GC法测定肚痛健胃整肠丸中薄荷脑、愈创木酚和丁香酚

张 伟， 胡世强， 陈 娟， 顾利红

(广州市药品检验所，广东广州 510160)

肚痛健胃整肠丸由黄柏、桂皮、丁香、陈皮、甘草五味中药和木馏油、薄荷脑制成，临床上用于消化不良，水土不服和食物不洁所致肠胃不适，腹胀肚痛，泄泻，且具有保护胃黏膜作用及调节肠道菌群功能的作用［1］。木馏油是由山毛榉或类似植物干馏得到的酚类混合物，具有止泻、抑制肠道异常运动、牙痛等功效，其中愈创木酚为主要活性成分。丁香具有温中降逆，补肾助阳的功效，其中丁香酚有抑菌、麻醉、解热、抗氧化、抗肿瘤、促进透皮吸收、祛蚊等多种药理活性［2］。本品现执行进口药品注册标准，定量测定项下以气相色谱法测定木馏油中的主要活性成分愈创木酚，而方中的薄荷脑、丁香中丁香酚等挥发性成分只有定性鉴别，且操作方法较繁琐。本试验参考现有的文献［3-13］，用气相色谱法同时测定方中薄荷脑、愈创木酚、丁香酚等挥发性成分，按照拟定的标准条件进行。试验结果显示，各待测峰和内标峰分离良好，且阴性对照无干扰，为该标准的进一步提高积累了实验数据。

1 仪器、试药与样品

Agilent7890A气相色谱仪 (GC);乙酸乙酯为分析纯 (广州化学试剂厂);对照品薄荷脑 (批号110728-200506)，对照品愈创木酚 (批号111510-200202)，对照品丁香酚 (批号110725-201112)，均购自中国药品生物制品检定所;联苯为上海化学试剂有限公司生产;肚痛健胃整肠丸 (批号W20302，W20202，W20502)，香港李万山药厂有限公司生产。

2 色谱条件

HP-5 GC column色谱柱 (30 m×0.32 mm，ID 0.25 μm);柱温由80℃升温至190℃，升温速率5℃/min;检测器为FID，250℃;进样口为230℃;分流比10∶1;载气为N2，1 mL/min;尾吹气29 mL/min;进样量1 μL;理论板数按愈创木酚峰计算，应不低于10 000。

3 实验方法

3.1 内标溶液的制备 取内标物联苯适量，精密称定，用乙酸乙酯溶解并稀释成4 mg/mL的溶液，摇匀，即得。

3.2 对照品溶液的制备 分别取薄荷脑对照品约8 mg、愈创木酚对照品约18 mg、丁香酚对照品约4 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，精密加入内标溶液2 mL，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。取1μL注入气相色谱仪中，记录色谱图。

3.3 供试品溶液的制备 取重量差异项下的供试品适量，研细，取约0.43 g，精密称定，置10 mL量瓶中，精密加入内标溶液2 mL，加乙酸乙酯适量，超声处理 (功率250 W，频率33 kHz)20 min，放冷，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀，滤过，即得。取1 μL注入气相色谱仪中，记录色谱图。

3.4 阴性对照溶液的制备 取阴性对照样品 (除薄荷脑、木馏油、丁香外，其余按处方投料，依照工艺方法制备，即得)0.43 g，按3.3项下方法制成阴性对照溶液。取1 μL注入气相色谱仪中，记录色谱图，见图1。

图1 肚痛健胃整肠丸中薄荷脑、愈创木酚、丁香酚的GC色谱图Fig 1 GC chromatograms of menthol，guaiacol and eugenol in Dutong Jianwei Zhengchang Pills

3.5 线性关系考察 取薄荷脑对照品约200 mg、愈创木酚对照品约450 mg、丁香酚对照品约100 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL，置 10 mL 量瓶中，精密加入4.351 mg/mL的内标溶液2 mL，加乙酸乙酯至刻度，摇匀，即得。按上述所定色谱条件，注入气相色谱仪中，测定峰面积，记录色谱图，并以对照品进样质量浓度 (X，mg/mL)为横坐标，以对照品与内标峰面积 (Y)为纵坐标，计算得到线性回归方程。薄荷脑Y1=0.898 4X+0.039，r=0.999 8;愈创木酚Y2=0.947 5X－0.115 1，r=0.999 7;丁香酚Y3=0.769 5X+0.000 7，r=0.999 9。试验结果表明薄荷脑进样质量浓度在0.084 97～3.398 8 mg/mL、愈创木酚在0.183 1～7.324 mg/mL、丁香酚在0.040 4～1.616 mg/mL范围内均有良好的线性关系。

3.6 精密度试验 取混合对照品溶液，重复进样6次，按所定的色谱条件进样测定，结果薄荷脑、愈创木酚、丁香酚的RSD分别为0.3%、0.7%、0.5%，结果表明仪器精密度良好。

3.7 稳定性试验 取同一批样品 (批号W20502)适量，按3.3项下方法制成供试品溶液，精密吸取供试品溶液 1 μL，分别在 0、2、4、8、12、24 h按所定的色谱条件进样测定，结果薄荷脑、愈创木酚、丁香酚的RSD分别为0.6%、0.7%、0.4%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.8 重复性试验 取同一批样品 (批号W20502)适量，按3.3项下方法平行制备6份供试品溶液，进样测定，结果测得薄荷脑的平均质量分数为15.17 mg/g;愈创木酚的平均质量分数为50.73 mg/g;丁香酚的平均质量分数为6.27 mg/g;RSD分别为0.5%、0.6%、0.8%。结果表明该方法重复性良好。

3.9 加样回收试验 取同一批样品 (批号W20502)适量，取6份，每份约0.21 g，置10 mL量瓶中，分别精密加入1.594 3 mg/mL薄荷脑对照品溶液2 mL，5.126 6 mg/mL愈创木酚对照品溶液2 mL，0.634 3 mg/mL丁香酚对照品溶液2 mL，按3.3项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1，薄荷脑平均回收率为100.4%，愈创木酚平均回收率为99.6%，丁香酚平均回收率为100.2%;RSD分别为1.14%、1.23%、1.03%。结果表明该方法回收率良好。见表1。

4 样品测定

取肚痛健胃整肠丸适量，按3.3项下方法制成供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，记录色谱图，用标准曲线法以峰面积计算样品中各测定成分的质量分数，结果见表2。

表1 肚痛健胃整肠丸中薄荷脑、愈创木酚和丁香酚加样回收率试验结果Tab.1 Results of recovery tests of menthol，guaiacol andeugenol in Dutong Jianwei Zhengchang Pills

5 讨论

5.1 本品现执行标准操作繁琐，所用溶剂为正己烷，对实验操作者的中枢、周围神经系统有潜在损害。同时，原标准仅对主要的挥发性成分木馏油中的愈创木酚进行了定量，无法整体评判药品的综合质量。为了更好地控制产品质量，本实验改用毒性更小的乙酸乙酯作为溶剂，同时对提取方法及提取时间进行了考察，结果选用超声提取20 min来测定方中的3种主要的挥发性成分，并对其进行定量，简化了操作步骤。

5.2 实验中试验了环己酮、联苯、萘，正十八烷等多种内标物质，根据所测成分极性及色谱行为的差异同时消除进样误差，故选择联苯作为内标物质，采用内标法定量，结果溶剂峰、内标峰和各成分色谱峰均有良好的分离。

表2 样品测定结果 (n=3)Tab.2 Determination results of samples(n=3)

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