 正交试验设计

经预试验，根据影响提取的主要因素，固定浸泡时间为0.5 h，选择加水量、提取次数和提取时间作为考察因素，以出膏率、粉防己碱和防己诺林碱为评价指标，按L9(34)表进行正交试验。考察因素和水平见表1，试验设计与结果见表2。

表1 正交试验因素水平表

表2 正交试验设计与结果

注：综合评价计算方法：在正交设计的9组试验中，以各评价指标的最高得率试验组值为100%，其余试验组的结果相应折算为其最高值的百分比，再以出膏率、粉防己碱含量和防己诺林碱含量权重分别占40%、30%和30%的比例进行相加而得。

2.4 数据处理与分析

根据正交设计试验结果，对各评价指标的影响因素进行直观分析(见表2)和方差分析(见表3～5)，结果可见以出膏率、粉防己碱含量和防己诺林碱含量为评价指标，加水量、提取次数和提取时间影响均无统计学意义，其中分别筛选得到以出膏率为考察指标的最佳工艺为A2B3C3，粉防己碱含量的最佳工艺为A2B2C3，防己诺林碱含量的最佳工艺为A2B2C1；此外，根据3个评价指标试验结果，进行综合评价，经对综合评价结果进行直观分析(见表2)和方差分析(见表6)，结果可见加水量、提取次数和提取时间对综合评价影响均无统计学意义，综合评价的最佳工艺为A2B2C3，综合考虑上述各指标的筛选结果，最终选择最优工艺为A2B2C3，即第1次加8倍量水，浸泡0.5 h，煎煮1.5 h，第2次加6倍量水，煎煮1.5 h。

表3 出膏率方差分析

表4 粉防己碱含量方差分析

表5 防己诺林碱含量方差分析

表6 综合评价方差分析

2.5 验证实验

取防己饮片500 g，平行3份，按最优工艺条件进行验证实验，结果见表7。结果表明正交试验的最优工艺的放大验证实验与最优工艺结果差异不大。

表7 验证实验结果 /%

3 讨论

中药配方颗粒是一种遵循中医学基本理论，运用现代制药工艺，将单味中药饮片经过加工煎煮、过滤浓缩、喷雾干燥等程序，使之成为中医临床上可随机组方，即冲即饮的颗粒剂型[6]。临床要求其要具有与原药相同的功效[7]，因此，研究中药配方颗粒的最优提取条件有现实的必要性。粉防己碱和防己诺林碱是防己的主要活性成分，也是防己在《中国药典》2010年版中的含量测定控制指标成分。因此，选取出膏率、粉防几碱含量和防几诺林碱含量作为优选防己配方颗粒最优提取工艺的评价指标，具有一定代表性和合理性。

参照传统煎煮法，中药饮片一般煎煮2次，为提高中药的利用率，本研究在正交试验中设计了提取次数为1次、2次和3次；传统煎煮的第1次加水量为轻轻按住饮片至加入的水面高出药物2～3 cm的量，因此正交试验提取3次的加水量水平设计为6倍、4倍、4倍，8倍、6倍、6倍和10倍、8倍、8倍；提取时间则选择了0.5，1.0，1.5 h。正交试验结果的方差分析表明加水量、提取次数和提取时间3个因素对出膏率、粉防几碱含量和防几诺林碱含量3个评价指标均无显著性影响，最后综合考虑确定了防己配方颗粒的最优提取工艺参数为第1次加8倍量水，浸泡0.5 h，煎煮1.5 h，第2次加6倍量水，煎煮1.5 h，合并两次滤液。最后经放大实验验证，结果进一步表明优选的工艺合理、稳定，重现性好，可为防己配方颗粒的规范化生产提供参考依据。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：139.

[2] 南京中医药大学.中药大辞典[M].上册.上海：上海科学技术出版社,2006:1367.

[3] 葛长艳.粉防己、广防己的鉴别与临床应用[J].中国中医药现代远程教育,2011,9(1)：83.

[4] 李行诺,闫海霞,沙娜,等.粉防己生物碱化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报,2009,26(6)：430-433.

[5] 董红丽.中药配方颗粒和中药汤剂的比较[J].现代诊断与治疗,2012,23(7)：911-912.

[6] 陈坤全,陈益强.中药饮片颗粒剂和中药汤剂的比较[J].河北医药,2003,25(10)：775.

[7] 国家药品监督管理局.中药配方颗粒管理暂行规定[S].2001.

OptimizationofExtractionTechnologyofStephaniatetradraS.MooreDispensingGranulesbyOrthogonalExperiment

CHEN Juan,LIANG Xiao-yin,LIN Da-du,YAN Ping*,LIN Wen-hua,ZHAN Ruo-ting,CHEN Wei-wen

(ResearchCenterofChineseHerbalResourceScienceandEngineering,GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine,KeyLaboratoryofChineseMedicinalResourcefromLingnan,MinistryofEducation，Guangzhou510006，China)

Objective： To optimize the extraction process ofStephaniatetradraS.Moore dispensing granules.Methods： The extraction process of the dispensing granules was optimized through orthogonal experiment while the yield of dry extracts,the content of tetrandrine and fangchinoline,and influences of solvent dosage,extraction time and extraction times were studies.Results: The optimized extraction conditions ofStephaniatetradraS.Moore dispensing granules:the material was added 8 times amount of water,soaked for 0.5 h and extracted for 1.5 h at the first time,and for the second time,6 times amount of water were added,extracted for 1.5 h.Conclusion: The optimum extraction process is stable and feasible for the standardized production technology ofStephaniatetradraS.Moore dispensing granules.

StephaniatetradraS.Moore; Dispensing granules; Extraction process; Orthogonal experiment; Tetrandrine; Fangchinoline

2013-01-23)

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中央财政支持地方高校发展专项——南药可持续利用研究与综合开发利用(粤财教[2010]358号)

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严萍，Tel：(020)39358331，E-mail：ycyyp22@163.com