麸炒前后苍术中3种成分的HPLC测定

刘玉强， 才 谦， 贾天柱

(辽宁中医药大学，辽宁大连116600)

中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb．)DC．或北苍术Atractylodes chinensis(DC．)Koidz．的干燥根茎［1］。始载于《神农本草经》，具有燥湿健脾，祛风散寒，明目的功效［2］。苍术中含有5%～9%的挥发油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔类及少量的酚类、有机酸类成分组成。非挥发性成分主要有氨基酸、多炔类化合物、倍半萜糖苷等水溶性成分以及少量糠醛［3-5］。因苍术炮制后燥性降低，且健脾作用增强，故目前临床应用的苍术多为麸炒苍术［6-7］。有文献报道，苍术麸炒后包括挥发油在内的化学成分会发生变化［8-10］，本实验为考察苍术麸炒后倍半萜类成分苍术烯内酯丙和聚乙烯炔类成分苍术素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的变化，收集了全国17个地区的苍术药材或生苍术片，并自行炮制得麸炒苍术片，采用高效液相色谱法测定这些地区生熟苍术片中以上成分，初步阐明麸炒对苍术中倍半萜类成分和聚乙烯炔类成分的影响。

1 仪器、试剂与试药

1.1 仪器 Agilent 1100 Series高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Tigerkin C18(5μm，4.6×250 mm)色谱柱 (大连思普精工有限公司)。KH-300P型超声波清洗器 (昆山禾创超声仪器有限公司)。

1.2 试剂 乙腈 (色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司);纯净水 (杭州娃哈哈集团有限公司)。

1.3 试药与药材 对照品苍术烯内酯丙、苍术素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯，均为自制，经液相色谱用归一化法测定，纯度均大于98%。苍术药材从不同地区购买，经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb．)DC．或北苍术 Atractylodes chinensis(DC．)Koidz．的根茎。麸炒品按照《中国药典》2010年版麸炒方法自行炮制。

2 方法与结果

2.1 苍术烯内酯丙的测定

2.1.1 色谱条件 Tigerkin C18色谱柱 (5μm，4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈－水(54∶46);柱温25℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长220 nm;进样量10μL。

2.1.2 对照品溶液制备 精密称取苍术烯内酯丙对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液制备 取本品粉末 (过60目筛)约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液5 mL，称定质量，放置一夜。次日超声处理(功率250W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，定容至10 mL棕色量瓶中，过0.45μm微孔滤膜即得。色谱图见图1和图2。

图1 苍术烯内酯丙对照品HPLC图谱Fig.1 HPLC chromatogram of atractylenolideⅢ

图2 供试品HPLC图Fig.2 HPLC chromatogram of sam p le

2.1.4 线性关系考察 精密吸取苍术烯内酯丙对照品溶液 (质量浓度为 0.008 8 mg/mL)2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL注入高效液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以进样量 (μg)为横坐标 (X)，峰面积为纵坐标 (Y)，进行线性回归，得回归方程为:Y=1 737.7X－0.451 2，r=0.999 7，提示苍术烯内酯丙进样量在0.017 6μg～0.176μg范围内具有良好的线性关系。

2.1.5 精密度试验 取同一供试品溶液 (产地:湖北英山)，连续进样6次，每次10μL，测得苍术烯内酯丙峰面积的RSD为2.7%，表明该方法精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24、48 h进样10μL，测得苍术烯内酯丙色谱峰面积的RSD为2.2%，表明该方法的精密度良好。

2.1.7 重复性试验 取本品0.5 g(产地:湖北英山)，精密称定，共6份。按前述方法测定苍术烯内酯丙，结果苍术烯内酯丙的平均含有量为0.020%，RSD为2.0%，重复性良好。

2.1.8 加样回收率试验 精密称取本品 (产地湖北英山，苍术烯内酯丙含有量为0.020%)0.25 g，共6份，加入质量浓度为0.11 mg/mL的苍术烯内酯丙对照品溶液0.5 mL，按前述方法制备和测定。测定结果提示:本方法回收率在96.8% ～104.7%之间，RSD为2.9%，符合有关规定。

2.1.9 样品测定结果 分别测定了17个地区生苍术片及自制的麸炒苍术片中苍术烯内酯丙，结果见表1。

表1 生苍术和麸炒苍术中苍术烯内酯丙、苍术素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的测定结果Tab.1 Contents of atractylenolideⅢ，atractylodin and(4E，6E，12E)-tetradecatriene-8，10-diyne-1，3-diyl diacetate in crude slices and processed ones of Atractylodis Rhizoma

2.2 苍术素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的测定

2.2.1 色谱条件 Tigerkin C18色谱柱 (5μm，4.6×250 mm);流动相为乙腈－水 (72∶28);柱温25℃;体积流量1 mL/min;检测波长340 nm;进样量10μL。

2.2.2 对照品溶液制备 分别精密称取苍术素及(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯对照品适量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg、0.1 mg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液制备 同2.1.3。色谱图见图3，图4和图5。

图3 苍术素对照品HPLC图Fig.3 HPLC chromatogram of atractylodin

图4 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯对照品HPLC图Fig.4 HPLC chromatogram of(4E，6E，12E)-tetradecatriene-8，10-diyne-1，3-diyl diacetate

图5 供试品HPLC图Fig.5 HPLC chromatogram of sam ple

2.2.4 线性范围考察 精密吸取苍术素对照品溶液 (质量浓度为0.204 4 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μL注入高效液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以进样量 (μg)为横坐标 (X)，峰面积为纵坐标 (Y)，进行线性回归，得回归方程为:Y=6 393.2X－48.889，r=0.999 8，提示苍术素进样量在0.244μg～2.684μg范围内具有良好的线性关系。

精密吸取 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯对照品溶液 (质量浓度为0.128 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 μL注入高效液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以进样量 (μg)为横坐标 (X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归，得回归方程为:Y=3 270.3X－49.167，r=0.999 6。提示 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯进样量在0.128μg～1.408μg范围内具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验 取同一供试品溶液 (产地:湖北英山)，连续进样6次，每次10μL，测得苍术素峰面积的RSD为1.8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面积的RSD为2.1%，表明该方法精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别于0、4、8、12、24、48 h进样10μL，测得苍术素峰面积的RSD为1.4%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面积的RSD为1.2%，表明该方法的精密度良好。

2.2.7 重复性试验 取本品0.5 g(产地:湖北英山)，精密称定，共6份。按前述方法测定，结果苍术素的平均含有量为0.237 8%，RSD为2.6%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯平均含有量为0.310 4%、RSD为2.6%，表明该方法重复性良好。

2.2.8 回收率试验 取本品 ［产地湖北英山，苍术素含有量为0.237 8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含有量为0.310 4%］6份，每份0.25 g，精密称定。置锥形瓶中，分别加入对照品苍术素溶液0.5 mL(质量浓度为1.19 mg/mL)，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯溶液 0.5 mL(质量浓度为1.55 mg/mL)，按前述方法制备和测定，测定结果提示苍术素的回收率在95.9%～104.0%之间，RSD为2.8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的回收率在97.6% ～103.8%之间，RSD为2.2%，符合有关规定。

2.2.9 样品测定结果 分别测定了17个地区生苍术片及自制的麸炒苍术片中苍术素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含量，结果见表1。可以看出，苍术麸炒后苍术烯内酯丙、苍术素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的量以下降为主。

3 讨论

3.1 通过测定17个不同地区收集的生苍术片和自行炮制的麸炒苍术片中倍半萜类成分和聚乙烯炔类成分可以看出，除个别样品外，苍术麸炒后这两类成分的量有所下降，这可能与这些成分主要存在于苍术挥发油中，而在麸炒的过程中苍术挥发油的量减少，导致这些成分的量下降。

3.2 由于苍术素和 (4E、6E、12E)-十四癸三烯-8、10-二炔-1、3-二乙酸酯对光不稳定，试验时采取避光操作。

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