增加7个STR基因位点在二联体亲子鉴定中的应用

王 旻，陈 玫，于卫建，孟庆丽

(大连市血液中心，辽宁大连 116001)

增加7个STR基因位点在二联体亲子鉴定中的应用

王 旻，陈 玫，于卫建，孟庆丽

(大连市血液中心，辽宁大连 116001)

目的 在二联体亲子鉴定出现位点完全匹配但累积亲权指数(PI)较低的情况下，增加检测位点。方法 选择STR_Typer_10_v1荧光标记复合扩增试剂盒，对47例累计亲权指数较低的二联体亲子鉴定增加D11S2368，D13S325，D18S1364，D22 -GATA198B05，D2S1772，D7S3048，D8S1132 这 7 个位点的检测。结果 通过增加7个STR基因位点的检测，有27例提高到99.974%以上，有14例增加到99.99%以上，增加STR检测没有观察到基因突变的现象。二联体检测的累计亲权指数有不同程度的增加，有8例从102以下提高到104以上。结论

增加检测位点后二联体的检测结果更准确，结论更可靠，司法鉴定人的执业风险大大降低。

STR;二联体;亲子鉴定

短串联重复序列(STR)是目前在亲权鉴定和个体识别中应用最广泛的长度多态性遗传标记，其长度多态性来源于重复单位拷贝数的个体差异。目前国内做亲子鉴定所用试剂盒(如identifiler、powerplex等)绝大多数是进口的，并不是针对中国汉族人群专门研制的，尤其是在二联体案件，会出现位点突变或累积亲权指数较低的情况，这样就会影响检验结果和鉴定结论。本研究选用了珠海科登的STR-typer10G试剂盒对二联体亲子概率低的案例增加检测位点以提高结论的可信程度。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

美国ABI公司3130型基因分析仪。STR_Typer_10_v1荧光标记复合扩增试剂盒(珠海科登公司，中国)，该试剂除 D12S391，D18S1364与常规用的Sinofiler试剂盒的位点重复外，增加了D11S2368，D13S325 D18S1364，D22 - GATA198B05，D2S1772，D7S3048，D8S1132这7个位点的检测。

1.2 标 本

选择2009年和2010年度在大连市血液中心用美国ABI公司Sinofiler试剂盒进行亲子鉴定检测的二联体标本47例。这些案例各基因座均符合遗传定律但累积亲权指数较低。

1.3 操作步骤

常 规 Chelex法 提 取 检 材 DNA［5］。应 用 珠 海STRtyper10G试剂盒，PCR同步扩增10个位点基因片段。扩增体系共10 μL，其中5×PCR混合液 2 μL，10 × 引物 1 μL，Taq 酶 0.2 μL，模板 DNA 1.5 μL，双蒸水5.3 μL。扩增程序按试剂盒要求设置。具体如下:95°C预变性2 min后，然后进入94°C变性30 s，61°C 退火 1 min，70°C 延伸1 min共5 个循环;再进入92°C 变性30 s，61°C 退火1 min，70°C 延伸1 min共25个循环，然后60°C 45 min即可。

扩增产物变性后，应用ABI-3130全自动基因测序仪进行毛细管电泳。电泳体系包括8.7 μL的甲酰胺，0.3 μL的0～500分子量内参标准物和1 μL的扩增产物。

应用ABI-3130仪器附带的GeneMapper软件进行结果分析。

2 结 果

47个案例经珠海STRtyper10G试剂检测后，与原先用Sinofiler试剂基因位点检测结果累加，计算其总的累积亲权指数及亲子概率。结果有27例提高到99.974%以上，有14例增加到99.99%以上。没有观察到基因突变的现象。如表1和图1。

表1 47个案例(无基因突变)总的累积亲权指数(PI)及亲子概率(RCP)结果Tab 1 Cumulative parental rights index(PI)and paternity probability(RCP)of 47 cases(mutations)

续表

图1 47个案例总的累积亲权指数图Fig 1 Cumulative parental rights index(PI)of 47 cases

3 讨 论

国内做亲子鉴定所用试剂盒(如 identifiler、powerplex等)绝大多数是进口的，其中包含了低多态性STR基因座，这些基因座在中国汉族人群中的杂合度、个体识别能力、非父排除率、多态信息含量较差，在物证学检验(包括亲权鉴定)的作用有限，尤其是对于二联体的案件，其缺点尤为突出。在鉴定实践中，二联体的鉴定并不是少数。检验多少个STR基因座、亲权概率达到多少才可以认定父权关系，即亲权关系的认定标准，各个实验室或不同文献并不相同［1，4，7］。目前有关三联体亲子鉴定有了相应的标准，在鉴定实践中做到了有标准可循，但是二联体亲子鉴定现在依然无法满足鉴定实践的需求。国内已有许多报道认为在作单亲案鉴定时，需要检测更多的基因座［1-2，5-6］。

本文所选的案例，用常规Sinofiler试剂盒检测除性染色体外，15个位点完全相符，依常理是不能排除亲子关系的。但是，由于累计亲权指数过低，RCP值又＜99.974%，就会给司法鉴定人的判断带来疑问，必须增加检测的位点。

本研究发现，使用STRtyper10G试剂盒作为常规亲子鉴定Sinofiler试剂的补充试剂，增加7个检测位点，使得二联体检测的累计亲权指数会有不同程度的增加，有27例的亲子概率增加到99.974%以上，有14例增加到99.99%以上，增加STR检测没有观察到基因突变的现象。二联体检测的累计亲权指数有不同程度的增加，有8例从102以下提高到104以上，最多增加一万倍以上(第25例)。这样一来，二联体的检测结果更准确，结论更可靠，司法鉴定人的执业风险也大大降低。

若应用常规Sinofiler试剂盒进行日常单亲亲子鉴定，存在一些漏判非父的风险，必要时应增加检测指标。在日常工作中，应该多选择一些在中国汉族人群中具有高度多态性的STR遗传位点，为法医学个体识别和亲子鉴定选择适合的工具。

:

［1］柳燕，李莉.单亲亲子鉴定的分析研究［J］.法医学杂志，2002，18(2):86.

［2］王琳，王毅，王晓梅，等.亲子鉴定中二联体鉴定结果判定标准的探讨［J］.分子诊断与治疗杂志，2010，2(3):172-175.

［3］程大霖，李莉.个体识别和亲子鉴定理论与实践［M］.北京:中国检察出版社，2001:18-21.

［4］朱运良，黄艳梅，伍新尧.单亲案亲权鉴定结果判定策略［J］.法医学杂志，2006，22(4):281-284.

［5］霍振义，唐晖，刘雅诚，等.亲子鉴定技术标准和质量控制探讨［J］.中国司法鉴定，2004(3):34-35.

［6］伍新尧，童大跃，朱运良，等.用STR分型技术作亲权鉴定时判断标准的研究［J］.中山大学学报(医学科学版)，2010，31(1):5 -6.

［7］薛天羽，成建定，张晋湘.华南地区汉族群体15个STR基因座的遗传多态性调查［J］.中山大学学报(医学科学版)，2009，30(3s):48 -49.

Increase of 7 STR loci enhance the accurate in paternity identification

WANG Min，CHEN Mei，YU Wei-jian，MENG Qing-li
(Dalian Blood Center，Dalian116001，China)

［Abstract］ObjectiveOn the paternity of the two conjoined sites exactly matches the cumulative parental rights index(PI)，lower case，to increase the detection sites.MethodsSelect STR_Typer_10_v1 fluorescently labeled multiplex PCR kit，diad paternity of 47 cases of total parental rights index lower increase D11S2368，D13S325 D18S1364，D22 - GATA198B05，D2S1772，D7S3048，D8S1132 7 detection.ResultsBy increasing the detection of 7 STR loci，27 cases increased to more than 99.974%，14 cases increased to 99.99%increase in STR did not observe the phenomenon of gene mutation is detected.Two conjoined detect the cumulative index of parental rights has increased in varying degrees，eight cases from the following 102 to 104 above.ConclusionIncrease of 7 STR loci enhances the accurate in paternity identification，and makes the conclusion more reliable;reduce the risk of forensic practice greatly.

［Key words］STR;diad;patemity identification

D919

A

1671-7295(2013)02-0170-03

王旻，陈玫，于卫建，等.增加7个STR基因位点在二联体亲子鉴定中的应用［J］.大连医科大学学报，2013，35(2):170 -172.

10.11724/jdmu.2013.02.19

王 旻(1978-)，男，辽宁大连人，主管技师。E-mail:wangmin_dl@126.com

2012-12-07;

2013-03-01)