艾灸关元、足三里穴对戊四氮致痫大鼠血清中IL－6的影响

黄静波，张艳晓，张余山，程为平△

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040;2.黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨 150040）

癫痫是一种常见神经系统慢性疾病，该病临床常见症状为突然丧失意识、摔倒在地、四肢抽搐、口吐涎沫或有发作性意识障碍等。古代中医将癫痫归为痫症范畴，治疗上重视灸法。现代中医治疗癫痫在灸法上应用较少，但效果显著。目前癫痫的发病机制还不完全清楚，国内外研究表明，癫痫疾病的发生可能与免疫失调有关。为了进一步研究艾灸抗癫痫的作用机制，本实验拟通过戊四氮致痫大鼠模型，观察艾灸治疗对癫痫大鼠血清中IL－6含量的影响，探讨艾灸抗癫痫的可能机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康成年雌性Wistar大鼠27只，体重（200±15）g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.2 实验环境

研究环境为室温（23.00 ±4.78）℃，湿度（12.30±4.06）%的实验室内。

1.3 实验药品与仪器

艾条（南阳市卧龙汉医艾绒厂生产，自制成香烟型艾条，直径8 mm，长200 mm），多聚甲醛（北京益利精细化学品公司生产），戊四氮（sigma公司生产），丙戊酸钠（江苏恒瑞医药生产），IL－6酶联免疫试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）。

1.4 癫痫模型的制作

随机抽取24只大鼠制备癫痫模型。腹腔注射阈下剂量戊四氮（PTZ）35.0 mg/kg，每天1次，注射后观察（30 ±10）min，参照 Racine［1］的6 级评分标准:0 级:无任何反应;Ⅰ级:面部抽搐及咀嚼;Ⅱ级:点头和（或）甩头;Ⅲ级:前肢阵挛，但无直立位;Ⅳ级:前肢阵挛伴伸直;Ⅴ级:前肢及全身阵挛，失去平衡，跌倒。Ⅲ级及以下为轻型发作，Ⅳ级及以上为重型发作。点燃标准:大鼠连续5次PTZ腹腔注射，均表现为Ⅳ级或Ⅴ级的发作，评定大鼠癫痫发作的行为表现。空白组3只按10 ml/kg腹腔注射生理盐水。

1.5 分组

将造模成功的24只大鼠随机分为模型组（8只）、艾灸组（8只）、药物组（8只），将正常的3只大鼠，做为空白对照组。

1.6 治疗方法

在大鼠处于癫痫间歇期时，分别将空白组、模型组、药物组及艾灸组的大鼠捆缚于鼠板上。

艾灸组将大鼠固定后，持自制香烟型艾条分别于关元穴和双侧足三里穴位上方2～3 cm处悬灸，采用温和灸补法，以大鼠出现疼痛及抽搐反应为度，治疗时间为每个穴位15 min［2］。穴位的定位及选取参考《实验针灸学》［3］，以比较解剖和骨度分寸法为依据。足三里穴位于膝关节后外侧，腓骨小头下方约5 mm处。关元穴位于脐下约25 mm处。药物组大鼠给予157.5 mg/kg丙戊酸钠悬浊液灌胃治疗。各治疗组于造模后第2天开始治疗，每日1次，疗程20天。模型组、空白组大鼠仅捆缚于鼠板上，不给予任何治疗。

1.7 酶联免疫法测血清中IL－6的含量

治疗结束后分别将空白组、模型组、药物组及艾灸组的大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，开胸暴露心脏，从心脏中抽取5 ml血液，3000 r/min离心5 min，取上清液用酶联免疫法按试剂盒说明书方法测定血清中IL－6的含量。

1.8 统计学分析

使用SPSS17.0软件处理，结果数据用均数±标准差表示，组间比较使用t检验。

2 结果

2.1 艾灸关元、足三里穴对于癫痫大鼠行为学变化的影响

所选取的24只大鼠在腹腔注射戊四氮（30±10）min后均出现了典型的癫痫样发作，模型组与空白组发作等级对比，经检验差异有统计学意义（P＜0.01），提示癫痫大鼠造模成功。全程治疗结束后，再次将模型组、药物组及艾灸组大鼠分别腹腔注射戊四氮诱发癫痫发作，观察（30±10）min后，模型组与艾灸组大鼠发作等级对比，经检验差异有统计学意义（P＜0.01），提示艾灸组有治疗意义。艾灸组与药物组发作等级对比，经检验差异无统计学意义（P＞0.05），提示艾灸组与药物组大鼠相比，没有明显差异。具体见表1。

2.2 艾灸关元、足三里穴对于癫痫大鼠血清IL－6水平变化的影响

模型组与空白组相比大鼠血清IL－6水平明显改变，经检验差异有统计学意义（P＜0.01），提示癫痫大鼠造模成功。模型组与艾灸组大鼠血清IL－6含量经检验差异有统计学意义（P＜0.01），提示艾灸组治疗有效，即艾灸关元及双侧足三里穴可以降低癫痫大鼠血清IL－6水平，有治疗意义。艾灸组与药物组大鼠血清IL－6水平经检验差异无统计学意义（P＞0.05），提示艾灸组与药物组治疗效果没有明显差异。具体见表1。

表1 艾灸关元、足三里穴对于癫痫大鼠行为学及血清IL－6水平变化的影响（±s）

表1 艾灸关元、足三里穴对于癫痫大鼠行为学及血清IL－6水平变化的影响（±s）

注:与模型组比较，*P ＜0.01;与药物组相比，▲P ＞0.05。

组别 n 发作等级 IL－6（pg/ml）空白组0 ±0 8.833 ±0.132模型组 8 4.73 ±0.47 11.984 ±0.642艾灸组 8 3.63±0.63＊▲ 9.497±0.883＊▲药物组3 8 3.30 ±0.56 9.518 ±0.555

3 讨论

癫痫是指脑神经元异常和过度超同步化放电造成的阵发性脑功能障碍。它不仅对患者正常生活产生了极大地影响，更因为脑神经元反复异常放电导致脑水肿、智力异常等后果，严重影响了患者的身体健康。癫痫的病因复杂多样，其发病机制还尚不明确。朱长庚教授认为免疫和内分泌因素也参与了癫痫的发生，首先提出“神经－免疫－内分泌”网络失衡学说［4］。其中细胞因子在“神经－免疫－内分泌”网络中发挥了重要的作用。细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞（如血管内皮细胞、表皮细胞和成纤维细胞等）经刺激而合成分泌的一类小分子量可溶性蛋白或蛋白多肽。具有免疫调节、促进各种细胞的生长和分化、参与和调节炎症反应、抗感染和抗肿瘤等作用。在中枢神经系统中，神经元与神经胶质细胞都可分泌细胞因子，并具有细胞因子的受体。IL－6由单核吞噬细胞、纤维母细胞、血管内皮细胞等细胞合成。在神经系统中，神经元、胶质细胞与星形胶质细胞均可分泌IL－6，但海马区内的IL－6表达调节机制尚不完全明确。IL－6作为一种致炎因子和神经递质，正常情况下其颅内含量很低，但在炎症、损伤、卒中或感染时，其表达均显著增加［5］。研究证明，癫痫的发作对IL－6表达有直接影响。动物实验发现在向动物大脑杏仁核内注射海人酸导致癫痫持续状态7天后，动物海马中IL－6释放水平增加。临床试验也已证实癫痫患者血清中IL－6水平明显高于正常人群。其机制可能是IL－6可升高脑细胞中Glu含量并降低GABA含量，使神经元兴奋性增高，从而促使癫痫的发作［6］。IL－6还可促进大鼠中枢神经系统中B细胞分化成可分泌免疫球蛋白的浆细胞，参与脑组织的免疫炎症反应［7］。一般认为IL－6有保护作用，可减轻炎症反应，增加氧化应急反应。Penkowa等发现IL－6缺乏可使KA诱导的脑损伤的易感性增加，并且能增强癫痫的发作反应，另一方面，IL－6还有促进神经变形的作用［8］。IL－6的长时间高表达可促使海马与小脑的星形胶质细胞明显增生，造成海马区脑电图的痫样改变［7］。此外IL－6还可促进星形胶质细胞产生神经生长因子，后者可影响神经元的兴奋性，参与癫痫的产生。

癫痫大鼠海马IL－6表达的增加，初期可能是一种保护机制，可以保护神经元，但持续高表达则可能通过增加胶质细胞的增生、海马发作性异常放电等机制参与癫痫点燃过程［9］。IL－6对中枢神经系统的作用具有双面性，就像一把双刃剑，既对中枢神经系统有保护作用又能促进癫痫的发生，这可能与IL－6的浓度相关，低浓度可起到营养保护作用，高浓度可导致癫痫损伤。艾灸可使IL－6有不同程度的下降，可能对维持IL－6在体内的适当水平有利，减轻癫痫发作的程度。

目前已有实验证实针灸可通过改善细胞免疫功能来治疗癫痫［10］，而艾灸治疗癫痫的机制还有待于进一步的研究，可能会给癫痫的治疗带来良好的应用前景。

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