苦参中黄酮类成分薄层色谱鉴别研究△

马鸿雁，朱雅玲，杜憬生，李娟，杨全*

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006；2.广东省中医院，广东 广州 510120)

苦参中黄酮类成分薄层色谱鉴别研究△

马鸿雁1，朱雅玲1，杜憬生2，李娟2，杨全1*

(1.广东药学院 中药学院，广东 广州 510006；2.广东省中医院，广东 广州 510120)

目的：研究苦参的薄层色谱鉴别特征，建立苦参薄层色谱鉴别的专属性方法。方法：采用乙酸乙酯为提取溶剂，超声处理样品，硅胶G板分离鉴别苦参中黄酮类成分。结果：薄层色谱检出苦参酮、苦参醇Ⅰ、三叶豆紫檀苷、高丽槐素和槐属二氢黄酮G，色谱斑点清晰，能有效提供苦参的鉴别特征。结论：方法可行，重复性好，专属性强，为完善苦参薄层鉴别方法提供了实验资料和科学依据。

苦参；黄酮；薄层色谱

中药苦参为豆科植物苦参SophoraflavescensAit.的干燥根，具清热燥湿，杀虫，利尿的功能。目前2010版《中国药典》对于苦参质量标准的记载，是以苦参碱、氧化苦参碱作为定性定量指标[1]。然而这两种生物碱并非苦参独有，同属药材山豆根也含有该成分。山豆根具清热解毒、消肿利咽功效，与苦参明显不同，但《中国药典》标准中这两种中药均以两种生物碱作为定性和定量指标，缺乏专属性[2]。苦参中含有的黄酮成分主要是以苦参酮为代表的异戊烯基二氢黄酮，这类成分具有抗菌、抗肿瘤、抗磷酯酶活性、抗心律失常等多种生物活性，且具有很明显的化学分类学特征[3-9]。作者旨在研究苦参中黄酮类成分的薄层色谱分析方法，为苦参建立专属性强的定性鉴别方法，为其质量的全面评价提供参考和依据。

1 仪器与试药

AY-120型精密电子天平(日本岛津)；KQ-250DB数控超声波清洗器(250W，40kHz，昆山市超声仪器有限公司)；UV-1800型紫外分析仪(日本岛津)；薄层层析硅胶(青岛海洋化工有限公司)；手动铺板器；双槽展开缸；定量毛细管。

对照品均为自制，经检测纯度在95%以上；其他试剂均为分析纯。苦参购自广州市各药店(1.采芝林药店，2.明月康桥药店，3.宽正堂药店，4.济安堂药店，5.济方堂药店)，经广东药学院滕希峰博士鉴定为豆科植物苦参SophoraflavescensAit.的干燥根。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液和对照品溶液的制备

取药材粉末2.0 g(过40目筛)，加乙酸乙酯60 mL，超声提取30 min，滤过，残渣加乙酸乙酯60 mL继续超声30 min，滤过，合并滤液，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参酮、苦参醇Ⅰ、三叶豆紫檀苷、高丽槐素和槐属二氢黄酮G对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

2.2 薄层色谱鉴别

照薄层色谱法，吸取供试品溶液和对照品溶液各4 μL，分别点于同一自制硅胶薄层板(厚500 μm，新鲜制备，105 ℃活化1 h)上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-甲醇(5∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光(365 nm)下检视。再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下和紫外光(365 nm)下检视，见图1。

3 耐用性考察

3.1 不同薄层板的比较

选用自制硅胶G板和Merck硅胶G预制板，分别按拟定的试验方法试验。结果表明，两种板都可以达到较好的分离效果，见图2。

1～5.苦参 S.混合对照品(从上而下依次为高丽槐素、槐属二氢黄酮G、苦参酮、苦参醇I及三叶豆紫檀苷)A.365 nm紫外光下 B.硫酸显色后日光下 C.硫酸显色后365nm紫外光下图1 苦参黄酮类成分TLC图

1-6为苦参样品 S.对照品 A.预制板 B.自制板图2 不同板比较TLC图

3.2 不同湿度的比较

取点样后自制板，分别在32%，58%，88%的湿度中展开，结果表明该方法对不同湿度的适应性较好。

3.3 不同温度的比较

取点样后的自制板，分别在4 ℃和28 ℃的环境下进行展开，结果表明该方法对不同温度的适应性较好。

3.4 点样量的考察

照2.2方法，分别吸取2，4，6，8 μL供试品溶液和对照品溶液点样，展开。结果表明，样品和对照品的点样量在4 μL时分离效果好，斑点清晰。

4 讨论

在供试品溶液的制备中，本研究考察了不同溶剂(乙酸乙酯、80%乙醇、甲醇)超声提取方法和不同前处理方法(萃取法、硅胶柱层析法、大孔树脂法)，结果发现乙酸乙酯超声提取法对苦参黄酮类成分提取效率最高，杂质斑点少，分离度好，可直接进行点样，避免了复杂的前处理步骤，因此综合考虑选用该方法。在展开系统的选择上，比较了3种展开系统：三氯甲烷-甲醇，石油醚-丙酮，石油醚-乙酸乙酯-甲醇。苦参酮和苦参醇Ⅰ2种化合物的分离较困难，结果表明石油醚-乙酸乙酯-甲醇(5∶5∶1)得到的斑点清晰，分离度佳，故采用此展开条件。

另外，还对多种不同的显色方法进行了考察，结果发现苦参酮、苦参醇Ⅰ和槐属二氢黄酮G这3种化合物在紫外灯(365 nm)下检视和10%硫酸乙醇加热显色后均可见到清晰的斑点，而三叶豆紫檀苷和高丽槐素在10%硫酸乙醇加热后置于365 nm下检视斑点最清晰。

以苦参酮为代表的异戊烯基二氢黄酮是苦参中非常有价值的一类成分。作者采用薄层色谱的方法建立了苦参中该类成分的鉴别方法，并对其中主要斑点用对照品进行鉴定。本研究后续将此薄层方法用于苦参和近缘种山豆根的成分比较，发现两种药材的黄酮类成分差异很大，可用于两者鉴别。本法操作简便，重复性强，对于今后苦参和相关制剂的质量标准提高具有一定的参考价值。

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：188.

[2] 丁佩兰.山豆根和苦参化学成分的比较研究[D].上海：复旦大学，2004.

[3] 顾关云，肖年生，蒋昱.苦参的化学成分、生理活性和药理作用[J].现代药物与临床，2009，24(5)：265-271.

[4] Han J，Sun M，Cui Y，el al.Kushen flavonoids induce apotosis in tumor cells by inhibition of NF-kappaB activation and multiple receptor tyrosine kinase activities[J].phytother Res，2007，21(3)：262-268.

[5] Berghe W V，De Naeyer A，Dijsselbloem N，et al.Attenuation of ERK/RSK2-driven NF-kappaB gene expression and cancer cell proliferation by kuarinone，a lavandulyl flanone isolated fromSophoraflavescensAit.Roots[J].Endocr Metab Immune Disorder Drug Targets，2011，11(3)：247-261.

[6] Oh I，Yang W Y，Chung S C，et al.In vitro sortase A inhibitory and antimicrobial activity of flavonoids isolated from the roots ofSophoraflavescen[J].Arch Pharm Res，2011，34(2)：217-222.

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[8] Cha J D，Moon S E，Kim J Y，et al.Antibacterial activity of sophoraflavanone G isolated from the roots ofSophoraflavescensagainst methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J].Phytother Res，2009，23(9)：1326-1331.

[9] Cha J D，Jeong M R，Jeong S I，et al.Antibacterial activity of Sophoraflavanone G isolated from the Roots ofSophoraflavescens[J].J Microbiol Biotechnol，2007，17(5)：858-864.

IdentificationofFlavonoidsinSophoraflavescensbyThin-layerChromatography

MA Hong-yan1,ZHU Ya-ling1,DU Jing-sheng2,Li Juan2,YANG Quan1*

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China；2.DepartmentofPharmacy,TheSecondAffiliatedHospitalofGuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510120,China)

Objective： To develop an exclusive identifying method forSophoraflavescensby thin-layer chromatography(TLC).Methods： The experiments were performed on the plates of silica gel G by using general developing agents.Results: The constituents of flavonoids(trifolirhizin,maackiain,kushenol I,kurarinone,sophoraflavanone G )inSophoraflavescenswere separated and identified respectively.Conclusion: The method is practicable repeatable,and exclusive,could be adopted as a standard for the quality control ofSophoraflavescens.

Sophoraflavescens; Flavonoids; TLC

2013-02-26)

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广东省高校优秀青年创新人才培养计划项目(LYM11079)

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杨全，副教授，E-mail：yangquan7208@vip.163.com