血清GPC3与AFP的检测对原发性肝癌诊断意义比较

许 方，李晓兰，吴小利

（1.大连医科大学附属二院 检验科，辽宁 大连116027；2.温州医学院研究生院，浙江 温州325035）

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是发病率最高的恶性肿瘤之一，其发病率位于全球第4位，中国第2位［1］，也是我国癌症导致死亡的主要原因。由于大多数患者被确诊时已是中晚期，因此HCC的早期诊断非常重要。AFP是目前最常用的肿瘤标记物，但仍存在在分化程度好的HCC或退行发育的HCC可能仅有轻度或没有升高，对于肿瘤直径小于1cm的微小HCC的检出率仍不高等问题。

GPC3是一种细胞膜表面的硫酸乙酰糖蛋白，它在绝大多数肝癌患者中表达，而在正常肝组织及良性肝脏病变中不表达或仅有微弱表达［2，3］。国外最新研究表明，GPC3可以作为一种新的肝癌肿瘤标志物用于临床研究。本研究通过对肝癌及肝硬化患者GPC3及AFP的检测，探讨血清GPC3对肝癌患者的诊断价值。

1 材料与方法

1.1 材料

选择2010－2－1至2012－11－25到大连医科大学附属二院就诊的肝癌患者（符合 年中国抗癌协会肝癌专业委员会指定的诊断标准）120例（其中男77例，年龄25－93岁；女43例，年龄23－81岁），肝硬化患者（符合2000年病毒性肝炎防治方案肝硬化的临床诊断标准）32例（其中男19例，年龄33－79岁；女13例，年龄28－81岁）及正常对照组25例（其中男16例，年龄23－79；女9例，年龄38－79岁）。正常对照为排除各型肝炎及其他任何肝功能异常的健康体检者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集、处理 采集静脉血标本，分离血清，－20℃冷冻保存。

1.2.2 检测 采用电化学发光法检测标本AFP值，仪器为Elecsys2010电化学发光分析仪，试剂购自罗氏公司。ELISA方法测定标本GPC3值，试剂购自Uscn公司，严格按照试剂盒说明书操作，酶标检测仪型号为美国ElX800NB。

1.2.3 统计学分析 采用SPSS17.0软件进行统计学分析，均值用±s表示，组间比较采用t检验和方差分析，P＜0.05表明差异有统计学意义。GPC3和AFP的相关性采用相关性分析。

2 结果

2.1 不同组别血清GPC3水平比较（表1）

肝癌患者血清中 GPC3值（22.014±36.930 ng/ml）高于肝硬化患者（8.590±8.171ng/ml）及正常对照（0.455±0.244ng/ml），HCC组 GPC3值与肝硬化组及正常对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。

表1 不同组别血清GPC3水平（±s）

表1 不同组别血清GPC3水平（±s）

＊P＜0.01，AFP与GPC3两项数据HCC组与肝硬化组相比差异存在显著性；＃P＜0.01，AFP与GPC3两项数据HCC组与正常对照组相比差异存在显著性；经相关性分析，GPC3与AFP二者的相关系数为－0.13，P值为0.15，P＞0.05，二者之间没有相关性。

组别 例数 AFP（IU/ml） GPC3（ng/ml）HCC组 120 385.39±302.90＊＃ 22.014±36.930＊＃25 2.21±2.18 0.455±0.244肝硬化组 32 48.65±38.31 8.590±8.171正常对照组

2.2 GPC3、AFP单独检测和二者联合检测诊断HCC的敏感度和特异度比较（表2）

统计120例HCC组及32例肝硬化组，GPC3对肝癌诊断的敏感性略高于AFP，二者之间差异不存在显著性（P＞0.05）；特异性则低于AFP，二者之间差异不存在显著性（P＞0.05）；GPC3联合AFP检测HCC敏感性提高。

表2 GPC3、AFP和两者联合诊断HCC的敏感性和特异性比较

2.3 HCC组中GPC3在AFP阳性与阴性中的检测结果（表3）

HCC组中，100例AFP阳性中有88例GPC3阳性，阳性率88.00%，20例AFP阴性中有15例GPC3阳性，阳性率75.00%。

表3 HCC组中GPC3在AFP阳性与阴性中的检测结果

3 讨论

1996年，Pilia等［4］发现一例过度生长综合征的者存在x：1转位，通过STSS－PCR得到分离克隆了一个cDNA，属硫酸类肝素糖蛋白聚糖家族家族，命名为磷脂酰肌醇蛋白聚糖－3（Glypican－3，GPC3）。GPC3蛋白作为一种膜性间质蛋白，其表达方式与生长因子（如成纤维细胞生长因子等）及其受体表达方式一致，能通过一系列细胞表面受体传导的信号来调节细胞形态和各种细胞行为如黏附、增殖、迁移、存活和分化。有研究证实其在肝细胞癌中的表达率为80%－100%，并且不依赖于肝细胞癌的分化和肿瘤大小，在肝腺瘤中无表达［5］。Yamauchi等［6］研究表明GPC3蛋白在肝癌组织中的高表达同基因水平相一致，在非肝癌组织中同样没有表达或表达量极低。Wang［7］等发现，约48%的高级别不典型增生结节或早期肝细胞癌GPC3阳性表达，3%的低级别不典型增生或良性结节阳性表达。

本实验分析了25例正常人血清、32例肝硬化病人血清和120例原发性肝癌病人血清中的GPC3含量。结果表明：HCC组的GPC3明显高于肝硬化组及正常对照组，说明GPC3对肝癌的诊断有一定意义。这一结果与许多国外学者的报道相吻合，如Hsu等［8］报道在154例肝癌组织中有74.8%检测到GPC3mRNA，而在正常肝和肝炎组织中只有3.2% 能检测得到。Hippo等［9］在肝癌病人血清中特异性地检测到可溶GPC3（sGPC3），其表达量明显高于肝硬化病人及健康对照组，且方法的敏感性优于AFP。Nakatsura等［10，11］应用酶联免疫吸附方法发现40%－53%肝癌患者血清GPC3阳性，而在20例肝炎肝硬化患者血清中仅1例阳性，正常人血清中未检测到。

在我们的研究中同时发现肝硬化组中有几例GPC3＞20ng/ml，对此我们进行了病例追踪，追踪到1例患者属于在采样时诊断为肝硬化但后来确诊为肝癌，提示检测GPC3有助于肝癌的早期发现，对肝癌的早期诊断具有一定意义，值得引起临床的高度重视。

本研究也同时进行了AFP的检测，二者单独检测GPC3敏感性及特异性分别为85.83%、50%；AFP敏感性及特异性分别为83.33%、62.50%。即GPC3对肝癌的诊断敏感性要高于AFP，而特异性低于AFP，与一些学者的研究进行比较，发现我们的特异度偏低，而敏感度的结果与其相仿，如Coston等［12］检测肝癌、肝腺癌、淋巴结增生患者和非肝癌的癌症患者的GPC3的表达情况，发现在107例肝癌中有94例（84%）能够得到GPC3的阳性染色。GPC3对原发性肝癌的灵敏度和特异性分别达到88%和97%。灵敏度方面的一致性充分证明了GPC3这一指标对肝癌诊断的价值。特异性方面的不同分析原因可能有以下几点：首先因为我们采用的方法不同，多数学者采用PCR、免疫组化、病理技术及动物实验方法，而本实验采用ELISA方法；其次是ELISA试剂盒厂家不同，其检测限、敏感性有所不同；另外在病例选取方面也存在差异，本研究在病例选取时多倾向于AFP较低或正常的患者，这些都有可能导致研究的结果的差异。

GPC3与AFP联合检测HCC的敏感性为95.83%，特异性为46.88%，敏感性有所提高，但在二者的相关分析中P＞0.05，显示GPC3和AFP二者并无相关性，这也从另一个方面显示出联合检测的价值，且与多数学者的研究结果是一致的。Tangkijvanich等［14］用免疫吸附测定血清GPC3，结果发现53%的肝癌患者血清GPC3的水平在35.5－7826.6 ng/l，发现GPC3和 AFP的阳性率水平不相关。apurro和 Filmus［15、16］分别比较分析肝癌病人血清中GPC3和AFP的表达，结果显示在同一病人血清中两者没有相关性，认为两者联合检测能够显著提高肝癌的早期诊断。

综上我们认为，GPC3在肝癌的早期筛查诊断方面具有一定的临床意义，而联合检测GPC3和AFP可提高肝癌诊断的敏感性，防止漏检。

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