不同厂家猪瘟细胞苗免疫效果的评估

黄学斌 刘庭科

（广东温氏食品集团有限公司研究院，广东省浮市 527400）

目前，多数猪场对接种猪瘟疫苗十分重视，但猪瘟免疫失败的临床现象还是比较普遍。具体表现为抗体水平参差不齐、离散度高、总体抗体滴度偏低、免疫猪群时有非典型猪瘟疫情发生，这说明猪瘟疫苗免疫没有产生有效的保护作用。据何启盖教授对多个省市44个规模化猪场进行猪瘟抗体水平监测的结果 （猪群的免疫合格率仅有55.72%，母猪、育肥猪和仔猪的免疫合格率分别为67%、38%和22%）表明各猪场猪瘟疫苗的免疫质量参差不齐，合格率偏低。猪瘟疫苗免疫是猪场防制猪瘟的重要途径，疫苗质量的监控不到位和盲目性选择是免疫失败的重要原因之一。目前市场上猪瘟疫苗种类繁多，且夸大效果，质量不一，导致临床使用过程中，免疫效果差异显著。因此评价来自不同厂家疫苗的免疫效果，对猪瘟的防治具有重大意义。

1 试验材料

1.1 疫苗

试验所用的疫苗分别为：A厂、B厂、C厂的猪瘟活疫苗 （均为细胞源），每头份含细胞毒≥7 500个家兔感染量。

1.2 诊断试剂

猪瘟抗体诊断试剂盒 （IDEXX公司）。

1.3 试验动物

试验兔为新西兰SPF级长白兔，购自华南医科大学实验动物研究所，均为雌性，未免疫过任何疫苗，每只重约1.6～2.0 kg； 猪体试验于 2012 年 1～4 月在广东新兴某猪场进行，选择同期分娩的健康原种母猪所产的仔猪40头，试验期间按照猪场正常生产流程管理，所有仔猪所处试验条件和饲养管理条件相同。

2 试验方法

2.1 兔体试验

免疫安排：按照瓶签标示用生理盐水将每头份疫苗稀释7 500倍，各接种家兔2只 （即A厂疫苗接种试验兔1和2，B厂疫苗接种试验兔3和4，C厂疫苗接种试验兔5和6），每只兔耳静脉注射1 mL，兔7注射1 mL生理盐水作为对照。家兔接种后，每隔6小时测体温1次，连续测5天。接种疫苗后，兔的体温反应标准如下。定型热反应 （++）：潜伏期48～96小时，体温上升呈明显曲线，至少有3个温次超过常温1℃以上，并稽留18～36小时。轻热反应 （+）：潜伏期48～96小时，体温上升呈明显曲线，至少有2个温次超过常温0.5℃以上，并稽留12～36小时。可疑反应 （±）：潜伏期48～96小时，体温曲线起伏不定，稽留不到12小时；或潜伏期在24小时以上，不足48小时及超过96小时至120小时出现热反应。无反应 （-）：体温正常。如果两只兔均为定型热反应或一只为定型热另一只为轻热反应，说明疫苗合格，如果2只兔均为轻热反应，说明疫苗可疑。

2.2 仔猪免疫试验

无猪瘟中和抗体 （40～50日龄）保育猪40头，分为4组 （每组10头），即每种疫苗设1组和生理盐水空白对照组，共计4组；采用一次性免疫，疫苗组每头猪按1头份接种疫苗，对照组按1 mL/头接种生理盐水；分别在免疫前、免疫后15、30、45和60天采血。

猪瘟抗体的检测采用阻断ELISA方法，试验操作参照试剂盒说明进行，抗体滴度用阻断率表示，阻断率通过450 nm波长样本吸光度与阴性对照吸光度的比值。如果样品的阻断率大于或等于40%，该样本就可以判为阳性 （有猪瘟抗体存在）；如果样品的阻断率小于或等于30%，该样本就可以判为阴性（无猪瘟抗体存在），如果样品的阻断率在30%～40%之间，该样本就可以判为可疑。试验数据采用专门的软件分析。

3 结果与分析

3.1 兔体热反应结果

图1为兔免疫不同厂家的猪瘟疫苗后，不同时间的体温变化曲线。从图中可以看出，兔1、2、3、4体温上升呈明显曲线，在接种后48小时超过3温次超出对照组兔体温1℃以上，并稽留时间超过18小时。可见免疫A厂和B厂的猪瘟疫苗兔子的体温变化曲线均表现为定型热，说明这两个厂的疫苗合格。免疫C厂的猪瘟疫苗的兔5的体温与兔7相比无明显变化，表现为无反应，免疫C厂的猪瘟疫苗的兔6体温反应为轻热，说明C厂的疫苗质量不合格。

3.2 仔猪免疫结果

由于试验过程中部分仔猪不符合选用标准被淘汰以及采血过程中造成的操作误差，本研究仅对已经检测的结果进行分析，结果见表1。从表中可以看出，C厂的猪瘟疫苗免疫30天猪瘟抗体检测为阴性。A厂的疫苗在免疫后30天后抗体全部为阳性 （抗体100%大于40%）；B厂的猪瘟在免疫后15天后抗体全部为阳性，抗体离散度低于B厂最低，A厂次之，说明B厂疫苗免疫后群体抗体整齐度较好。

4 讨论

兔体热反应是筛选猪瘟疫苗的先决条件，也是第一步。从兔体热反应来看，A厂和B厂的疫苗在注射兔体后，兔体体温都有所升高，但程度不同，从总体的体温反应曲线来看，A厂和B厂的疫苗质量较好，C厂较差。进一步利用猪体试验对疫苗免疫效果进行评价，从猪体免疫前后离散度变化、免疫前后抗体阻断率大于40%的变化以及免疫前后抗体平均值变化来看，B厂的疫苗抗体产生的最快，群体的抗体整齐度最好，A厂的疫苗次之，C厂的疫苗免疫失败，可能是疫苗在保存和运输环节出现失误。可见B厂的疫苗值得在生产中推广应用。

图2 不同厂家的猪瘟疫苗兔体反应热图

表1 猪瘟抗体检测结果