组织细胞坏死性淋巴结炎患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测及临床意义

张国英，黄子慧，徐卫平，王丹霞

(南京市中西医结合医院检验科，江苏 南京 210014)

组织细胞坏死性淋巴结炎(histiocytic necrotizing lymphadenitis，HNL)又称亚急性坏死性淋巴结炎及 Kikuchi-Fujimoto病。由 Kikuchi和Fujimoto于1972年首先报道[1]，是一种淋巴结反应性增生病变[2]。主要症状是发热，颈部淋巴结肿大[3]。其病因及发病机制尚不清楚，因其临床表现多样，缺乏特异性且发病率较低，临床上误诊率可高达30% ～80%[4]。本研究采用流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测HNL患者及健康人群外周血T淋巴细胞亚群和自然杀伤(natural killer，NK)细胞百分率，探讨其临床意义。

材料和方法

一、研究对象

选择2011年6至12月在南京市中西医结合医院住院的HNL患者51例，其中男19例，女32例，年龄5 ～45 岁，平均(24.2 ±11.9)岁。

所有病例均符合以下诊断标准:(1)发热，多有上呼吸道感染等前驱症状，热型多呈弛张热，应用抗菌药物治疗无效，女性多于男性;(2)可有颈、腋及锁骨上窝淋巴结等部位的轻度痛性肿大，部分患者可有一过性肝脾肿大及皮疹。实验室标准:(1)淋巴结活检显示淋巴结正常结构消失，有大片坏死，周围有组织细胞增多;(2)血常规检查示白细胞总数及中性粒细胞数正常或降低[5-6]。

所有HNL患者均给予强的松口服，并配以中药银僵合剂熏蒸。疗效判定参照以下标准[5-6]:治愈，全身及局部症状消退，血象正常;好转，全身症状消退，局部症状未全消;无效，全身及局部症状加重。51例HNL患者中，经治疗1个疗程后，19例患者治愈，30例患者好转，2例患者无效。

18例正常对照者为健康体检者，排除妊娠或哺乳期妇女，过敏体质或对本试验用药过敏者，心、肝、肾功能损伤及其他肿瘤、免疫性疾病患者。

二、标本采集

采集外周静脉血2 mL，用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝。

三、FCM检测T淋巴细胞亚群和NK细胞

取100 μL上述抗凝血分别加入4个试管中，每管加入抗 CD45-多甲藻黄素叶绿素蛋白(PerCP)10 μL。各管再依次加入抗CD3-异硫氰酸荧光素(FITC)+CD19-藻红蛋白(PE)、抗CD3-FITC+CD4-PE、抗 CD3-FITC+CD8-PE、抗 CD3-FITC+CD16CD56-PE各10 μL，避光室温充分结合20 min后，每管加入溶血素2 mL，避光放置至透明后2500×g离心5 min，弃去上清液，加入磷酸盐缓冲液(PBS)2 mL，在混合器上使试管底部的细胞与PBS溶液混匀，2500×g离心5 min，最后加入0.4 mL PBS溶液混匀直接上流式细胞仪(FACS CantoⅡ，美国BD公司)检测。

四、统计学方法

结 果

一、初诊HNL患者T淋巴细胞亚群及NK细胞百分率

初诊HNL患者CD3+、CD4+淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+及CD16+CD56+细胞百分率均明显低于健康对照组(P＜0.05)，见表1。

二、治愈和好转患者治疗前、后T淋巴细胞亚群及NK细胞百分率变化

19例治愈患者治疗后CD3+、CD4+淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+明显高于治疗前(P＜0.05)，治疗后与健康对照组比较，CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+差异无统计学意义(P＞0.05);30例好转患者治疗后CD3+、CD4+淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+明显高于治疗前(P＜0.05)，治疗后与健康对照组比较，CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞亚群百分率和CD4+/CD8+以及CD16+CD56+差异无统计学意义(P ＞0.05)，见表2。

表1 HNL患者及健康对照组外周血T细胞亚群及NK细胞百分率

表2 治愈和好转患者治疗前、后外周血T细胞亚群及NK细胞百分率

讨 论

HNL在世界各地均有报道，其病因尚不清楚。有学者提出HNL是由于感染使机体的免疫平衡受到破坏而发生自身免疫性疾病或变态反应性疾病样改变[7]。本研究资料分析了51例HNL患者的T淋巴细胞亚群，发现初诊患者CD3+、CD4+细胞以及CD4+/CD8+比值与健康对照组比较明显降低，这与国内一些报道相一致[8-9]。CD4+细胞受抗原刺激后，产生大量细胞因子，促进CD8+T细胞的活性。CD8+细胞能分泌抑制因子，减弱或抑制免疫应答，对CD4+细胞有调节性抑制作用。CD4+/CD8+比例平衡是维持免疫内环境稳定和调控机体免疫网络的重要枢纽，反映了机体免疫反应的调节能力[10-11]。这种免疫平衡紊乱时，可引起继发性免疫缺陷。本研究通过检测发现HNL患者T淋巴细胞亚群水平低于健康对照组，提示HNL患者机体的免疫平衡受到了破坏，辅助性T细胞数量或功能低下，机体识别和杀伤抗原的能力下降。本研究还显示，19例治愈患者和30例好转患者T淋巴细胞亚群逐渐恢复正常，进一步提示HNL患者机体存在细胞免疫功能的紊乱。

NK细胞是重要的天然免疫细胞，具有广谱的抗感染和强大的免疫调控功能，在机体免疫监视过程中发挥重要作用[11-12]。分析本组资料发现，HNL初诊患者CD16+CD56+细胞水平明显降低，进一步说明HNL患者的细胞免疫功能明显受损。19例治愈患者和30例好转患者 CD16+CD56+细胞百分率与治疗前相比没有明显变化，其临床意义还有待今后积累更多病例进行深入研究。

本研究因检测例数较少，对2例无效患者治疗前、后T细胞亚群及NK细胞的百分率未做比较，仍需要更多病例来研究确定。

目前，临床上主要通过淋巴结活检确诊HNL，并主张将口服激素作为HNL最有效的治疗方法，抗菌药物治疗无效[4，13]。但由于 HNL 的临床表现多样，缺乏特异性，病理组织形态较复杂，导致HNL的误诊、误治率较高，往往继发其他免疫系统疾病，如系统性红斑狼疮(SLE)、隐源性机化性肺炎、自身免疫性肝炎等，严重的会引起死亡[14-18]。因此，临床实验室寻找及时、有效的疗效判断指标显得尤为重要。本研究发现HNL初诊患者的细胞免疫功能明显异常，19例治愈患者和30例好转患者治疗后T细胞亚群及NK细胞的百分率逐渐恢复正常，从而认为检测T细胞亚群及NK细胞的百分率对HNL的疗效判断具有一定的临床价值。

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