反相高效液相色谱法测定麦味地黄丸中丹皮酚的含量

李金保 杨春媛

麦味地黄丸又名八仙长寿丸，曾用名为八味地黄丸，首见于明代医家龚廷贤所撰《寿世保元》。麦味地黄丸方药组成：在六味地黄丸基础上配伍麦冬、五味子，共八味药，即麦冬、五味子、熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓和泽泻。临床上麦味地黄丸主要应用于滋肾养肺。用于肺肾阴亏，潮热盗汗，咽干，眩晕耳鸣，腰膝酸软。

1 实验方法

1.1 仪器与试药 Waters2695型高效液相系统。丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号0708－9704，供含量测定用。吉林国药制药有限责任公司，060302、060303；吉林特研药业有限公司，水蜜丸060401、060402，大蜜丸051101；甲醇为优级纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

1.2 色谱条件 色谱柱：迪马C18色谱柱(DiamnosilTMC18，250 ×4.6 mm，5μm)；甲醇-水(70∶30)为流动相；检测波长为274nm。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3000。

1.3 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇制成每1 ml含20μg的溶液，即得。

1.4 供试品溶液的制备 取本品水蜜丸，研细，或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取约1.5 g，精称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，室温放置30 min，超声处理(功率300W，频率50kHz)30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2 方法学考察

2.1 系统适用性实验

2.1.1 色谱柱的选择及柱效的考察 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(70：30)为流动相；检测波长为274nm。采用迪马 C18(DiamnosilTM C18，250×4.6 mm，5μm)色谱柱测定，结果理论板数按丹皮峰计算为11000。

2.1.2 测定波长的选择 取丹皮酚对照品的甲醇溶液，经UV－2450紫外分光光度计230nm～320nm范围内扫描，丹皮酚在274nm波长处有最大吸收，故选择274nm为本实验的测定波长。

2.2 阴性对照实验 为进一步考察试验的合理性，取不含牡丹皮的阴性对照样品，依正文所述方法进行测定。结果阴性样品色谱在与丹皮酚峰相应的保留时间附近无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的。

2.3 标准曲线制备 精密称取丹皮酚对照品20.38 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5、10、15、20、25μl，分别注入液相色谱仪，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程，数据见下表1，结果表明丹皮酚在0.1019～0.5095μg范围内，呈线性关系，符合外标法定量测定的要求。

表1 标准曲线数据

2.4 精密度试验 取本品(批号051101)，照正文方法，连续进样5次，每次10μl，记录峰面积，结果见表2。

表2 精密度试验结果

2.5 重复性试验 取本品(批号051101)，照正文方法，独立测定5份，结果测得每丸中含丹皮酚(mg)分别为4.04、4.14、4.16、4.13、4.14，平均 4.1 mg/丸，RSD 为 1.2%。结果表明重复性较好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品(批号051101)溶液，每隔一定时间，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，结果见表3。

表3 稳定性试验结果

2.7 回收率试验 精密称取已知含量的本品细粉约0.75 g(批号：060303，每丸中含丹皮酚5.7 mg)6份做基底，分别精密加入丹皮酚对照品溶液(0.02006 mg/ml)25 ml，照正文方法进行测定，计算回收率，结果见表4。

表4 回收率试验结果

2.8 样品测定结果 依正文方法测定五批样品，结果见表5。

表5 五批样品中丹皮酚含量测定结果