前列腺癌组织P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表达及意义

温 爽，盖 宇，宗华凤，刘志敏，智慧兰，刘天卿

(大连市友谊医院病理科，辽宁大连 116001)

前列腺癌组织P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表达及意义

温 爽，盖 宇，宗华凤，刘志敏，智慧兰，刘天卿

(大连市友谊医院病理科，辽宁大连 116001)

目的 分析前列腺癌中P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表达情况，探讨其在前列腺癌诊断及预后判断中的意义。方法 应用免疫组织化学(Max Vision)法检测45例前列腺腺泡腺癌、6例前列腺高级别上皮内肿瘤及10例前列腺增生组织中P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表达情况。结果 P504S蛋白阳性率前列腺癌组(84.4%)明显高于前列腺高级别上皮内肿瘤组(50.0%)和前列腺增生组(0%)(P＜0.05);E-Cadherin蛋白阳性率前列腺癌组(42.2%)和前列腺高级别上皮内肿瘤组(33.3%)明显低于前列腺增生组(100%)(P＜0.05);bcl-2蛋白阳性率前列腺癌组(60.0%)明显高于前列腺高级别上皮内肿瘤组(16.7%)和前列腺增生组(20.0%)(P＜0.05)。前列腺癌Gleason 8～10分组E-Cadherin蛋白的表达率(31.8%)明显低于2～4分组(83.3%)(P＜0.05);8～10分组bcl-2蛋白的表达率(68.2%)明显高于2～4分组(33.3%)(P＜0.05)。前列腺癌 Gleason8～10分组(18.2%)和 5～7分组(17.6%)E-Cadherin蛋白的强阳性表达率明显低于 2～4分组(83.3%)(P＜0.05)。前列腺癌组P504S蛋白阳性同时E-Cadherin蛋白阴性的比率(51.1%)明显高于前列腺增生组(0%)(P＜0.05);前列腺癌组P504S蛋白阳性同时bcl-2阳性的比率(57.8%)明显高于前列腺增生组(0%)(P＜0.05)。结论 P504S高表达、bcl-2高表达有助于前列腺癌的诊断;联合检测P504S和E–Cadherin，P504S和bcl-2的表达，可以提高诊断前列腺癌的准确性。

前列腺癌;免疫组织化学;P504S;E-Cadherin;bcl-2

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，发病机制尚不清楚。目前，前列腺癌的诊断主要依靠穿刺标本的活检。但穿刺标本小，病变局限，高分化前列腺癌、高级别上皮内肿瘤和前列腺增生难以鉴别，需借助免疫组化染色来辅助诊断。因此需要寻找有效的前列腺癌的标记物，并且联合应用，以提高诊断前列腺癌的准确性。P504S蛋白存在于过氧化物酶和线粒体上，在侧链脂肪酸的氧化中发挥重要作用［1］。E-Cadherin为钙依赖性粘附蛋白家族中的重要成员之一，是上皮粘附作用的主要介导物［2-3］。bcl-2 是一种凋亡抑制基因，可延长细胞的生长期，导致肿瘤的发生［4］。

本实验通过分析前列腺癌、前列腺高级别上皮内肿瘤及前列腺增生组织P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表达情况，探讨前列腺癌的发病机制，以期寻找新的前列腺癌标记物，提高前列腺癌诊断的准确性，并能对前列腺癌的诊断和判断预后提供帮助。

1 材料和方法

1.1 标本来源及分组

收集大连市友谊医院2006—2010年间诊断明确的前列腺电切标本57例。前列腺腺泡腺癌标本45例，年龄55～92岁，平均77岁。依据WHO2004版泌尿及男性生殖系统肿瘤病理学分类，Gleason分级系统划分了5种组织结构分级，Gleason 1～3级的前列腺癌，所有腺体保留上皮极性，可见腺腔;Gleason 4级时，部分上皮细胞正常极性消失;Gleason 5级时，上皮细胞极性几乎完全消失，仅偶尔可见腺腔。其主要与次要组织结构分级相加，得到Gleason评分。本组Gleason 8～10分22例、5～7分17例、2～4分6例。高级别上皮内肿瘤标本6例(4例来自前列腺癌旁标本)，年龄70～85岁，平均77岁;前列腺增生标本10例，年龄59～88岁，平均73岁。标本经中性福尔马林液固定，石蜡包埋，常规4 μm厚切片。

1.2 试剂与方法

P504S为浓缩型兔抗人单克隆抗体，工作浓度1∶100。E -Cadherin和 bcl-2为即用型鼠抗人单克隆抗体。P504S抗体购自美国 Santa Cruz公司。E-Cadherin抗体、bcl-2抗体和免疫组织化学试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。采用Max Vision二步法，经脱蜡、水化、抗原修复、过氧化物酶阻断、添加一抗、添加二抗、DAB显色、复染、封片后显微镜下观察。用已知阳性标本作阳性对照，PBS取代一抗作空白对照。

1.3 结果判断

免疫组织化学染色结果评价主要根据阳性细胞占所有肿瘤细胞的比例。P504S和bcl-2，以细胞质着棕黄色为表达阳性细胞;E-Cadherin，以细胞质和细胞膜着棕黄色为阳性细胞。显微镜下观察整张切片，P504S蛋白阳性率≤25%为-、26% ～50%为+、51% ～75%为2+、≥76%为3+;E-Cadherin和bcl-2蛋白阳性率≤10%为-、11% ～25%为+、26% ～50%为2+、≥51%为3+。2+和3+为强阳性，1+为弱阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行数据分析，采用卡方检验比较两组间表达率有无显著性差异，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 P504S、E -Cadherin和 Bcl-2蛋白在前列腺良恶性病变中的表达

P504S和bcl-2主要表达于细胞质，E-Cadherin表达于细胞质和细胞膜(图1～3)。P504S在前列腺癌和高级别上皮内肿瘤组织呈强的弥漫表达，在前列腺增生组织仅呈灶状弱的表达。P504S蛋白的阳性率前列腺癌组明显高于高级别上皮内肿瘤组和前列腺增生组(P＜0.05)。E-Cadherin蛋白的阳性率前列腺癌组和高级别上皮内肿瘤组明显低于前列腺增生组(P＜0.05)。bcl-2蛋白的阳性率前列腺癌组明显高于高级别上皮内肿瘤组和前列腺增生组(P＜0.05)。见表1。

图3 bcl-2蛋白在前列腺癌中的表达(10×10)Fig 3 The expression of bcl-2 in prostate cancer

2.2 P504S、E -Cadherin和 bcl-2蛋白表达与前列腺癌Gleason分级的关系

前列腺癌E-Cadherin蛋白的阳性表达率8～10分组明显低于2～4分组(P＜0.05)。bcl-2蛋白的阳性表达率8～10分组明显高于2～4分组(P＜0.05)。E-Cadherin蛋白的强阳性表达率8～10分组和5～7分组间差异无显著性意义(P＞0.05)，但均低于2～4分组(P ＜0.05)。见表2。

2.3 P504S与E-Cadherin和bcl-2表达的关系

前列腺癌组P504S蛋白阳性同时E-Cadherin蛋白阴性的比率明显高于前列腺增生组(P＜0.05)。前列腺癌组P504S蛋白阳性同时bcl-2蛋白阳性的比率明显高于前列腺增生组(P＜0.05)。见表3。

表1 前列腺良恶性病变中P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表达Tab 1 Expression of P504，E-Cadherin and bcl-2 in benign and malignant prostate disease

表2 前列腺癌不同Gleason分级P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表达Tab 2 Expression of P504，E-Cadherin and bcl-2 in prostate carcinoma of different Gleason grade

3 讨 论

Xu等［5］于2000年应用cDNA文库剪影法和微检测法首先从前列腺癌组织中分离出P504S蛋白。P504S基因定位于染色体5p13，编码382个氨基酸组成的蛋白，在支链脂肪酸的氧化中发挥重要作用。随后的研究发现，P504S仅在前列腺癌和高级别上皮内肿瘤中呈弥漫的强阳性表达，在前列腺良性病变中不表达或有灶状弱的表达［6-7］。表明P504S是前列腺癌较为特异和敏感的标志物。本研究结果显示，P504S蛋白在84.4%的前列腺癌和50.0%的前列腺高级别上皮内肿瘤中有弥漫的强阳性表达，在前列腺增生组织中不表达，P504S表达在不同Gleason分级间无显著性差异(P＞0.05)。因此检测P504S蛋白有助于前列腺癌和前列腺高级别上皮内肿瘤的诊断。本研究结果与国内外学者的研究结果基本一致。

表3 P504S与E-Cadherin和bcl-2表达的关系Tab 3 Correlation between the expression of P504S and E-Cadherin，bcl-2

人类E-Cadherin基因定位于16q22，编码含884个氨基酸的多肽。E-Cadherin属于转移抑制相关基因，其产物可以通过促进上皮细胞间的粘附，使肿瘤细胞相互之间保持密切接触，难以脱离原发瘤，致局部侵袭或远处转移。目前已发现肿瘤组织中E-Cadherin蛋白表达的减弱或缺失是一种普遍现象。该基因的缺失或突变，使细胞丧失粘附作用，促进肿瘤细胞间的解离，从而发生浸润和转移，这已在甲状腺乳头状癌、膀胱癌、结肠癌和胆管癌等的研究中得到证实［8-9］。本组实验结果显示，前列腺癌E-Cadherin表达明显低于前列腺增生组织，并且前列腺癌的病理分级越高，其阳性表达率越低。表明E-cadherin表达减弱与前列腺癌发生有关，而且E-Cadherin表达水平与前列腺癌病理分级相关。因此检测前列腺癌组织中E-Cadherin表达水平将有助于诊断和预后判断。本研究同时还显示，前列腺高级别上皮内肿瘤E-Cadherin阳性表达明显低于前列腺增生(P＜0.05)，并且在前列腺癌Gleason 8～10分组和5～7分组的强阳性表达率明显低于Gleason 2～4分组(P＜0.05)，提示 E-Cadherin蛋白可能在前列腺癌变早期即发挥作用。本组高级别上皮内肿瘤例数较少，佐证不足，尚需增加例数做深入研究。

bcl-2是近年来发现的一种抗凋亡基因，定位于18q21。bcl-2通过抑制细胞凋亡，延长细胞寿命，使遗传物质突变率增加，从而增加肿瘤发生的机会［10］。有研究表明，胚胎前列腺芽体上皮中有广泛的bcl-2表达，而正常成人前列腺中bcl-2蛋白只局限于基底上皮细胞，分泌上皮中无bcl-2表达，前列腺癌细胞可出现bcl-2表达，提示bcl-2参与了前列腺癌的发生［11-12］。本研究中发现，bcl-2 表达在前列腺癌高于高级别上皮内肿瘤和前列腺增生组织，并且前列腺癌病理分级越高，其阳性表达率也越高，表明检测前列腺癌组织中bcl-2表达水平具有诊断和预后判断意义。

本研究中，P504S阳性表达同时E-Cadherin阴性表达、P504S阳性表达同时bcl-2阳性表达在前列腺癌组织中均明显高于前列腺增生组织。虽然尚不明确P504S与E-Cadherin、P504S与bcl-2蛋白间是否有相关性，但联合应用以上蛋白，可以用于前列腺癌的诊断中，并可能提高诊断的准确性。

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Significances of P504S，E -Cadherin and bcl-2 protein expression in prostate carcinoma

WEN Shuang，GAI Yu，ZONG Hua-feng，LIU Zhi-min，ZHI Hui-lan，LIU Tian-qing
(Department of Pathology，Dalian Friendship Hospital，Dalian116001，China)

［Abstract］ObjectiveTo study the possibility of P504S，E -Cadherin and bcl-2 protein as a marker to diagnose prostate carcinoma.MethodsThe expressions of these proteins were detected by immunohistochemistry(Max Vision)method.ResultsThe expression rate of P504S in prostate carcinoma group(84.4%)was significantly higher than high prostate intraepithelial neoplasia group(50.0%)and prostate gland proliferation group(0%)(P＜0.05);That of E -Cadherin in prostate carcinoma group(42.2%)and high prostate intraepithelial neoplasia group(33.3%)were significantly lower than prostate gland proliferation group(100%)(P＜0.05);That of bcl-2 in prostate carcinoma group(60.0%)was significantly higher than high prostate intraepithelial neoplasia group(16.7%)and prostate gland proliferation group(20.0%)(P＜0.05).The expression of E -Cadherin in 8-10 score group(31.8%)was significantly lower than 2-4 score group(83.3%)(P＜0.05);The expression of bcl-2 in 8 -10 score group(68.2%)was significantly higher than 2 -4 score group(33.3%)(P＜0.05).The strong expression rate of E -Cadherin in 8-10(18.2%)and 5 -7(17.6%)score groups were signifi-cantly lower than 2 -4 score group(83.3%)(P ＜0.05).Both P504S positive and E -Cadherin negative expression rate in prostate carcinoma group(51.1%)was significantly higher than prostate gland proliferation group(0%)(P ＜0.05).Both P504S and bcl-2 positive rate in prostate carcinoma group(57.8%)was significantly higher than prostate gland proliferation group(0%)(P ＜0.05).ConclusionThe high expression of P504S，bcl-2 protein may be helpful to diagnose prostate carcinoma.The diagnosis accurate of prostate carcinoma could be increased by detect the expressions of P504S and E -Cadherin，P504S and bcl-2 proteins.

［Key words］protaste carcinoma;immunohistochemistry;P504S;E -Cadherin;bcl-2

R361

A

1671-7295(2013)02-0123-04

温爽，盖宇，宗华凤，等.前列腺癌组织P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表达及意义［J］.大连医科大学学报，2013，35(2):123 -126.

10.11724/jdmu.2013.02.06

大连市卫生局立项课题

温 爽(1977-)，女，辽宁大连人，主治医师，硕士。E-mail:76560265@163.com

刘天卿，主任医生，硕士生导师。E-mail:liutianqing1961@163.com

2012-10-10;

2013-03-19)