铁线莲属蒙药材薄层层析图谱研究＊

李 骁，罗彩神，解红霞，武旭芳

(内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010059)

铁线莲属 Clematis L.隶属于毛茛科，为多年生木质或草质藤本，或为直立灌木或草本，分布于世界各地，约300种，在我国各地均有分布[1]。内蒙古地区有16种6变种[2]，经本草考证[2－5]，其中入蒙药的植物有芹叶铁线莲(Clematis aethusifolia)、黄花铁线莲 (C.intricata)、短尾铁线莲 (C.brevicaudata)、棉团铁线莲(C.hexapetala)长瓣铁线莲(C.macropetala)和辣蓼铁线莲(C.mandshurica又名东北铁线莲[6－7])。蒙医临床上，以芹叶铁线莲、黄花铁线莲和长瓣铁线莲枝叶同等入蒙药，蒙药名为特木日·敖日秧古，味辛、微甘，性热，破痞、助温、燥“希日乌素”，治寒痞、积食、“希日乌素”症等;短尾铁线莲茎入蒙药，蒙药名为奥日雅木格，味苦、性凉，清热、止泻、止痛，用于治疗肝热、肺热、肠刺痛等;棉团铁线莲和辣蓼铁线莲全草入蒙药，蒙药名为依日绘，味辛、微甘、性热，破痞、助温、燥“希日乌素”，用于治疗寒痞、食积、水肿、寒泻、疮痈等[2，5]。以上6种铁线莲属蒙药的从药性及功能主治方面，各有差异，不能等同。但由于来源于同科同属不同种植物，亲缘关系相近，原植物形态、药材性状及显微特征方面相似，故临床用药混用、代用等现象较严重。目前报道的铁线莲属药材薄层研究主要以齐墩果酸或芦丁为对照品，单独地对棉团铁线莲、芹叶铁线莲、威灵仙进行定性鉴别[8－10]，而采用薄层色谱法系统地对上述6种铁线莲进行鉴别还未见报道。本研究中采用硅胶薄层色谱法对上述6种铁线莲药材的薄层色谱图进行分析，可对6种铁线莲药材进行准确、快速鉴别，从而为临床安全用药提供科学依据。

1 仪器与试药

烧杯;量筒;冷凝回流装置(数字恒温水浴锅，球形冷凝管，圆底烧瓶);抽虑装置(抽滤瓶，布式漏斗，抽虑泵，滤纸);10 mL容量瓶;玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器厂);层析缸;喷瓶;ZF－20D型暗箱式紫外分析仪(南京科尔仪器设备有限公司);薄层层析硅胶GF254(青岛海洋化工厂);所用试剂均为分析纯。于2009年至2011年药材采收期采集6种铁线莲植物全草，置阴凉通风干燥处储存，蒙药材原植物均经笔者认真鉴定，来源见表1。

表1 药材来源及采集时间

2 方法与结果

2.1 样品提取

对每批次药材分别精确称取样品各3份，每份5 g，适当粉碎，分别用75 mL蒸馏水、75 mL 70%乙醇、75 mL 95%乙醇浸泡过夜，再分别将隔夜浸泡的药材与溶剂转移至圆底烧瓶，加热回流1 h，趁热抽虑，滤渣分别加入65 mL蒸馏水、65 mL 70%乙醇，65 mL 95%乙醇，回流0.5 h，趁热抽虑，合并两次滤液，水浴蒸干，加少量无水乙醇溶解，定容至10 mL容量瓶，备用。

2.2 提取方法选择

取10 cm×20 cm硅胶板，分别点样第1批样品10 μL，预饱和15 min，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(20∶3∶1)横向展开，展距8 cm，25%硫酸水溶液显色，加热至斑点显色清晰，图谱见图1。结果显示，70%乙醇提取液展开的点数目较多且斑点清晰，故优先选用以70%乙醇溶液提取。

图1 第1批药材不同溶剂提取样品图谱

2.3 提取方法重复性与稳定性研究

以70%乙醇提取芹叶铁线莲作重复性和稳定性研究，分别称取第1批芹叶铁线莲3份，每份5g，以70%乙醇浸泡，按2.1项下方法提取，存放时间分别为0，24，48 h，取10 cm×20 cm硅胶板，点样 10 μL，展开剂石油醚 －乙酸乙酯 － 丙酮(9∶3∶1)，预饱和15 min，展开，展距13.8 cm，25%硫酸水溶液显色，加热至斑点显色清晰，图谱见图2。结果显示，斑点数目及清晰度一致，说明该提取方法重复性和样品稳定性良好，故按2.1方法以70%乙醇提取第2批药材。

图2 芹叶铁线莲不同保存时间薄层图谱

2.4 展开系统选择

以70%乙醇提取物为标准，分别对多种展开系统进行了试验，包括石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)，环己烷－乙酸乙酯－冰乙酸(12∶3∶1)，苯 －丙酮(3∶1)，三氯甲烷 －甲醇 －水(15∶3 ∶0.5)，乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸 －水(8∶1∶1∶1)。经检视后发现，石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)和三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)系统可明显区别出6种药材，故以这两种展开系统作为优选展开系统。

2.5 药材薄层图谱鉴别

将两批样品点于同一张薄层板上(10 cm×20 cm)，展开剂石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)展开，展距8.0 cm，喷25%硫酸水溶液后加热至100℃，至出现清晰斑点，日光下检视，如图3所示。再以氯仿－甲醇－水(15∶3∶0.5)为展开剂，将两批药材点于同一张薄层板上(20 cm×20 cm)，展距17.0 cm，25%浓硫酸水溶液显色后于365 nm紫外灯下检视，如图3所示。

图3 两批样品薄层鉴别图谱

以石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)为展开剂，由图谱可见，Q点(Rf=0.85)为辣蓼铁线莲所特有斑点，从而可以鉴别出辣蓼铁线莲。再以三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)为展开剂，由图谱可见，芹叶铁线莲独有斑点A，长瓣铁线莲比芹叶铁线莲只少了斑点A，棉团铁线莲独有B，F，G斑点，短尾铁线莲缺斑点C，黄花铁线莲C，D点都有，辣蓼铁线莲D，E，F，G点不明显，经过分析对比，从而辨别出了芹叶铁线莲、黄花铁线莲、短尾铁线莲、棉团铁线莲、长瓣铁线莲和辣蓼铁线莲，各斑点比移值，A点Rf=0.71，B 点 Rf=0.57，C 点 Rf=0.53，D 点 Rf=0.46，E 点Rf=0.34，F 点 Rf=0.26，G 点 Rf=0.17。

3 讨论

通过试验发现，采用薄层色谱法，以石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)和三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)组合可以将6种铁线莲进行很好的区分。通过温度、湿度考察发现，在25℃、相对湿度50%下薄层层析效果最好，斑点清晰，Rf值稳定。因此，本试验的层析图谱均为这一条件下获得的。在铁线莲属蒙药材中，6种铁线莲化学成分多有相同，但也有区别，临床用药存在混用、代用现象，因此通过简便、快捷的方式将其进行鉴别具有重要的意义。本研究中主要通过薄层层析图谱对6种铁线莲药材进行鉴别区分，而非进行化学成分分析，因此未对其各个鉴别色点进行定性分析。通过研究摸索出了适合于铁线莲属6种蒙药材鉴别的薄层色谱方法，并采用该方法鉴别出了6种蒙药材，该方法快速、简便、实用、重复性好。

致谢:感谢内蒙古医科大学董玉教授的悉心指导和审阅。

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第二十八卷)[M].北京:科学出版社，1989:74－87.

[2]内蒙古植物志编辑委员会.内蒙古植物志(第二卷)[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社，1989:515－534.

[3]中国中医药管理局《中华本草》编委会.《中华本草·蒙药卷》[M].上海:上海科学技术出版社，2004:80，216，353.

[4]柳白乙拉.蒙药正典(占布拉道尔吉著)[M].北京:民族出版社，2006:128－129.

[5]内蒙古植物药志编辑委员会.内蒙古植物药志(第一卷)[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社，2000:389－397.

[6]辛 广，张捷莉，孟 河，等.千山东北铁线莲花挥发油化学成分研究 [J].鞍山师范学院学报，2000，2(3):68 －70.

[7]张海丰，郗瑞云，张宏桂，等.东北铁线莲根与茎叶化学成分的GCMS比较分析[J].中医研究，2008，21(3):22－24.

[8]散 旦，林 燕，康双龙.细叶铁线莲的薄层鉴别研究[J].内蒙古科技与经济，2012，2(1):129.

[9]郭迎霞，郭志鹏，申现祥，等.薄层扫描法测定棉团铁线莲中齐墩果酸的含量[J].河北中医，2010，32(2):253 －254.

[10]王 曙，徐小平，吴 静.威灵仙的薄层色谱鉴别[J].华西药学杂志，2001，16(6):453 －454.