保元清血颗粒中不同含量桂皮醛治疗老年冠心病的疗效

孙 聪 韩业超 吴 强 (长春中医药大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，吉林 长春 307)

冠心病是老年人群常见的慢性疾病，中医药治疗有着悠久历史。保元清血颗粒是由多味中药经提取后制成的颗粒制剂，其中肉桂是方中的主药，含有的桂皮醛等成分具有补火助阳、引火归元、温经通络的作用〔1〕。临床上检测桂皮醛作为药品疗效的质量控制，但既往的方法缺乏稳定性能〔2〕。本文采用高效液相色谱法检测保元清血颗粒中不同含量桂皮醛在老年冠心病治疗中的疗效。

1 资料与方法

1.1 对象 选择吉林大学中日联谊医院中医科住院患者90例，其中男54例，女36例;年龄60～82〔平均(68.5±6.7)〕岁。入选患者均符合冠心病临床诊断标准，心功能1～2级。排除标准:(1)心衰2度以上;(2)合并其他类型心脏病;(3)合并糖尿病及脑血管病;(4)不予合作者。

1.2 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪;DAD检测器;Agilent化学工作站;KQ-600DV型数控超声波清洗仪;BP211D型电子分析天平;AS200-S电子分析天平;ED2N型超纯水器。

1.3 试剂 桂皮醛对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110710-200714，供含量测定用);保元清血颗粒由长春中医药大学科研中心提供试产品(规格50 g/袋;批号为100802、100803、100804);甲醇、乙腈为色谱纯;水为高纯水。

1.4 方法

1.4.1 对照品溶液的制备 精密称取桂皮醛对照品50 mg，置50 ml量瓶中，加适量甲醇溶液并稀释至刻度、摇匀;用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得10.07 μg/ml的对照品溶液。

1.4.2 供试品溶液的制备 取保元清血颗粒5 g，以对照品制备方法精密称定后置具塞锥形瓶中，精密加入50 ml甲醇，称定重量，超声提取30 min，再称定重量，用甲醇补足减损的重量，摇匀、滤过，精密量取续滤液1 ml，置20 ml量瓶中，加甲醇至刻度;摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。采用对照品进行含量校正，按处方配比制成桂皮醛含量12.5、25.5、55.5 μg/ml的三种溶液试剂。

1.4.3 临床分组及治疗方法 将入选患者以随机分组法均分为三组，每组30例，分别对应给予不同浓度的供品溶液，即低剂量、中剂量和高剂量组;给药方法为单剂量，3次/d，3 w为1个疗程，两个疗程后检测临床指标。

1.4.4 临床指标检测 选用色谱条件:色谱柱为SB-C柱;流动相为乙腈-水;流速为1.00 ml/min;柱温为30℃;进样量为20 μl;DAD检测器检测波长为290 nm。入选患者分别于入组前后进行心电图、心脏彩超及临床自主症状评测。

1.5 统计学方法 应 用SPSS16.0统计软件进行分析，数据资料以±s表示，采用t检验和χ2检验。

2 结果

2.1 色谱条件适应性结果 在本实验选定的色谱条件下，得到桂皮醛对照品及三组保元清血颗粒供试品色谱图均无色谱峰出现，表明各组分不干扰桂皮醛的测定。

2.2 三组患者临床资料对比 三组治疗后均较治疗前临床资料明显好转，有显著性差异(P＜0.05)，以高剂量组临床症状缓解明显;但治疗后心电图、左室舒张功能及左室射血分数的改善三组无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

表1 三组患者治疗前后一般临床资料对比(n)

2.3 色谱线性关系观察 在本实验色谱条件下，桂皮醛在0.5～50 μg/ml具有良好的线性关系，线性方程为 Y=3.551 606 3X－2.603 881 3，相关系数r为0.999 76。

2.4 稳定性试验 取三组各两份样品，共6份单剂量，分别于0、2、4、8、16、24 h 精密取样 20 μl进行色谱检测，桂皮醛波峰面积为13%，表明本供试品在24 h内稳定性良好。

3 讨论

《中华人民共和国药典》(2010年一部)规定中药提取物桂皮醛采用两次甲醇超声处理且放置过夜，该法提取率虽高但耗时过长。本实验发现用甲醇超声处理0.5 h即可达到较好的提取效果，可节省大量时间，提高检测效率。桂皮醛的含量测定有薄层扫描法、微波提取过氧化氢氧化法、气相色谱法、液相色谱法等。但薄层扫描法重复性相对较差，微波提取过氧化氢氧化法受干扰因素较多，气相色谱法涉及内标物，分离难度很大，所以均未采用。相比之下液相色谱法操作简单、稳定性好，是理想的测定方法。

有研究者采用乙腈-0.1%磷酸(35∶65)做流动相〔2〕，经过实验和乙腈-水做流动相比较，差别不明显。在本文中采用液相色谱法，用甲醇-水作为流动相〔3，4〕，发现乙腈-水比甲醇-水做流动相分离度高、峰形好。本实验结果说明该方法线性关系好、操作简便、结果准确，重复性好，适用于保元清血颗粒中桂皮醛含量的测定。

有杀菌、消毒、防腐、抗溃疡加强胃、肠道运动、抗病毒、抗癌、扩张血管及降压、壮阳等多种功效〔5～9〕。冠心病临床上常给予中药制剂，而其疗效通常缺乏稳定的质量控制标准方法。本实验结果表明，同种中药制剂采用高效液相色谱法检测有着良好的线性关系，稳定性能好，无剂量组分干扰现象。因此，该方法可以用于临床中药制剂疗效的质量控制。

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