紫外分光光度法测定巴豆中总生物碱的含量△

金锋，张振凌*，任玉珍，陈彦琳，杜杰，周林，白宗利，梁焕

(1.河南中医学院，河南 郑州 450008；2.中国药材公司，北京 102600)

紫外分光光度法测定巴豆中总生物碱的含量△

金锋1，张振凌1*，任玉珍2*，陈彦琳2，杜杰2，周林2，白宗利2，梁焕2

(1.河南中医学院，河南 郑州 450008；2.中国药材公司，北京 102600)

目的：建立紫外分光光度法测定巴豆中总生物碱含量的方法。方法：采用紫外分光光度法，以巴豆苷为对照，在292nm波长处进行含量测定。结果：巴豆苷在3.84～23.04μg·mL-1与吸光度呈良好的线性关系，回归方程Y＝0.036 5X-0.029 7，r＝0.999 9(n＝6)，平均加样回收率为101.38％，RSD＝1.21％。结论：本测定方法准确、简单、灵敏、快速、重现性好，可以作为控制巴豆及巴豆霜质量的方法与指标。

巴豆；总生物碱；含量测定；紫外分光光度法

巴豆为大戟科乔木植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果实，主产于四川、广西、云南、贵州等地，为较常用川产道地中药材。生巴豆味辛、性热，有大毒，归胃、大肠经，外用蚀疮，内服多制霜用，具有峻下积滞，逐水消肿，豁痰利咽的功能[1]。巴豆主要含有机酸及甘油酯类成分、生物碱类成分及植物蛋白类成分，其中，巴豆总生物碱的生理活性显著，有显著的抗癌作用[2-4]，对甲状腺癌、胃癌、肝癌等多种肿瘤都具有治疗作用[5]。田艳伟[6]发现巴豆水提液具有显著的诱导白血病细胞向正常方向分化的作用，甲醇提取物可以显著抑制HIV-1病毒的传染性[5]，说明巴豆生物碱多集中在亲水性部位，但目前文献尚未见报道巴豆生物碱的具体化学成分组成，因此有必要对总生物碱成分进行测定。虽然有文献报道了巴豆总生物碱的含量测定方法[7]，但我们此次建立的新方法，对总生物碱提取完全，精密度、重现性等较好，方法更加简便、快速。

1 仪器与试药

1.1 仪器

UV2802-pc紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)，Waters2695高效液相色谱仪，TB-215D型十万分之一天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，HH-4电热恒温水浴锅(江苏常州国华电器有限公司)，FW-100高速粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)，KQ2100DB超声波清洗器(浙江昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药

巴豆苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：11856-201001)；乙醚、硫酸、甲醇(北京化工厂)，均为分析纯；色谱级甲醇、乙腈(FisherScientific)，水为双蒸水。巴豆药材经北京市中医学校金世元教授鉴定为大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果实。巴豆药材来源及批号见表1。

表1 巴豆药材来源批次表

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取巴豆苷对照品适量，精密称定，加水配制成76.8μg·mL-1的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取巴豆种仁粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚50mL，加热回流3h，弃去乙醚液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入1％的硫酸溶液50mL，称定重量，超声处理(功率300 W，频率24 kHz)30min，放冷，再称定重量，用1％的硫酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液1mL加1％的硫酸溶液定容至10mL，摇匀，备用[1]。

2.3 测定波长的选择

分别取对照品溶液和供试品溶液，以相应试剂为空白，在200～400nm波长范围内进行扫描，见图1和图2。结果显示两者都在292nm附近有最大吸收，故选择292nm为测定波长。

图1 巴豆生物碱部位紫外扫描图

图2 巴豆苷对照品紫外扫描图

2.4 线性关系的考察

精密量取巴豆苷对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL移入10mL容量瓶中，加水至刻度。以水为空白在292nm下测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y＝0.036 5X-0.029 7，r＝0.999 9(n＝6)。结果表明，样品液在 3.84～23.04μg·mL-1呈线性关系。

2.5 精密度试验

取供同一供试品溶液，于292nm下重复测定6次，其吸光度的RSD＝0.21％，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按上述方法在1，2，3，4，5，6h时分别测定吸光度，其RSD＝0.29％，表明供试品溶液在6h内稳定。

2.7 重复性试验

精密称取同一样品6份，按2.3制备成供试品溶液，在292nm下测定吸光度，计算含量，其RSD＝0.78％，表明重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的同一样品粉末6份，每份0.15g，精密称定，分别精密加入适量巴豆苷对照品，按2.3制备供试品溶液，按上述方法测定吸光度，计算加样回收率，结果见表2。

表2 巴豆苷加样回收率试验

2.9 样品含量测定

按照《中国药典》2010版一部“巴豆”项下巴豆苷测定方法测定药材中巴豆苷的含量[1]，按照2.3项下制备供试品溶液，并依照建立的方法测定3个不同来源的巴豆药材的总生物碱含量，结果见表3。

表3 巴豆中巴豆苷与总生物碱含量测定结果(n＝2)/％

3 讨论

在供试品溶液的制备过程中，考察了不同提取方法、提取溶剂、提取时间以及料液比对总生物碱含量的影响，发现用50mL的1％硫酸超声提取30min，可以将0.3g样品中总生物碱提取完全。

曾宝等[7]以自提的木兰花碱为对照采用酸性染料法测定巴豆中总生物碱含量，本课题组认为木兰花碱是毛茛科植物粗果唐松草的根茎中主要的活性物质，在花椒、淫羊藿等植物中均有发现，不是巴豆的特异性成分，该法提取的总生物碱含量最高仅为0.42％，但巴豆苷作为巴豆生物碱的1种，《中国药典》2010版规定其含量不低于0.80％[1]，虽然含量测定方法不同，但是单体含量不太可能高于有效部位的含量，推测是因为该方法采用40％的乙醇提取，部分水溶性较强的成分未提取完全所致。

本法以巴豆的指标性成分巴豆苷为对照，采用紫外分光光度法测定巴豆中总生物碱的含量，供试品前处理方法与《中国药典》巴豆苷的提取方法相似，容易掌握，且能将生物碱提取完全，能够简单、快速、准确地测定巴豆总生物碱的含量，可以作为控制巴豆及巴豆霜质量的方法。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：74.

[2]王明艳，瞿融，许冬青.巴豆生物碱诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的研究[J].南京中医药大学学报，2010，26(9)：368-369.

[3]陈武，陈鹏英，刘鹏，等.巴豆生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bax，Bcl-2蛋白表达的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，11(6)：17.

[4]赵小迎，陈俊，蔡平生.巴豆生物碱抑制卵巢癌细胞增殖和诱导其凋亡的实验研究[J].中国全科医学，2010，13(21)：13-20.

[5]刘秀德，隋在云.巴豆总生物碱对癌细胞质膜流动性及胞浆基质结构的影响[J].山东中医药大学学报，1995，14(3)：192-194.

[6]田艳伟.巴豆水提取液对HL-60细胞的诱导分化作用[J].山西医药杂志，2002，31(3)：265.

[7]曾宝，李生梅，古俊辉，等.酸性染料法测定巴豆中总生物碱的含量[J].广东药学院学报，2012，28(2)：170-172.

Determ ination of Total A lkaloids in Crotonis Fructus by Ultraviolet Spectr-ophometry

JIN Feng1，ZHANG Zhen-ling1，REN Yu-ren2，CHEN Yan-lin2，DU jie2，ZHOU Lin2，BAIZong-li2，LIANG Huan2
(1.Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China；2.China National Corp.of Traditional＆Herbal Medicine，Beijing 102600，China)

Objective：To establish a simple method for determination Alkaloids contents from Crotonis Fructus.M ethods：Adopting Crotonoside as reference，alkaloids in Crotonis Fructus were detected by ultraviolet spectrophotometry at292nm.Results：The liner arrange of crotonoside was 3.84～23.84μg·mL-1(Y＝0.036 5X-0.029 7，r＝0.999 9).The mean recovery of crotonoside was 101.38％(RSD＝1.21％).Conclusion：The method is accurate，simple，quick，sensitive and reproducible.

Crotonis Fructus；Total Alkaloids；Content determination；Ultraviolet spectr-ophometry

2012-07-10)

2011年中医药行业科研专项——附子等中药炮制方法传承与规范化应用研究(201107008)

*[通讯作者]张振凌，Tel：(0371)65680970，E-mail：zhangzl7658＠163.com；任玉珍，E-mail：renjl2008＠163.com