分光光度法测定溪黄草及其近缘种中总黄酮含量

黄冬兰，陈小康，徐永群

（韶关学院 化学与环境工程学院，广东 韶关 512005）

分光光度法测定溪黄草及其近缘种中总黄酮含量

黄冬兰，陈小康，徐永群

（韶关学院 化学与环境工程学院，广东 韶关 512005）

采用微波辅助萃取法提取溪黄草及其近缘种中的黄酮类化合物，以芦丁为对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠作为显色体系，用可见分光光度法测定了溪黄草及其近缘种中总黄酮的含量.该方法在0.00~1.25 mg范围内吸光度与含量呈良好的线性关系，加标回收率为97.43%~103.0%，相对标准偏差（n=6）为1.83%.结果表明：溪黄草及其近缘种中总黄酮含量差异不大.该方法操作简便、结果稳定、重复性好，可用于溪黄草及其近缘种中总黄酮含量检测，实验结果为溪黄草及其近缘种的开发和利用奠定了基础.

溪黄草；近缘种；微波萃取；总黄酮

溪黄草为广东民间习用草药，常用于清热利湿、凉血散淤、治急性黄疸肝炎、急性胆囊炎等症，并被用作成药消炎利胆片、胆石通胶囊及复方胆通胶囊的原料之一［1］.《中药大辞典》记载该品来源仅为唇形科香茶属植物线纹香茶菜Rabdosia lophanthoides的全草一种，但是目前临床上使用的溪黄草除正品线纹香茶菜外，还有其同属植物狭基线纹香茶菜R.Iophanthoides var.gerardianus、纤花线纹香茶菜R.Iophanthoides var.graciliflorus及溪黄草Rabdosia serra等数种近缘种植物［2］.溪黄草主要含有萜类、黄酮类、酚类、氨基酸等活性成分［3］.其中，黄酮类为一类生物活性较强的成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗溃疡、降血脂、抗心律失常、抑制表皮黑色素生成、防止皮肤癌等功效［4-5］.楼小红曾对溪黄草根茎叶不同部位总黄酮的含量进行测定［6］，但溪黄草及其近缘种中总黄酮含量的比较研究未见报道.本文作者采用微波辅助提取-分光光度法对溪黄草及其近缘种中总黄酮的含量进行了测定，旨在为溪黄草及其近缘种资源的合理利用提供理论依据.

1 实验部分

1.1 实验样品

1.2 仪器与试剂

仪器：722 S分光光度计 （上海棱光技术有限公司）；KJ23C-AN2微波炉 （广东美的微波炉制造有限公司）；AUY-220分析天平（岛津国际贸易（上海）有限公司）；878B粉碎机（江苏省金坛市通济仪器厂）.

试剂：芦丁标准品，中国药品生物制品检定所；无水乙醇、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠，所用试剂均为市售分析纯；实验用水为去离子水.

1.3 实验方法

1.3.1 芦丁标准溶液的制备

准确称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10.4 mg置于100 mL烧杯中，加适量70%乙醇溶液使之溶解，定量转移到50.00 mL容量瓶中，用70%乙醇溶液将其定容至刻度线，摇匀，即得到0.208 mg/mL的芦丁标准溶液.

1.3.2 样品溶液的制备

准确称取溪黄草及其近缘种粉末1.000 0 g置于聚四氟乙烯消解灌中，加入20 mL 70%的乙醇溶液，微波中火提取4 min，冷却后过滤，收集滤液，用70%乙醇定容至50.00 mL，冷藏备用.

2 结果与讨论

2.1 样品提取条件的选择

选择4因素3水平正交试验，考察了微波功率（中火、中高火、高火）、微波时间（4、5、6 min）、乙醇浓度（65、70、75%）和料液比（1∶10、1∶15、1∶20）比对提取率的影响.实验结果表明，当微波功率为中火，微波时间为4 min，乙醇浓度为70%，料液比为1∶20时，溪黄草及其近缘种中总黄酮提取率最高，因此选择该条件为样品的提取条件.

2.2 测定波长的选择

准确移取5.00 mL标准对照品液至25 mL比色管中，先加入1.00 mL 5%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置6 min，再加入1.00 mL 10%硝酸铝溶液，摇匀，放置6 min后，再加入10.00 mL 4%氢氧化钠溶液，最后用70%乙醇溶液定容至25 mL，摇匀.以试剂空白作参比，采用722S可见分光光度计于450～570 nm波长范围内进行光谱扫描.结果表明：芦丁在510 nm处有最大吸收峰；准确移取样品溶液1.00 mL，同上操作显色后进行光谱扫描，发现样品在510 nm处有最大吸收峰.故选择510 nm作为最佳测定波长.

2.3 标准曲线的绘制

分别准确移取芦丁标准溶液 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL 于 50.00 mL 比色管中， 先加入1.00 mL 5%亚硝酸钠溶液，混匀，静置6 min，再加入1.00 mL 10%硝酸铝溶液，混匀，静置6 min，再加入10.00 mL 10%氢氧化钠试液，最后用70%乙醇溶液定容，摇匀.放置10 min后，以试剂空白作参比，在510 nm波长处测定其吸光度.以质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线.其线性方程为y=0.469 x+0.001 8，相关系数为0.999 7.表明芦丁在0.00～1.25 mg范围内有较好的线性.

表1 芦丁质量与吸光度的关系

图1 芦丁的标准曲线

2.4 溪黄草及其近缘种中总黄酮含量的测定结果

按照1.3.2所述的方法提取总黄酮制得样品液，精密吸取样品液1.00 mL，按照2.2所述方法显色后测定溪黄草及其近缘种样品提取液的吸光度值，并根据标准曲线方程计算样品中总黄酮的含量，结果见表2.

表2 溪黄草及其近缘种总黄酮含量的测定结果（n=3）

溪黄草及其近缘种中总黄酮含量测定结果表明，4种植物均含有丰富的黄酮类化合物，且四者所含的总黄酮含量差异不大.因此，民间以狭基线纹香茶菜、纤花线纹香茶菜和溪黄草作为正品溪黄草（线纹香茶菜）入药有一定依据，至于其临床上是否能作为正品溪黄草等同使用，仍待深入研究.

2.5 方法评价

2.5.1 精密度实验

在所选的测试条件下，以某一浓度的标液为考察对象，平行测定8次进行作仪器稳定性考察实验，吸光度值分别为 0.420、0.418、0.421、0.422、0.419、0.415、0.417 和 0.423，其 RSD 值为 0.64%，表明仪器精密度良好.

2.5.2 稳定性实验

准确移取一定量的样品溶液，按上述方法操作，测定样品溶液在室温下放置0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h后的吸光度，测得其RSD值为1.2%，即样品溶液在3 h内基本稳定.

2.5.3 重现性实验

同一份样品，分别取样5次，按最佳条件处理后测定，按上述操作方法测定其吸光度，测得其RSD值为2.1%.实验结果表明，样品的重复性较好，可满足分析的要求.

2.5.4 加标回收率实验

准确称取6份已知总黄酮含量的溪黄草样品1.000 0 g，加入一定量的芦丁标准对照品，按照1.3.2所述的方法萃取制得样品液，精密吸取样品液1.00 mL，显色后测定其吸光度，计算平均回收率，实验结果见表3.

表3 加标回收率实验结果(n=6)

3 结论

采用微波辅助提取-分光光度法测定了溪黄草及其近缘种中的总黄酮的含量，该方法操作简便、精密度、稳定性良好，为溪黄草及其近缘种中总黄酮含量测定提供了一种简便可行的方法.测定结果表明，正品溪黄草及其近缘种中总黄酮含量差异不大.因此，民间以狭基线纹香茶菜、纤花线纹香茶菜和溪黄草作为正品溪黄草（线纹香茶菜）入药有一定依据，至于其临床上是否能作为正品溪黄草等同使用，仍待深入研究.

：

［1］肖树雄,杨启存,吕红.溪黄草的来源及与混淆品的鉴别［J］.中药材,1993,16(6):24-26.

［2］黄珊珊.中药溪黄草四种基源植物的染色体数初报［J］.热带亚热带植物学报,2011,19(4):374-376.

［3］吴剑峰.溪黄草的研究综述［J］.时珍国医国药,2003,14(8):498-500.

［4］贾国惠,贾世山.甘草中黄酮的药理作用研究进展［J］.中国药学杂志,1998,33(9):513-515.

［5］季宇彬,姜薇,范玉玲,等.甘草黄酮的研究进展［J］.中草药,2004,35(9):5-6.

［6］楼小红.溪黄草根茎叶不同部位总黄酮的含量测定［J］.中国医药学报,2004,19(5):316-317.

Determination of total flavones fromRabdosia lophanthoidesand its relative species by spectrophotometry

HUANG Dong-lan,CHEN Xiao-kang,XU Yong-qun
(College of Chemistry and Environmental Engineering,Shaoguan University,Shaoguan 512005,Guangdong,China)

Flavonoids were extracted from Rabdosia lophanthoides and its relative species by microwave-assisted method.Al(NO)3-NaNO2-NaOH colorimetric method was applied to determine the total flavonoids by spectrophotometry with rutin as the standard.The content of the standard was well correlated to its optical density in the range of 0.00～1.25 mg.And the addition standard recoveries were in the ranges of 97.43%～103.0%,the standard deviation (n=6)of measurement was 1.83%.The method was proved to have the advantages of simple operation,stability and good repeatability,and it would be helpful for determining the total flavonoids of Rabdosia lophanthoides and its relative species.The result provided scientific basis for exploitingRabdosia lophanthoidesand its relative species.

Rabdosia lophanthoides；relative species；microwave-assisted extraction；total flavonoids

O657.3

1007-5348（2013）08-0031-04

2013-08-12

韶关市科技计划资助项目(201009).

黄冬兰（1983-），女，广东韶关人，韶关学院化学与环境工程学院讲师，主要从事分子光谱分析和天然产物开发利用研究.

（E D.：Y， D）