复方冰硼冲洗液体外抑菌效果的评价

史彦 杨健 陈浩

[摘要] 目的 评价纯中药制剂复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液对4种牙髓病原菌的体外抗菌活性。方法 采用琼脂稀释法，测定复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液对4种厌氧病原菌牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌和粪肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果 2种冲洗液对4种厌氧病原菌均有抗菌作用，复方冰硼冲洗液的抗菌性优于冰硼冲洗液。粪肠球菌的抗药能力明显强于其余3种菌株。结论 纯中药制剂复方冰硼冲洗液具有良好的抗菌性，作为根管冲洗液可能是有优势的。

[关键词] 复方冰硼冲洗液； 根管冲洗； 抗菌性

[中图分类号] R 739.86 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.04.006

根管内的细菌在牙髓和根尖周病中扮演重要的角色。根管治疗的成功取决于根管内感染的有效控制。根管冲洗是根管治疗的重要步骤，能有效去除根管内病原菌、残髓和牙本质碎屑，维持根管的清洁和非感染状态。根管冲洗液的种类很多，但都存在一定缺陷。中药具有独特的清热解毒、消肿止痛作用，且毒副作用小，作为根管冲洗液有其优势；但目前多数研究[1-2]尚停留在成品中药制剂上，其制剂的水溶液呈黄色，会对白色的牙体组织产生一定的染色作用，影响美观。本研究将白色中药——复方冰硼和冰硼按中医组方的原则进行配制，制成根管冲洗液，探索用于感染根管冲洗消毒的可行性。

1 材料和方法

1.1 实验药物的配制和分组

Ⅰ组：复方冰硼冲洗液，由冰片、硼砂、玄明粉、白芷、细辛共5味中药配制而成；Ⅱ组：冰硼冲洗液，由冰片、硼砂、玄明粉与蒸馏水稀释而成。2种冲洗液均由江西省中医学院附属医院配制。

1.2 实验菌株

实验菌株由口腔疾病研究国家重点实验室（四川

大学）提供，共4种：牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277，中间普氏菌ATCC 25611，具核梭杆菌ATCC 25286，粪肠球菌ATCC 19433。质控菌株为脆弱拟杆菌ATCC 25285。

1.3 仪器设备

DY-2型厌氧培养箱（浙江义乌冷冻机总厂），细菌多点接种仪（SAKUMA公司，日本），PB-10系列

pH计（北京赛多利斯天平有限公司）。

1.4 含药琼脂平皿的配制和药物实验液的配制

选用牛心脑浸液-辅助琼脂（beef heart infusion-

supplemented broth，BHI-S）（OXID公司，英国）培养

基作为实验培养基。分别取复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液，按照不同的体积比与温度为45～55 ℃的BHI-S琼脂混匀后倾注于无菌平皿中，配制成对倍递减的系列实验药物平板，冷却凝固后使用。将复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液的原液定为1（100%），药物

平板的稀释倍数及相应的稀释后体积分数分别为：2（50%）、4（25%）、8（12.5%）、16（6.25%）、32（3.1%）、

64（1.6%）、128（0.8%）、256（0.4%）、512（0.2%）、

1 024（0.1%）。

1.5 实验菌液的准备

在BHI-S琼脂表面复苏并纯化4种实验菌株，置于80%N2、10%CO2、10%H2条件下37 ℃培养48 h，取纯培养物接种于BHI肉汤培养基，培养条件同前，校正菌液密度为每毫升1.5×108个细胞，备用。

1.6 药物抑菌效果的评估指标和测定方法

最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）：肉眼观察无细菌生长，即振摇后实验管内液体清亮无浑浊或无沉淀生长，且涂片检查无细菌存在，血平板培养小于7个菌落形成的最低药物稀释体积分数为该药的MIC。最小杀菌浓度（minimum bac-tericidal concentration，MBC）：肉眼观察无细菌生长的试管培养物，涂片检查无细菌存在，血平板培养无菌落形成的最低药物稀释体积分数为该药的MBC。

用细菌多点接种仪分别取实验菌液（细菌密度为每毫升1.5×108个细胞）点种于不同稀释体积分数的系

列含药琼脂平皿表面，然后放置于培养箱培养后（培养条件同前）读取MIC和MBC结果。

1.7 溶液的pH值

用蒸馏水冲洗pH计电极，擦干，将电极置于2种药物的原液溶液中测其pH值。

2 结果

复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液原液的pH值分别为9.44和9.12；对4种厌氧菌株的MIC和MBC测定结果见表1和图1：2种冲洗液对4种厌氧菌均有抗菌作用，复方冰硼冲洗液的抗菌效果更好。

3 讨论

感染根管中是以厌氧菌为主的混合感染。刘长虹等[1]从临床感染根管的样本中检出的优势菌有牙

龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌、韦荣菌、消化链球菌、口腔拟杆菌、放线菌、乳杆菌等。粪肠球菌有致病潜力，对牙髓治疗抵抗性强，经常出现在根管治疗失败和持续性根尖周炎病例中[3]。据

此，本实验选择了感染根管的3种优势菌（牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌）和1种顽固菌（粪

肠球菌），来评价冲洗液的消毒效果。

目前最常用的根管冲洗液是次氯酸钠（NaClO）溶液和乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）溶液，另外还有过氧化氢、氯己定、MTAD、氯亚明、抗生素、碘伏、生理盐水等。NaClO具有良好的抗菌性和组织溶解性，价格便宜，使用期限长，缺点是毒性大，气味难闻，能漂白衣服，有潜在腐蚀性，有过敏现象。EDTA能去除根管壁玷污层，具有良好的清洁性，还能抗真菌和粪肠球菌，但使用过多会降低牙本质硬度。过氧化氢能有效杀灭厌氧菌，同时有发泡作用，利于根管内碎屑的排出，但对牙髓组织无溶解性，冲出根尖孔能引起气肿。氯己定具有广谱抗菌性，毒性低且无耐药性，但不具有组织溶解能力。MTAD是由四环素同分异构体、乙酸和Tween80去污剂组成的混合液，具有抗粪肠球菌能力，细胞毒性低，能有效去除玷污层，但不能有效杀灭真菌。氯亚明具有抑菌杀菌性能，但对组织的刺激和毒性大。抗生素具有潜在过敏性和细菌耐药性，不推荐在根管治疗中常规使用。碘伏具有广谱杀菌作用，其性质稳定、刺激性小、毒性小、无抗原性，但其原液呈黄色，易使牙体组织染色，也有可能过敏。各种冲洗液存在一定的优缺点，目前尚无一种非常理想的冲洗液。

本研究将成熟的中药——冰硼散（剔除朱砂成

分）引入口腔医学领域，并根据中药的药性特点，加入白芷和细辛，按照中医组方的原则配制出白色的复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液。冰硼散是用冰片配伍硼砂、朱砂、玄明粉研磨而成，具有良好的解毒、消肿、止痛作用。质量分数0.5%的冰片对葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、大肠杆菌及部分致病性皮肤真菌等有抑制作用。硼砂主要含四硼酸钠，能清热解毒、消肿防腐。玄明粉主要含无水硫酸钠，具有消肿散结等功效。白芷主要含挥发油，能解表散寒、消肿排脓。细辛含挥发油，其主要成分为甲基丁香油酚，具有解热、抗炎、镇静、抗惊厥及局部麻醉作用[4]。5味天然中草药物合成的复方制剂，具有清热、解毒、消肿止痛等功能，其消毒、杀菌作用强，毒副作用小。

本实验中，复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液对牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌和粪肠球菌均有抗菌作用，而复方冰硼冲洗液较冰硼冲洗液的抗菌效果更明显。笔者分析，这是由于白芷和细辛的加入增加了复合制剂的药效之故。此外，本实验结果可以看出，粪肠球菌的耐药性强于其余3种菌株，这是因为粪肠球菌拥有一些毒力因子，如溶解酶、胞嘧啶、凝聚物、外激素等[5]，能抵抗氢氧

化钙的高pH值和其他根管内药物，并能在少量营养物的环境中存活，具有忍受长期饥饿的能力[6]。

根管冲洗液的抗菌作用与其浓度、pH值、温度等有关，药物浓度、pH值、温度越高，杀菌效果越明显[7]。根管冲洗液在根管内可提高局部pH值，使

主根管和侧支根管牙本质小管内的细菌在碱性环境中失去活力。复方冰硼冲洗液的pH值为9.44，冰硼冲洗液为9.12，均具有强碱性，杀菌效果明显。

笔者[8]在前期研究中探讨了复方冰硼冲洗液的清洁性能，本实验进一步证实了其抗菌性。中药来源广泛，性质温和，具有独特的清热消毒止痛作用，费用低，有效期长，且毒副作用小，无细菌耐药性[9]。复方冰硼冲洗液作为根管冲洗液有积极的应用前景。

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（本文编辑 吴爱华）