广东省东莞市2 628例妇科患者人乳头状病毒感染调查分析

高宇琳

广东省东莞市妇幼保健院，广东东莞 523120

人乳头状病毒（human papilloma virus，HPV）是一种具有严格宿主范围和嗜上皮性的DNA 病毒，分子流行病学研究证实HPV 是引起宫颈癌变的主要致病因素[1]，90%以上的宫颈癌标本中有HPV-DNA 的存在[2]。临床上开展HPV基因检测是早期宫颈癌筛查的主要方法之一，目前已发现的HPV 亚型约100多种，能感染女性生殖系统的HPV分为低危型和高危型HPV，高危型HPV 持续感染及多重感染是引起宫颈癌变的重要原因之一。本研究对东莞地区2 628例妇女HPV 感染的流行病学进行回顾性分析，以期了解本地区HPV 感染现状，为宫颈癌的防治提供有价值的参考资料。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2010年1月～2011年2月来我院妇科门诊就诊患者2 628例，年龄18～68岁，中位年龄32岁。2 628例患者为初次在妇科门诊进行HPV 核酸检测，均无宫颈疾病治疗与抗HPV 药物治疗史。

1.2 仪器与试剂

HPV 基因分型检测试剂购于中山大学达安基因公司，配有试剂盒Ⅰ和试剂盒Ⅱ，试剂盒Ⅰ主要为PCR 反应液，试剂盒Ⅱ为HPV 各亚型杂交膜条、杂交液、TMB 等。PCR仪为ABI 9700，杂交仪为电热恒温振荡水槽（上海精宏）。

1.3 实验方法

1.3.1 标本采集 宫颈脱落细胞：在无菌条件下，将棉拭子伸入宫颈内，旋转数周并停留片刻后取出，标本密封保存于 2～8℃备用。

1.3.2 核酸提取 向标本中加入1 mL 灭菌生理盐水，充分震荡摇匀，挤干棉拭子；吸取全部液体转至1.5 mL 离心管中，12 000 r/min 离心 5 min；去上清，沉淀加入 50 μL DNA提取液充分混匀，恒温处理（10±1）min；12 000 r/min 离心5 min，备用。

1.3.3 PCR 扩增HPV DNA 取5 μL DNA 提取物加入HPV核酸PCR 扩增体系组份，扩增条件：93℃ 3 min；93℃ 40 s，55℃ 40 s，72℃ 40 s，40个循环；72℃延伸 7 min。

1.3.4 杂交及分析过程 杂交、洗膜与显色均严格接照说明书进行，杂交膜条上显示蓝色斑点为阳性，多个斑点为多重感染。统计HPV 感染率及基因型分布。

1.4 统计学方法

应用SPSS 12.0 统计软件处理数据。计数资料以率表示，采用 χ2检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV 感染情况

2 628例患者中463例HPV 检测阳性，阳性率为17.6%，其中单一感染368例，双重及多重感染95例，感染率分别为14.0%和3.6%。从年龄分布上分析，>50岁年龄段的患者HPV 感染率最高，为29.1%（25/86），其次为20～40岁的患者，感染率为17.8%（381/2 140），各年龄组HPV总体感染率有统计学意义（P<0.05）。各年龄段患者HPV感染情况见表1。

表1 2 628例标本各年龄组HPV感染率情况

2.2 HPV 单一感染情况

368例单一感染患者主要以HPV16、52 和51型感染为主，分别为 115例（31.2%）、68例（18.4%）和 44例（9.8%）。其中低危型（HPV6、11 型）感染 12例（12/368，3.26%），高危 型 感 染 （HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、亚型 CP8304 型）356例（356/368，96.74%）。

2.3 HPV 双重及多重感染情况

95例双重及多重感染中，双重感染71例（71/95，74.7%），三重及三重以上感染24例（24/95，25.3%），感染类型主要以HPV16、58、11、53、51 为主，分别为 37例（38.9%）、16例（16.8%）、16例（16.8%）、14例（14.7%）、14例（14.7%），在各种亚型感染中，HPV59、45、39、33、16、11 主要以复合感染为主。HPV 各型感染分布见表2。

3 讨论

宫颈癌是全球妇女第二大常见恶性肿瘤，据世界范围内统计，每年有50 万左右的新发病例，其发病呈年青化和上升化趋势，严重威胁妇女的健康和生命。已知HPV 持续感染和多重感染是导致宫颈癌和癌前病变的主要因素之一，从HPV 感染发展到宫颈癌需经历长期过程，如早期治疗的宫颈癌患者生存率高达90%，故建立有效的HPV 筛查方法对宫颈癌的防治具有极其重要意义。

基因芯片技术是近年来发展起来检测基因的新技术，其具有高通量性在临床上得到广泛应用[3]。本研究采用HPV-DNA-反向斑点膜杂交技术（RDB 方法）对2 628例妇科门诊患者进行HPV 核酸检测和基因分型，结果发现463例患者HPV 阳性，其阳性率为17.6%，与Munoz 等[4]报道较为接近。为了进一步了解HPV 在女性宫颈感染情况，本研究将门诊患者按年龄分为不同组，研究发现50岁以上组HPV 感染阳性率显著高于20～40岁组与41～50岁组HPV 阳性率，其中20～40岁组阳性率高于41～50岁组阳性率，结果提示HPV 感染虽有年青化趋势，但50岁以上组HPV 感染阳性率显著高于低年龄组，因此对50岁以上女性进行HPV 基因检测与分型是宫颈癌防治的关键。

目前研究表明HPV 感染分型分布的研究在宫颈筛查及癌前病变病情随防监测中有重要的意义[5]，本研究对463例HPV 阳性患者HPV 基因分型结果显示，有368例属于HPV 亚型单一感染，95例属于双重及多重感染。单一感染患者主要以HPV16、52 和51型感染为主，多重感染类型主要以HPV16、58、11、53、51 为主，但 Clifford 等[6]报道全世界HPV 感染的主要类型是HPV16/18，其次是45、31、33型，本研究与国内其他地区的报道亦不相同[7]，可能是研究病例数不同之外，还可能是我国不同地区、区域存在差异。本研究中双重及多重感染例数占总例数的20.5%（95/463），提示本地区人群多重感染率较高，这一点应引起高度重视。

表2 463例HPV阳性妇女HPV感染分布

宫颈HPV 早发现、早预防是阻断宫颈癌病变的关键，许多国家已将HPV 检测纳入筛查计划。目前我院已成立了宫颈癌防治指导中心，对育龄妇女及宫颈癌高危人群定期进行HPV 核酸检测及基因分型筛查，预防宫颈癌的发生及了解HPV 感染的转归，将为本地区妇女的健康提供有利保障。

[1]Roden R，Wu TC.How will HPV vaccines affect cervical cancer[J].Nat Rev Cancer，2006，6（10）：753-763.

[2]Stoler MH.Human papillomavirus and cervial neoplasia：a model for carcinogenesis[J].Int J Gynecol Pathol，2000，19（1）：16.

[3]马卿莲，肖长认，叶红，等.分子生物学技术在HPV分型方面的应用进展[J].现代肿瘤医学，2009，17（1）：144-147.

[4]Munoz N，Bosch FX，de Sanjose S，et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus type associated with cervical cancer[J].N Engl J Med，2003，348（6）：518-527.

[5]Guyot A，Karim S，Kyi MS，et al.Evaluation of adjunction HPV testing by hybrid capturell in woman with minor cytological abnormalities for CIN2/3 and cost comparisos with coloscopy[J].BMC Infect Dis，2003，3：23.

[6]Cliffeord GM，Smith JS，Plummer M，et al.Human papillomavirus types in invasive cervical cancer wordwide：a meta-analysis[J].Br J Cancer，2003，88（1）：63-73.

[7]刘永林，张丽，陈益民，等.浙江地区1088例妇科就诊患者HPV 感染状况调查[J].中华临床感染病志，2011，4（2）：106-108.