华东北部地区禽肿瘤性传染病流行病学调查

张 康，龚振华，刘 坤，王丽萍，刘国庆，李 蕾，张丽娟，侯广宇，张秀娟，单 虎

（1.青岛农业大学，山东青岛 266109；2.中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032 ；3.黄岛动物疫病预防控制中心，山东青岛 266000 ； 4.甘肃农业大学，甘肃兰州 730070）

禽肿瘤病主要包括马立克氏病（MD）、禽白血病（AL）、禽网状内皮组织增生症（RE）等，其主要特征是可引起家禽肿瘤性死亡和生产性能下降。鸡群一旦发生这些肿瘤病，造成的经济损失相当严重。这三种肿瘤性疾病在世界各地均流行，尤其是近年来免疫失败和强毒力致病型的毒株不断增多，给目前的养禽业带来巨大的损失[1，2，3]。近年来，国内外采用PCR方法检测鸡马立克氏病、禽白血病、禽网状内皮组织增生症取得了一定的进展[4-6]，对预防和控制禽肿瘤病起到一定的作用。我们采用PCR方法对RE、MD、AL进行了流行病学调查，了解华东北部地区的禽肿瘤病流行状况， 从而为家禽肿瘤性疾病防制提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 引物

用于检测马立克氏病、禽白血病、禽网状内皮组织增生症的引物参考Gong Z等合成的引物[7]，引物的详细资料见表1。

表1 检测马立克氏病、禽白血病、禽网状内皮组织增生症的引物

1.2 试验样品

采集无症状鸡血液样本 600 份，其中琅琊蛋鸡120份、海兰鸡180份、AA肉鸡140份、艾维茵鸡160份；采集有症状鸡肝脏组织样品200份。这些样品均用于检测马立克氏病、禽白血病、禽网状内皮组织增生症。

1.3 试剂

DNA纯化试剂盒、Taq DNA聚合酶消瘦、衰竭；进一步剖检观察病理变化，可见有症状鸡内脏器官普遍肿大，肝、脾、肾表面及切面有大小不等的灰白色肿瘤样结节，观察发现肿瘤发生的部位主要在肝脏，其次依次为脾脏、腺胃、肾。

3.2 用PCR方法对600份健康鸡全血进行检测，检出马立克氏病阳性鸡23只，其中琅琊蛋鸡的阳性率最低，为3.3%，海兰鸡的阳性率最高，为4.4%。检查200份有症状鸡，马立克氏病病死鸡为148只，其中海兰鸡病死率最高，为78.3%，艾维茵鸡病死率最低，为70.9%（表2）。

表2 MD的调查结果

2 实验方法

2.1 样品处理

肝脏组织样品：取肝脏组织样品研磨成匀浆，加入无菌的PBS，离心取上清液，用 DNA纯化试剂盒纯化DNA。首先用蛋白酶处理样品上清，加入等体积的无水乙醇，用微型离心层析柱离心，冲洗后回收纯化的DNA。血液样品DNA纯化与此相同。

2.2 样品检测

将采集的600份无症状鸡全血样品以及200份有症状鸡肝组织样品提取DNA后，进行PCR反应，检测马立克氏病、禽白血病、禽网状内皮组织增生症病毒核酸。先95℃ 5 min使模板充分变性，然后94℃1min变性、53℃ 1min退火、72℃ 2min 延伸，共进行35个循环，最后72℃ 10 min使产物延伸完整。

3.3 用PCR方法对600份健康鸡全血进行检测，检出禽白血病阳性鸡58只，其中海兰鸡的阳性率最低，为 8.3%，琅琊蛋鸡的阳性率最高，为11.6%。检查200份有症状鸡，禽白血病病死鸡为11只，其中海兰鸡病死率最高，为6.6%，AA肉鸡病死率最低，为4.4%（表3）。

表3 AL的调查结果

3 结果

3.1 疑似感染禽肿瘤病的鸡冠苍白皱缩、发绀、

3.4 用PCR方法对600份健康鸡全血进行检测，检出禽网状内皮组织增生症阳性鸡11只，其中艾维茵鸡的阳性率最低，为4.3%，海兰鸡的阳性率最高，为5.5%。检查200份有症状鸡，禽网状内皮组织增生症病死鸡为11只，其中AA肉鸡病死率最低，为4.4%，海兰鸡病死率最高，为6.7%（表4）。

表4 RE的调查结果

4 讨论与分析

4.1 马立克病鸡大部分终生带毒，病毒不断从脱落的羽毛囊皮屑中排出有传染性的MDV，这就是MD的传播难于控制根本原因。出现临诊症状的病鸡有少部分能康复，但多数以死 亡告终，且多发生于肉鸡和饲养密度较大的鸡场，没有明显的季节性，多发于冬春[8]。本次调查对MD的患鸡和死鸡进行剖检后发现，病死鸡主要表现为内脏型病变。200份有症状鸡中，MD病死鸡为148只，其中海兰鸡病死率最高，为78.3%，艾维茵鸡病死率最低，为70.9%。600份无症状鸡中琅琊蛋鸡的阳性率最低，为3.3%，海兰鸡的阳性率最高，为4.4%。鸡群在接种疫苗之后，发病率明显地降低，很大程度地减少了损失，但一些鸡群仍然存在马立克氏病毒感染，造成不同程度的损失。由此可见，应加强MD疫苗免疫，减少病原，减轻危害。

4.2 禽白血病主要引起鸡死亡或消瘦、生长和发育不良，同时引起机体抵抗力下降和免疫抑制，成为危害养禽业的主要疾病之一，目前还没有合适的疫苗和有效的药物可预防和治疗这种疾病[8]。本次调查对600份无症状鸡全血进行检测，发现禽白血病阳性鸡58只，其中海兰鸡的阳性率最低，为8.3%，琅琊蛋鸡的阳性率最高，为11.6%。检查200份有症状鸡，禽白血病病死鸡为11只，其中海兰鸡病死率最高，为6.6%，AA肉鸡病死率最低，为4.4%。由此可见，禽白血病在临床上感染率较高，应重视种群净化工作，淘汰阳性种鸡、种蛋和种雏，选择试验阴性母鸡的受精蛋进行孵化，在隔离条件下出雏饲养。

4.3 网状内皮组织增生症又称生长抑制综合征，引起严重的免疫抑制或免疫耐受，患病禽瘦小，羽毛发育异常[8]。调查发现，目前网状内皮组织增生症存在一定感染，对600份健康鸡全血进行检测，检测禽网状内皮组织增生症阳性鸡11只，其中艾维茵鸡的阳性率最低，为4.3%，海兰鸡的阳性率最高，为5.5%。检查200份有症状鸡，禽网状内皮组织增生症病死鸡为11只，其中AA肉鸡病死率最低，为4.4%，海兰鸡病死率最高，为6.7%。应采取净化措施，淘汰阳性鸡，减少经济损失。

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