苍耳子炒制对羧基苍术苷和苍术苷的影响

朵 睿， 陈 燕， 刘玉红， 黄志芳， 刘云华， 易进海*

(1.四川省中医药科学院，四川成都 610041;2.泸州医学院，四川泸州 6460001)

苍耳子 (Xanthii Fructucs)为菊科植物苍耳Xanthium sibiricumPart et Widd的干燥成熟带种皮的果实，具有散风除湿、通鼻开窍的功效［1］。苍耳子有毒，《南方主要有毒植物》记载“苍耳，有毒部位，全株;以果实为最毒;鲜叶比干叶毒，嫩叶比老叶毒”。苍耳子使用不当或长期使用会出现肾脏、肝脏、心脏损伤或是腹痛、恶心、呕吐等不良反应［2］。苍耳子所含化学成分复杂，现代研究表明苍耳子中的主要毒性成分为水溶性苷类:羧基苍术苷与苍术苷，以及其衍生物［3-4］。这些水溶性苷类可抑制人的正常肝细胞株L-02和正常大鼠肝细胞BRL增殖，且随着浓度升高，抑制作用增强，这与苍耳子中毒表现一致，因此被公认为是苍耳子的主要毒性成分［3］。

苍耳子必需通过炮制，减轻毒性，才能入药［5］，如《本草纲目》有云 “入药炒熟，去刺用”，宋· 《重修政和经史证类备用本草》曰“炒”，随后相继出现了“微炒”、“炒令香”、“炒熟”、“培干”等记载。《中国药典》规定苍耳子应炒至黄褐色，去刺后应用［1］。

苍耳子来源广泛，价格低廉，市售苍耳子药材质量参差不齐，因此有必要规范苍耳子的炮制方法。本实验以主要毒性成分为评价指标，研究炒制对苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷的影响，揭示苍耳子炒制的科学内涵及其合理性，对苍耳子加工炮制具有重要参考价值。

1 材料与仪器

1.1 样品制备 3批苍耳子购于成都荷花池药材市场，产地均为四川成都。经四川省中医药科学院舒光明研究员鉴定为菊科植物苍耳的干燥成熟果实。

净制:取苍耳子，除去杂质，即得。炒黄:取净苍耳子100 g，文火炒至表面浅黄色时 (约4 min)取出放凉。炒焦:取净苍耳子100 g，中火炒至表面黄褐至焦褐色，断面焦黄色时 (约8 min)取出放凉。炒炭:取净苍耳子100 g，武火炒至表面焦黑色时 (约12 min)取出放凉。

1.2 材料 Agilent 1200型高效液相色谱仪 (包括四元泵，DAD检测器，柱温箱，自动进样器，工作站);HU10300/40B超声波清洗仪;岛津AUW220D型十万分之一天平;Sigma3K15高速冷冻离心机;Millipore Milli-Q Integral 3超纯水机。乙腈为美国Fisher色谱纯;其余试剂均为分析纯。羧基苍术苷、苍术苷对照品自制，纯度大于98.0%，经理化性质和光谱数据分析，鉴定其结构。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Agilent ZORBAX SB-phenyl色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱;流动相 A相为乙腈，B相为0.01 mol/L磷酸二氢钠溶液 (pH=6)，梯度洗脱，0～8 min(12%A)，8～25 min(12%～25%A);体积流量1.0 mL/min;检测波长203 nm;柱温35℃。对照品溶液及供试品溶液的色谱图见图1。

图1 对照品及苍耳子样品的HPLC图Fig.1 HPLC chromatograns of reference substances and Xanthii Fructus sample

2.2 对照品溶液的制备 精密称取羧基苍术苷9.72 mg、苍术苷10.30 mg，置10 mL量瓶中，加超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取上述对照品溶液各1 mL，置10 mL量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中含羧基苍术苷0.097 2 mg，苍术苷0.103 0 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取苍耳子粉末(过三号筛)约1.0 g，置具塞锥形瓶中，加水20 mL，精密称定质量，超声 (功率250 W，频率40 kHz)处理40 min，取出，离心 (12 000 r/min，5 min)，取上清液作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取2.2项下羧基苍术苷和苍术苷对照品溶液各 0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.0 mL，分别置于10 mL量瓶中，加超纯水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取10 μL注入液相色谱仪中，以对照品质量浓度 (μg/μL)为横坐标，峰面积 (A)为纵坐标，绘制标准曲线。结果羧基苍术苷的标准曲线为Y=421.4X－0.346 0(r=0.999 9)，线性范围为0.097 2～1.944 μg;苍术苷的标准曲线为Y=461.6X－3.984(r=0.999 9)，线性范围为 0.103 0～2.060 μg。

2.5 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液 (02炒黄)10 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，按上述色谱条件测定，记录峰面积。羧基苍术苷的RSD为0.57%(n=5);苍术苷的RSD为0.34%(n=5)。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液 (02炒黄)，于室温0、2、4、6、12、24 h进样测定，羧基苍术苷的RSD为0.52%(n=5);苍术苷的RSD为0.83%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 重复性 取同一批苍耳子粉末 (02炒黄)约1.0 g，共5份，精密称定，按照2.3项制备供试品溶液，记录峰面积并计算。羧基苍术苷的平均质量分数为0.17 mg/g(RSD=0.7%);苍术苷的平均质量分数为1.41 mg/g(RSD=0.6%)。

2.8 加样回收率 取已知含有量的苍耳子样品(02炒黄)0.5 g，共6份，精密称定，准确加入适量的对照品，照2.1项下操作，测定，计算回收率。羧基苍术苷的平均回收率为96.4%(RSD=0.5%);苍术苷的平均回收率为97.8%(RSD=1.3%)(n=6)。

2.9 检测限与定量限 将2.1项下的对照品溶液，用甲醇逐级稀释，进样测定，按3倍和10倍信噪比计算出羧基苍术苷和苍术苷的检测限和定量限分别为1.2 ng、1.5 ng和4.1 ng、4.7 ng。

2.10 样品测定 照2.3项下方法制备苍耳子样品的供试品溶液，分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪测定，在2.1项色谱条件下进行测定，计算各样品中羧基苍术苷与苍术苷，结果见表1。

表1 苍耳子中羧基苍术苷与苍术苷的测定结果Tab.1 Results of contents determinaton of carboxyatractyloside and atractyloside in Xanthii Fructus

3 讨论与结论

苍耳子为有毒中药，近年来由于食用、过量使用苍耳子或使用炮制不当的苍耳子导致中毒、甚至死亡的病例时有报道。苍耳子中主要毒性成分为羧基苍术苷和苍术苷，其重要的毒性机制是对线粒体膜外氧化磷酸化的抑制作用［2］，其中羧基苍术苷是苍术苷的十倍［6-7］。

本实验对3批生品苍耳子 (01、02、03)进行净制、炒黄、炒焦、炒炭加工炮制，并检测其毒性成分羧基苍术苷与苍术苷。结果显示，生品苍耳子中羧基苍术苷含有量较高，不含苍术苷;而炒黄后羧基苍术苷的含有量降低约90%，转化为苍术苷。炒焦苍耳子中基本不含羧基苍术苷，苍术苷有小幅下降;炒炭后苍术苷显著降低或检不出。炒制使羧基苍术苷转化为苍术苷，再进一步降低苍术苷的量，可显著降低苍耳子的毒性，故认为苍耳子应炒制入药。这与文献［8］报道苍耳子生用有毒，必须炮制后使用相一致。

本实验首次研究炒制对苍耳子中羧基苍术苷和苍术苷含有量的影响，结果表明炒黄或炒焦可显著降低毒性成分的量，故认为苍耳子入药时，应按药典方法炒至黄褐色，方可起到减毒存效的作用。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:115.

［2］王 璟，莫传丽，却 翎.苍耳子不良反应的研究进展［J］.中草药，2011，42(3):613-616.

［3］汪 洋.苍耳子的毒性物质基础及中毒机制研究［D］.上海:第二军医大学药学院，2010.

［4］Obatomi D K，Bach P H.Biochemistry and toxicology of the diterpenoid glycoside atractyloside［J］.Food Chem Toxicol，1998，36(4):335-346.

［5］熊 颖，刘启德，宓穗卿.苍耳子化学研究进展［J］.广东药学，2005，15(6):63-65.

［6］Luciani S，Martini N，Santi R.Effects of carboxyatractyloside a structual analogue of atractyloside on mitochondrial oxidative phosphorylation［J］.Life Science，1971，10(2):961-968.

［7］Kephalas T，Ailkaridis F，Pantelia K.Production of carboxyatractyloside and atractyloside by cell suspension cultures ofAtractylis gummifera［J］.Phytochemistry，1999，51(6):53-54.

［8］曹丽萍，臧志和，廖洪利，等.苍耳子毒性成分及炮制工艺研究进展［J］.研究进展，2008，9(5):23.