肺癌患者CD14的表达及检测分析

吕 敏， 吴晓柳， 沈宗丽

肺癌是临床上恶性肿瘤之一，具有较大的危害，临床对于肺癌患者的免疫检测及治疗过程中的病情判断尤为重要。人体单核巨噬细胞在机体抗肿瘤免疫检测中的作用较大，而其标记物脂多糖受体CD14与癌细胞迁移、浸润和血管形成有很大的关联，不同时期患者的CD14表达可能具有一定差异，患者术前及术中CD14检验结果在一定程度上可以反映出患者的治疗效果［1］。本研究通过检测肺癌患者术前及术中CD14的表达，对其结果进行分析探讨。

1 资料与方法

1.1 研究对象 样本选自我院2011年1月至2012年4月收治的41例肺癌患者，均通过病理确诊为肺癌，其中男25例，女16例;年龄34～72岁，平均年龄47岁。肺癌发生部位为:左肺15例，右肺19例，和双侧肺7例。稳定期17例，进展期24例。所有患者均行手术治疗，分别于手术前和手术中进行血液取样，检测CD14的表达，观察CD14%、CD14平均荧光强度(MFI)、中性粒细胞率(粒%)、淋巴细胞率(淋%)和HLA-DR阳性的淋巴细胞率(DR+/淋)在手术前后的差异。

1.2 方法 (1)试剂和仪器:郑州比尔化工原料有限公司生产的乙二胺四乙酸水，山东奥塞特医疗器械有限公司生产的EDTA-K2真空抗凝管，磷酸盐缓冲液，上海西门子医学诊断产品有限公司出产的外围全血细胞表面的染色试剂:抗CD14，红细胞裂解液，异硫氰酸荧光素，藻红蛋白，美国贝克曼库尔特有限公司生产的EPICS流式细胞仪。(2)检验方法:无菌条件下采集41例患者术前和术中的外周静脉血2 mL，置入到EDTA-K2真空抗凝管当中，将50 μL抗凝血样本加入到流式测定管当中，加入抗人CD14，染色标记异硫氰酸荧光素(FITC)和 Anti-Phospho-TLK1(Ser695)荧光素PE，20 min后使用溶血素裂解红细胞10 min，后以1 500 r/min离心7 min，除去上清液，加入PBS 5 mL洗2次后除去上清，再加入PBS 3 mL。使用流式细胞仪FACS Aria型进行单数检测，FITC发出绿色荧光，PE红色，以平均荧光强度的集合均属表达含量。选择Cell-Quest软件，取单核细胞群，CD14标记外周血单核细胞，CD14(FITC)与侧向光散射(SSC)圈出单核细胞，每份样本获取104个CD14+单核细胞，去除死亡细胞，记录外周血单核细胞的物理模型函数(Geophysical Model Function，GMF)，以百分比计数。完成数据收集后，对两组数据指标进行对比分析，观察患者不同时期内数据指标的差异情况。

1.3 统计学分析 研究中所有数据用SPSS 18.0统计软件进行处理，数据使用x±s表示，检验检测数据使用Bonferroni法进行检验，以P＜0.05为具有统计学差异。

2 结果

41例肺癌患者手术过程顺利，术中无死亡病例。术前与术中CD14的表达无统计学差异(P＞0.05)，但术中 CD14MFI高于术前(P ＜0.05);粒%高于术前(P＜0.01);淋%、DR+/淋高于术前(均P＜0.05)。具体数据见表1。

表1 41例肺癌术中与术前CD14指标的比较

3 讨论

肺癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，具有较大危害。临床检验过程中，确定患者病情进展的检测方法都较为复杂，难以一次确定病情，且在治疗期间较难掌握治疗效果，长期治疗会给患者带来较大的经济负担。对患者病情进行准确有效的判断可以在很大程度上缩短患者治疗方案的制定时间，也可以明确得知患者病情的进展程度［2-3］。

肺癌形成的主要机制是肿瘤细胞抑制正常机体细胞生长，并不断扩散，侵蚀人体。在此过程中人体单核巨噬细胞在机体抗肿瘤免疫检测中的作用很大，而其标记物脂多糖受体(CD14)与癌细胞迁移、浸润和血管形成有很大的关联［4］。然而，由于CD14的表达非常不稳定，因此在临床上很少通过检测CD14来对患者病情进行判断或是作为观察的指标。但是近年来，外周血单核细胞CD14在肿瘤检测过程中已经得到了部分应用，如乳腺癌等［5］。由于机体免疫功能紊乱，肿瘤患者存在免疫功能抑制，检测CD14可以根据单核巨噬细胞处理抗原后向淋巴细胞呈递抗原能力，反应出机体的免疫能力而作为免疫功能检查的方法。

本研究选择41例可手术肺癌患者作为研究对象，检测患者术前、术中外周静脉血CD14指标发现，CD14%在术中与术前之间差异无统计学意义，而CD14MFI、粒%、淋%和DR+/淋的检测值均明显高于术前(均P＜0.05)，推测可能由下述两个原因造成:一是由于疾病的发展导致患者免疫状态的变化所致，另一可能是手术相关的因素例如麻醉等造成患者免疫细胞系统的变化所致，但究竟是什么原因造成这些变化，以及造成这些变化的临床意义如何，还有待进一步的研究。

［1］ Zanoni I，Ostuni R，Marek LR，et al.CD14 controls the LPS-induced endocytosis of Toll-like receptor 4［J］.Cell，2011，147(4):868-880.

［2］ 刘怡伶，赵应斌，丁燕玲.肺癌患者80例6项肿瘤标志物检查［J］.临床和实验医学杂志，2011，7(14):78-79.

［3］ 潘晶晶，冯继锋.非小细胞肺癌EGFR激酶活性的小分子酪氨酸激酶抑制剂耐药机制及耐药逆转方法的研究［J］.中国肿瘤外科杂志，2012，4(3):164-168.

［4］ 齐曼，夏成青，李文雄.外周血单核细胞膜CD14表达预测脓毒症患者预后的研究［J］.中华临床医师杂志，2012，6(14):1993-1997.

［5］ Lobba AR，Forni MF，Carreira AC，et al.Differential expression of CD90 and CD14 stem cell markers in malignant breast cancer cell lines［J］.Cytometry A，2012，81(12):1084-1091.