对氯苯氧异丁酸甲氧基苯丙烯酸酯的结构确证*
2013-09-14胡庆梅程青正
胡庆梅,彭 红,程青正
(江西中医学院,江西 南昌 330004)
对氯苯氧异丁酸甲氧基苯丙烯酸酯(AZ)是经结构改造,具有调血脂作用的全新化合物,其作用机制是通过降低极低密度脂蛋白(VLDL)的合成,促使VLDL分解而使甘油三酯减少,从而调节血脂[1-5]。笔者采用元素分析、核磁共振、质谱以及红外光谱对AZ的结构进行了确证[6-9]。现报道如下。
1 仪器与试药
Vario ELⅢ型元素分析仪(德国EA公司);Varian Cary 5000型紫外/可见/近红外分光光度计;Avance 400型核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司);Agilent 6460型质谱仪;Diamond TG/DTA热重分析仪;D/max-2500/PC型转靶X射线衍射仪。AZ对照品(批号为090806,由江西中医学院药物化学学科组提供),化学结构式见图1;其他试剂均为分析纯,水为超纯水。
图1 AZ的化学结构式
2 方法与结果
2.1 元素分析
AZ对照品的元素C及H百分含量与理论值相符,见表1。
表1 AZ对照品的元素C及H的百分含量(%)
2.2 核磁共振谱(NMR)
2.2.11H 核磁共振谱(1H -NMR)
AZ对照品在CDCl3溶剂中的1H谱测定数据见表2,1H谱图见图 2。根据二维相关(COSY)谱(图 3),结合 DEPT谱(图 4)、异核单量子关系(HSQC)谱(图5)、多键碳氢关系(HMBC)谱(图6),可对AZ对照品的1H谱进行归属。
表2 AZ对照品的1H-NMR数据
图2 核磁共振氢谱(1H-NMR)
图3 COSY谱
1)氢谱共给出8组氢,各组峰积分比例由低场到高场为1∶1 ∶2 ∶2 ∶3 ∶1 ∶3 ∶6。
2)第1组在HSQC谱中与分子结构中的任何碳均不存在相关性,因此应是分子结构中的活泼质子,即δ11.19 ppm为21位质子。
图4 DEPT谱与碳谱
图6 HMBC谱
3)第2组和第6组峰的积分比例为1∶1,DEPT谱和HSQC谱显示该两组峰均与CH类型的碳相连,COSY谱表明该两组峰与其他质子没有相关关系,但相互之间存在相关关系,另外在HMBC谱中,第2组峰除与第6组峰存在相关关系以外,还与两个CH类型的碳和两个季碳存在相关关系,第6组峰仅与两个季碳存在相关关系,因此可以判断出δ7.79及7.75 ppm是18位质子,δ6.45 及 6.41 ppm 为 19 位质子。
4)第3组、第4组和第5组峰的积分比例为2∶2∶3,DEPT谱和HSQC谱显示这3组峰均与CH类型的碳相连,其中第4组峰和第5组峰均与两个CH类型的碳存在相关关系;在COSY谱中第3组峰和第4组峰分别与第5组存在相关关系;另外在HMBC谱中,第3组峰与2个季碳存在相关关系,第4组峰与4个CH类型的碳和2个季碳存在相关,且其中1个CH为18位的碳;第5组峰与2个CH类型的碳和5个季碳存在相关关系,因此 δ7.28 及 7.26 ppm 是 2 位、6 位质子,δ7.18 及 7.15 ppm 是13位、16位质子,δ7.02-6.99 ppm 是 3位、5和 15位质子。
5)DEPT谱和COSY谱显示第7组和第8组峰均是与CH3类型的碳相连,HMBC谱显示第7组峰仅与1个季碳存在相关关系,第8组峰与2个季碳存在相关关系,因此δ3.87 ppm是17位质子,δ1.77ppm 是 8位、9位的质子。
2.2.213C 核磁共振谱(13C -NMR)
AZ对照品在CDCl3溶剂中的13C谱测定数据见表3。碳谱中给出17组峰,图3中的DEPT90谱和DEPT135谱说明有7个CH和2个CH3存在,其余均为季碳。
表3 AZ对照品的13C谱测定数据
1)分子的结构中有7个CH存在,根据氢谱分析结果,可知δ146.24 ppm 是 18 位碳,δ129.12 ppm 是 2 位、6 位碳,δ122.99 ppm是 15 位碳,δ121.63 ppm 是 16 位碳,δ120.87 ppm 是 3 位、5 位碳,δ117.71 ppm 是 19 位碳,δ111.48 ppm 是 13 位碳。
2)DEPT135图谱显示结构中有2个CH3,即δ55.89 ppm是17位碳,δ25.47 ppm 为 8 位、9 位碳。
3)比较13C谱和DEPT135谱,可发现该分子结构中有8个季碳,HMBC 谱显示,δ172.24 ppm 和 δ79.53ppm 均与 8 位、9 位质子存在相关关系,比较与此2个质子存在相关季碳的化学环境可判断出,δ172.24 ppm 应是 10 位季碳,δ79.53 ppm 应是 7位季碳;δ171.97 ppm与18位、19位质子存在相关关系,应是20位季碳;δ153.93 ppm与2位、6位质子存在相关关系,因此应属于1位季碳;δ151.45 ppm与13位、16位质子存在相关关系,应是12位季碳;δ141.54 ppm与13位、15位、16位的质子存在相关关系,应是11位季碳;δ133.29 ppm与15位、18位、19位的质子存在相关关系,应是 14位季碳;δ127.51 ppm 与 2位、3位、5位、6位的质子存在相关关系,应是4位季碳。
综上所述,NMR给出的信息与结构式相符。
2.3 质谱
离子化方式为ESI(-)。质谱测得本品的分子离子峰[M-H]-,其质荷比 m/z为 389.05,与 AZ的相对分子质量(分子式C20H19ClO6,相对分子质量为390.814)一致。
2.4 紫外光谱分析
在甲醇溶液中,λmax275为取代苯环的大共轭体系的π→π*跃迁特征吸收,λmax224为取代苯环的K带特征吸收。
2.5 红外光谱(IR)分析
仪器校正:用聚苯乙烯薄膜的红外光谱吸收峰对仪器波数进行校正[参考2010年版《中国药典(第二部)》附录ⅣC],符合规定。方法为KBr压片法。AZ对照品的IR谱各吸收峰归属见表4。
表4 AZ的IR谱数据及归属
3 讨论
元素分析结果表明,AZ对照品的组成与C20H19ClO6相符,测量不确定度在允许范围内。氢谱显示,共8组氢,各组峰积分比例由低场到高场为 1∶1∶2∶2∶3∶1∶3∶6。AZ分子结构中有 20个碳,本品的13C谱显示有17组碳峰;DEPT谱显示结构中有2个CH3,即 δ55.89 ppm 是 17 位碳,δ25.47 ppm 为 8 位、9 位碳;结合氢谱分析可知,δ129.12 ppm 是 2 位、6 位碳,δ120.87 ppm 是 3位、5位碳。质谱测得本品的分子离子峰[M-H]-,其质荷比 m/z为389.05,与AZ的相对分子质量一致。经红外光谱验证,与AZ的分子结构相符。
本研究采用薄层色谱法和高效液相色谱法对AZ的纯度进行检查。采用硅胶G薄层板,分别选用甲醇-氯仿(20∶20),甲醇-乙酸乙酯(20∶30)为展开剂展开,置紫外灯365 nm下检视。结果表明,AZ对照品在两个展开条件下均能显示1个斑点,所含成分单一,无杂质。通过高效液相色谱法,经面积归一法计算,对照品含量为100%,可以作为对照品使用。
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